رانش ویروس آنفولانزا. ساختار آنتی ژنیک آنتی ژن های معمولی ویروس های آنفلوانزای نوع A هماگلوتینین و نورآمینیداز هستند. ترکیب این پروتئین ها اساس طبقه بندی ویروس های آنفولانزا است. ژنتیک مولکولی ویروس آنفولانزا

Ag معمولی ویروس های آنفلوانزا نوع A - ; ترکیب این پروتئین ها اساس طبقه بندی ویروس های آنفولانزا است. به طور خاص، 13 Ag از ویروس آنفولانزای A جدا شده است انواع مختلفهماگلوتینین و 10 نوع نورآمینیداز. تفاوت های آنتی ژنی بین ویروس های نوع A، B و C تفاوت در ساختار پروتئین های NP و M را تعیین می کند. همه سویه های ویروس های نوع A دارند گروه (اس-) Agدر RTGA شناسایی شد. نوع خاص Ag - هماگلوتینین و نورآمینیداز; تغییر در ساختار آنها منجر به ظهور انواع سرولوژیکی جدید، اغلب در پویایی یک شیوع همه گیر می شود (شکل 2. 26 –2 ). تغییرات در ساختار آنتی ژنی می تواند به دو صورت رخ دهد:

Y Layout، شکل 26-02.

برنج. 26 –2 . نمودار مکانیسم ها, باعث تغییر آنتی ژنی و رانش آنتی ژنی ویروس های آنفولانزا می شود. توضیحات در متن

رانش آنتی ژنی. باعث تغییرات جزئی در ساختار Agناشی از جهش های نقطه ای تا حد زیادی، تغییر در ساختار هماگلوتینین وجود دارد. رانش در پویایی فرآیند اپیدمی ایجاد می شود و ویژگی واکنش های ایمنی را که در نتیجه گردش قبلی پاتوژن در جمعیت ایجاد شده اند کاهش می دهد.

شیفت آنتی ژنی. باعث ظهور یک نوع آنتی ژنیک جدید از ویروس می شود, نامربوط یا از نظر آنتی ژنی دور با انواعی که قبلاً در گردش بودند مرتبط هستند. احتمالاً، تغییر آنتی ژنی در نتیجه نوترکیبی ژنتیکی بین سویه‌های ویروس انسانی و حیوانی یا گردش نهفته در جمعیت ویروسی رخ می‌دهد که پتانسیل اپیدمی آن را به پایان رسانده است. هر 10-20 سال، جمعیت مردم به روز می شود، اما "لایه" ایمنی ناپدید می شود، که منجر به تشکیل همه گیری می شود.

R. G. WEBSTER و W. G. LEIVER i (R. G. WEBSTER و W. G. LAYER)

مقدمه

ویروس آنفلوانزای نوع A1 به دلیل توانایی آن در تغییر ساختار آنتی ژنی خود به شدت در میان عوامل ایجاد کننده بیماری های عفونی انسان منحصر به فرد است به طوری که ایمنی خاص به دست آمده در پاسخ به عفونت با یک سویه محافظت بسیار کمی در برابر ویروس در حال ظهور بعدی ایجاد می کند. تغییرپذیری ویروس آنفولانزا همچنان یکی از اصلی ترین بیماری های همه گیر انسانی است.

دو نوع تنوع آنتی ژنی در ویروس های آنفولانزا یافت شده است: رانش آنتی ژنی (Burnet, 1955) و تغییر آنتی ژنی قابل توجه. رانش آنتی ژنی با تغییرات نسبتاً کوچکی مشخص می شود که عمدتاً در یک خانواده از سویه ها رخ می دهد، که هر یک از آنها به راحتی می توانند با سایر سویه های این خانواده از نظر آنتی ژن های داخلی و سطحی مرتبط شوند. در میان گونه‌های ویروس آنفولانزای A که انسان‌ها را آلوده می‌کنند، هر گونه بعدی جایگزین نوع قبلی می‌شود. این احتمالاً به دلیل مزیت انتخابی است که انواع آنتی ژنی جدید در غلبه بر موانع ایمنی میزبان دارند. رانش آنتی ژنیک مشخصه ویروس های آنفولانزا است نه تنها A، YAO و B.

نوع دوم تنوع آنتی ژنی، که فقط برای ویروس A توضیح داده شده است، شامل تغییرات غیرمنتظره و چشمگیرتری است. به آنها تغییرات آنتی ژنی قابل توجه می گویند. این جابجایی ها در فواصل 15-10 سال اتفاق می افتد (به فصل 15 مراجعه کنید) و با ظهور ویروس های "جدید" آنتی ژنی مشخص می شوند که جمعیت نسبت به آنها مصونیت ندارد و این دقیقاً "ویروس هایی هستند که باعث همه گیری های قابل توجه آنفلوانزا می شوند."

این ویروس‌های «جدید» دارای زیرواحدهای HA1 و NA هستند که کاملاً متفاوت از ویروس‌هایی هستند که قبل از ظهور ویروس جدید در انسان در گردش بودند. یک تغییر قابل توجه می تواند در یک یا هر دو آنتی ژن سطحی رخ دهد. دو بیماری همه گیر آنفولانزا شرح داده شده است که توسط ویروس های متعلق به هر یک از این دو دسته ایجاد می شود (به فصل 15 مراجعه کنید).

آنفولانزا همچنین یک عفونت طبیعی برخی از حیوانات و پرندگان است. ویروس‌های منحصراً از نوع A از خوک‌ها، اسب‌ها و انواع پرندگان از جمله جوجه‌ها، اردک‌ها، بوقلمون‌ها، بلدرچین‌ها، قرقاول‌ها و درناها جدا شده‌اند (مک کوئین و همکاران، 1968؛ پریرا، 1969؛ سازمان بهداشت جهانی، 1972). . قبلاً اعتقاد بر این بود که سطح یک ذره ویروس آنفولانزا از موزاییکی از آنتی ژن ها تشکیل شده است که بخشی از همه سویه ها هستند. از این نوعو این تنوع آنتی ژنی نتیجه حرکت این آنتی ژن ها از موقعیت برجسته به حالت نهفته و بالعکس است. بعدها، مکانیسم دیگری از رانش آنتی ژنی پیشنهاد شد. در حال حاضر، اعتقاد بر این است که تغییرات به طور مداوم در اسیدهای آمینه که تعیین کننده های آنتی ژنی زیر واحدهای HA و NA را تشکیل می دهند، رخ می دهد. آنها نتیجه انتخاب جهش هایی هستند که تغییراتی را در توالی اسید آمینه زیر واحدهای پلی التید نشان می دهند که به نوبه خود توسط جهش RNA ویروس ایجاد می شود. زیرواحدهای هماگلوتین کننده و نورآمینیداز این ویروس های "جدید" از نظر آنتی ژنی کاملاً با زیرواحدهای ویروس هایی که قبل از ظهور سویه های جدید در بین انسان ها گردش می کردند متفاوت است. ما فکر می کنیم که ویروس "جدید" نتیجه جهش یک ویروس آنفلوانزای انسانی قبلی نیست، بلکه از نوترکیبی ژنتیکی بین یک ویروس انسانی و یکی از گونه های متعدد ویروس آنفولانزای A که میزبان طبیعی آن حیوانات یا پرندگان هستند، ناشی می شود. با ظهور، ویروس "جدید" جایگزین "قدیمی" می شود که به طور کامل از جمعیت انسانی ناپدید می شود.

تغییرات آنتی ژنی قابل توجهی در ویروس های آنفلوانزای B هنوز شناسایی نشده است. Pereira (1969) پیشنهاد کرد که فقدان تغییرات آنتی ژنی قابل توجه در ویروس های آنفولانزا B ممکن است به دلیل عدم وجود چنین ویروس های آنفلوانزا در میان حیوانات و پرندگان پایین تر باشد.

تنوع آنتی ژنی فقط شامل زیرواحدهای HA و NA است. پروتئین های داخلی ویروس (آنتی ژن نوکلئوتیروئید و ماتریکس یا پروتئین M غشایی) تا حد زیادی ثابت هستند. از بین دو آنتی ژن سطحی، HA مهمتر است، زیرا آنتی بادی های این آنتی ژن، عفونت ویروس را خنثی می کنند.

II. آنفولانزا در جنبه تاریخی (همچنین به فصل 15 مراجعه کنید)

الف. شواهدی برای تغییرات آنتی ژنی

بیماری شبه آنفولانزا در قرون گذشته مکررا گزارش شده است (هیرش، 1883). این بیماری یا به شکل همه‌گیری پدیدار شد، بخش بسیار زیادی از جمعیت را پوشش داد و تقریباً در سراسر جهان گسترش یافت، یا نشان دهنده شیوع‌های محلی بود. تا سال 1933، زمانی که ویروس آنفولانزا برای اولین بار جدا شد (از انسان. توجه داشته باشید.) 1، نمی توان با قطعیت گفت که آیا یک بیماری همه گیر معین واقعاً توسط یک ویروس آنفولانزا ایجاد شده است یا خیر. با این حال، ویژگی های اپیدمی شرح داده شده در اسناد تاریخی نشان می دهد که این همه گیری ها به خوبی می تواند توسط ویروس های آنفولانزا ایجاد شده باشد. اگرچه سایر بیماری های عفونی ممکن است علائم مشخصه آنفولانزا را داشته باشند، اما فقط آنفولانزا باعث اپیدمی های ناگهانی می شود که چندین هفته طول می کشد و به همان صورت ناگهانی ناپدید می شوند (Burnet, White, 1972). مطالعات سرولوژیکی انجام شده بر روی افراد مسن نشان می دهد که اپیدمی های قبلی آنفولانزا در سال های نه چندان دور رخ داده است. زمان های دور (مولدر، مازورل، 1958).

اولین اپیدمی شناخته شده آنفولانزا در آلمان در سال 1170 ثبت شد (هیرش، 1883)، و از منابع تاریخی دیگر فهرست نسبتاً کاملی از اپیدمی ها در اروپا که از سال 1500 شروع می شود را می توان تهیه کرد. فقط شدیدترین اپیدمی ها در اینجا ذکر خواهند شد. جزئیات بیشتر را می توان در هیرش (1883)، کریتون (1891، 1894)، برنت و کلارک (1942) و برنت و وایت (1972) یافت.

اپیدمی 1781-1782 در سال 1781 در آسیا شروع شد و سپس در آغاز سال 1782 از طریق روسیه به اروپا گسترش یافت. این بیماری همه گیر باعث مرگ و میر نسبتا کمی شد، اما ویژگی خاص آن این بود که این بیماری بیشتر افراد میانسال را تحت تاثیر قرار می داد تا کودکان و سالمندان. اپیدمی های بسیار شدید نیز در سال های 1803، 1833، 1837 و 1847 رخ داد. اپیدمی 1847-1848 در مارس 1-847 در روسیه شرقی آغاز شد و در زمستان 1847-1848 به اروپا و انگلستان رسید. این بیماری همه گیر باعث مرگ و میر بسیاری به خصوص در میان افراد مسن شده است.

همه گیری سال 1889 نیز از روسیه به اروپا آمد و در اوایل سال 1890 به انگلستان و آمریکا رسید. این بیماری با سرعت مسافران گسترش یافت. پس از ظهور ویروس در سال 1889، چهار موج عفونی دیگر در هر یک از سال های بعد رخ داد. شیوع دوم و سوم باعث مرگ و میر بسیاری به ویژه در میان کودکان و سالمندان شد. مطالعات سرولوژیکی (Mulder and Mazurel, 1958) و سایر مطالعات (Pereira, 1969) نشان می دهد که ویروس های مربوط به ویروس های آنفلوانزای آسیایی، هنگ کنگ و سروتیپ 2 اسبی در آن زمان وجود داشتند.

شدیدترین همه گیری آنفلوانزا در سال های 1918-1919 رخ داد. منشا این بیماری همه گیر به طور دقیق مشخص نیست، اما Burnet و Clarke (1942) معتقدند که ویروس ممکن است به طور مستقل در آسیا و اروپا توسعه یافته باشد، یا ممکن است به اروپا معرفی شده باشد (توسط کارگران چینی. این بیماری همه گیر به صورت موجی آمد و یک نفر را کشت. به طور متوسط ​​بین 20 تا 50 میلیون نفر). "از زندگی انسان ها، عمدتا جوانان. همه گیری 1918-1919 احتمالاً توسط یک سویه ویروس آنفولانزای A مرتبط با ویروس آنفلوانزای خوکی ایجاد شد. این اولین بار توسط Laidlaw (1935) و Shope پیشنهاد شد. (1936)، اما ممکن است که این ویروس از مطالعات فشرده کاهش با افزایش سن آنتی بادی ها به ویروس آنفلوانزای خوکی در سرم های انسانی توسط داونپورت و همکاران (1953-1964)، هنسی و همکاران (1965) منتقل شده باشد، نشان می دهد که ویروس ایجاد اپیدمی 1919-1918، از نظر سرولوژیکی به ویروس آنفلوانزای خوکی مربوط می شود.

تعداد بالای مرگ و میر باعث شد که Burnet و Clarke (1942) پیشنهاد کنند که این ویروس ممکن است از بیماری‌زایی غیرعادی برخوردار بوده باشد. به گفته محققان دیگر (ژدانوف و همکاران، 1958؛ کیلبورن، 1960)، شرایط جنگی و کمبود آنتی بیوتیک ها می تواند علت مرگ و میر بالای عفونت های باکتریایی ثانویه باشد. زیرا ویروس همه گیر 1781 «g.» که جوانان را نیز تحت تأثیر قرار داد، باعث چنین میزان مرگ و میر بالایی نشد.

ب. تغییرات آنتی ژنی در ویروس در دوره پس از 1933

پس از شناسایی اولین ویروس آنفولانزا، که به عنوان H0N1 نامگذاری شد (سازمان بهداشت جهانی، 1971)، تغییرات آنتی ژنی در سال 1947، زمانی که ویروس H1N1 ظاهر شد (به عنوان مثال، A/FM/1/47)، در سال 1957، زمانی که ویروس های H2N2 (به عنوان مثال A/Singapore/1/57) و در سال 1968 زمانی که ویروس هنگ کنگ ظاهر شد (A/Hong Kong/1/68). تغییر آنتی ژنی در سال 1947 شامل تغییر در آنتی ژن هماگلوتینه کننده (از H0N1 به H1N1) بود؛ در سال 1957، هر دو آنتی ژن HA و NA به طور کامل با آنتی ژن های ویروس های سال های قبل (از H1N1 به H2N2) متفاوت بودند و در سال 1968 نوع هنگ کنگ تفاوت آنتی ژنی قابل توجهی در HA (از H2N2 تا H3N2) نشان داد.

سویه آسیایی ویروس آنفولانزا (H2N2)، که برای اولین بار در یکی از استان های چین در سال 1957 ظاهر شد، حاوی زیرواحدهای HA و NA بود که از نظر آنتی ژنی کاملاً با زیر واحدهای H0N1 و H1N1 ویروس های آنفولانزا که قبلاً در بین انسان ها در گردش بودند متفاوت بودند. این گونه از ویروس آنفلوانزا باعث ایجاد یک بیماری همه گیر بی سابقه در تاریخ شد (Burnet, White, 1972) اما تعداد مرگ و میرها کم بود. آخرین و آخرین پاندمی آنفولانزا توسط ویروس A/Hong Kong/68 ایجاد شد، که در آن زیرواحدهای NA مشابه ویروس «قدیمی» آسیایی A2 بودند و زیرواحدهای HA کاملاً از نظر آنتی ژنی متفاوت از زیرواحدهای آنفولانزا بودند. سویه آسیایی "قدیمی" (کلمن و همکاران، 1968؛ شولمن و کیلبورن، 1969؛ وبستر و لاور، 1972).

ب. ویژگی های کلی همه گیری های قبلی

ماهیت همه گیر آنفولانزا در انسان نشان می دهد که در فواصل نامنظم، بشر تحت تأثیر ویروس هایی با عوامل تعیین کننده آنتی ژنی جدید قرار می گیرد. اطلاعات فوق نشان می دهد که این همه گیری ها اغلب از جنوب شرق آسیا سرچشمه می گیرند و با سرعت مسافران گسترش می یابند. بیشتر بیماری های همه گیر باعث افزایش مرگ و میر در میان کودکان و سالمندان شد، اما حداقل دو بیماری همه گیر (1781 و 1918) باعث افزایش مرگ و میر در میان جوانان شد.

III. ویژگی های ژنوم ویروس آنفولانزا

ویروس آنفولانزا دارای یک ژنوم تکه تکه شده است که از حداقل هفت قطعه RNA تک رشته ای تشکیل شده است. چنین تکه تکه شدن به ژنوم اجازه می دهد تا در طول عفونت های مخلوط با سویه های مختلف "بازآرایی" ("بازترکیب") شود (به فصل 7 مراجعه کنید) و ممکن است برای آنتی ژنی اساسی باشد. تغییرپذیری ویروس آنفلوانزا A. پس از عفونت مختلط سلول ها با دو ویروس مختلف آنفولانزای A، نوترکیب های ویروسی با فرکانس بالا تشکیل می شوند. فرکانس بالای نوترکیبی بین ویروس های آنفلوانزای A برای اولین بار توسط Burnet نشان داده شد (Burnet, Lind, 1949, 1951) و به طور مکرر توسط سایر محققانی که در این زمینه کار می کنند تایید شده است (هیرست، گوتلیب، 1953، 1955؛ سیمپسون و هرست، 1961؛ سیمپسون، 1964؛ سوگیورا و کیلبورن، 1966).

فرکانس بالای نوترکیبی بین ویروس‌های آنفولانزا امکان تشکیل ویروس‌های آنتی ژن هیبریدی را در طول دوره عفونت مختلط در آزمایش‌های in vitro و in vivo می‌دهد. برای اولین بار، تایید بیوشیمیایی این مورد توسط لاور و کیلبورن (1966) ارائه شد، که دریافتند یک ویروس نوترکیب X7 از نظر ژنتیکی پایدار جدا شده از سلول‌های آلوده به سویه‌های NW-S (H0N1) و RI / 5+ (H2N2) ویروس آنفولانزا دارای زیر واحدهای HA از ویروس H0N1 است، اما توسط زیر واحدهای NA ویروس H2N2. متعاقباً، بسیاری دیگر از ویروس‌های نوترکیب آنفلوانزای A جدا شده‌اند، و در واقع می‌توان آنها را «به ترتیب درست» ایجاد کرد (Webster, 1970) (همچنین به 39 مراجعه کنید). تشکیل سویه های جدید آنفولانزا با نوترکیبی بین ویروس های حیوانی (یا پرندگان) و انسانی در بخش VII مورد بحث قرار گرفته است. شواهدی به دست آمده است که نشان می دهد سویه های ویروسی که باعث همه گیری آنفولانزا می شوند نیز می توانند از این طریق در طبیعت رخ دهند. نوترکیبی بین ویروس های آنفلوانزای B نیز امکان پذیر است (پری و برنر، 1953؛ پری و همکاران، 1954؛ لدینکو، 1955؛ توبیتا و کیلبورن، 1974)، اما نوترکیبی بین ویروس های آنفلوانزای A و B هرگز یافت نشد.

IV. زیر واحدهای هماگلوتینین

و نورآمینیدازها بسیار متغیر هستند

آنتی ژن ها

فعالیت های هماگلوتیناسیون و نورآمینیداز ویروس آنفولانزا با زیر واحدهای مختلفی مرتبط است (Laver and Valentine, 1969; Laver, 1973) که لایه ای از خوشه ها را روی سطح ذرات ویروسی تشکیل می دهند (32).

هماگلوتینین آنتی ژن سطحی اصلی است. مسئول تعامل ویروس با سطح سلول و القای آنتی بادی های خنثی کننده است. تنوع آنتی ژن هماگلوتینه کننده به ظهور اپیدمی های جدید آنفلوانزا کمک می کند.

آنزیم NA دومین آنتی ژن سطحی ویژه ویروس ذره ویروس آنفولانزا است. از نظر آنتی ژنی، NA کاملاً با HA متفاوت است (Seto, Rott, 1966; Webster, Laver, 1967). آنتی بادی های NA عفونت ویروس را خنثی نمی کنند. به جز در غلظت‌های بسیار بالا)، اما آزادسازی ویروس از سلول‌های آلوده را بسیار کند می‌کنند (Seto and Rott, 1966؛ Webster and Laver, 1967؛ Kilbourne et al., 1968؛ Becht et al., 1971؛ Dowdle et al. .، 1974)، و این آنتی بادی ها ممکن است نقش مهمی در کاهش تکثیر ویروسی در داخل بدن و در جلوگیری از گسترش داشته باشند.

عفونت ها (شولمن و همکاران، 1968). تنوع معمول در NA نیز ذاتی است، تغییرات این آنتی ژن شاید برای اپیدمیولوژی آنفولانزا کمتر قابل توجه باشد.

زیر واحدهای هماگلوتینه ساز ساختارهای میله ای شکل گلیکوپروتئین در مقطع مثلثی با وزن مولکولی نسبی حدود 215000 هستند (33). آنها "تک ظرفیتی" هستند و (در تعامل با

گیرنده های سلولی فقط در یک انتها (لاور و ولنتاین، 1969). زیرواحدهای جدا شده زمانی که در حضور یک ادجوانت بر روی حیوانات تجویز می شوند، بسیار ایمنی زا هستند. هر ذره ویروسی تقریباً شامل 400 زیر واحد HA است (تیفانی بلو، 1970؛ شولز، 1973؛ لایه، 1973).

زیر واحدهای HA از دو پلی لپتید با وزن مولکولی نسبی حدود 25000 و 55000 تشکیل شده است (Compans et al., 1970; Schulze, 1970; Laver, 1971; Skehel and Schild, 1971; Stanley and Haslam, 1972; K. 1972; ، 1972). آنها به عنوان اسکلیپپتیدهای سنگین و سبک HA1 و HA2 تعیین می شوند. Oi6e، این زنجیره‌ها به‌عنوان یک پیش‌ساز تول-پلتید-نیک با وزن مولکولی حدود 80000 سنتز می‌شوند که در تعدادی از سلول‌ها به پلی‌پپتیدهای سبک و سنگین تقسیم می‌شوند (Lazarowitz et al., 1971, 1973; Skechel, 1972; کلنک و همکاران، 1972). در زیرواحدهای دست نخورده، زنجیره های سنگین و سبک توسط پیوندهای دی سولفیدی به هم متصل می شوند و یک دایمر را تشکیل می دهند و هر زیر واحد HA از دو یا سه دیمر تشکیل شده است (Laver, 1971).

زیرواحدهای HA دارای دروگرهای آبگریز و آبدوست هستند (34). انتهای آبدوست مسئول فعالیت بیولوژیکی زیر واحد است، در حالی که انتهای آبگریز به لیپیدهای پوشش ویروسی متصل می شود. خواص آبگریز زیر واحد ظاهراً با انتهای C مرتبط است. از زنجیره پلی پپتیدی قالب (HA2) (Skehel and Waterfield، 1975) (OM. Ch. 3).

زیرواحد نورآمینیداز یک ساختار گلیکوپروتئینی با وزن مولکولی نسبی حدود 240000 است که از سرهای مربع شکل و جعبه ای شکل از 8-8-4 گودال تشکیل شده است که IK در مرکز آن یک نخ با دم پراکنده یا با یک حلقه متصل است. سر کوچک در انتها (، 35) (Laver and Valentine, 1969; Wrigley et al., 1973). زیرواحدهای جدا شده دارای فعالیت آنزیمی کامل هستند و در صورت تجویز به حیوانات با یک ادجوانت بسیار ایمنی زا هستند. هر ذره ویروسی تقریباً شامل 80 زیر واحد NA است (Schulze, 1973; Laver, 1973). با این حال، تعداد زیر واحدهای NA در یک ذره ویروسی می تواند بسته به سویه متفاوت باشد (Webster et al., 1968; Webster and Laver, 1972; Palese and Schulman, 1974) و همچنین به نوع سلول میزبان که روی آن ویروس رشد کرده بود

زیرواحدهای NA شامل چهار لولیپپتید لیکوزیله با وزن مولکولی نسبی حدود 60000 است که توسط پیوندهای دی سولفیدی که در رشته یا دم آن قرار دارند به یکدیگر متصل شده اند (همچنین به فصل 4 مراجعه کنید). در بیشتر سویه ها، این 4 پلی پپتید به نظر یکسان هستند. با این حال، در برخی از سویه ها، NA، (احتمالاً شامل دو نوع پلی پپتید است که اندازه آنها کمی متفاوت است (Webster, 1970a; Skechel, Schield, 1971; Bucher, Kilbourne, 1972; لاور و بیکر، 1972؛ لازدین و همکاران، 1972؛ داونی و لیور، 1973؛ ریگلی و همکاران، 1973).

محل فعال آنزیم و عوامل آنتی ژنی در نواحی مختلف سر زیرواحد NA قرار دارند (Ada et al., 1963; Fazekas de St. Groth, 1963) و این سرها دارای خواص آب دوست هستند. "دم" NA آبگریز است و برای اتصال زیرواحد به پوشش لیپیدی ویروس عمل می کند (Laver and Valentine, 1969) (نگاه کنید به "29").

الف. جداسازی و جداسازی زیر واحدها روی و NA

برای برخی از سویه های ویروس آنفولانزا، زیر واحدهای HA و NA خالص و دست نخورده را می توان با الکتروفورز بر روی نوارهای استات سلولز پس از اختلال در ذرات ویروسی با SDS بدست آورد (Laver, 1964, 1971؛ Laver and Valentine, 1969؛ Downie, 1973). موفقیت جداسازی هر یک از این زیر واحدها با استفاده از این تکنیک به مقاومت آنها در برابر دناتوره شدن SDS در دمای اتاق بستگی دارد. بر اساس این معیار می توان ویروس های آنفولانزا را به چهار گروه تقسیم کرد.

1. ویروس هایی با زیر واحدهای HA مقاوم به الکل دناتوره شده

SDS. وقتی ویروس هایی از این نوع از بین می روند، SDS و electro

تروفورز بر روی نوارهای استات سلولز، تمام پروتئین های ویروسی،

به غیر از زیر واحدهای HA، آنها به صورت آنیون مهاجرت می کنند. هماگلوتی

nin که به عنوان یک کاتیون مهاجرت می کند را می توان به صورت خالص جدا کرد

با بازسازی کامل فعالیت بیولوژیکی شکل می گیرد

تحت شرایطی که پیوندهای کووالانسی را از بین نبرد [به عنوان مثال

اندازه گیری ها: A/Bel/42 (H0N1)].

2. ویروس هایی با زیر واحدهای NA مقاوم به دناتوره

SDS. زیر واحدهای NA خالص و فعال می توانند باشند

با روشی که در بالا توضیح داده شد از این ویروس ها جدا می شوند (به عنوان مثال

اندازه گیری ها: B/LEE/40).

3. ویروس هایی که نه HA و نه NA در برابر دنا مقاوم نیستند

تورهای SDS در این حالت، تمام پروتئین های ویروسی مهاجرت می کنند

به عنوان آنیون و هیچ یک از زیر واحدهای سطحی نمی توانند

می توان با روش های توصیف شده جداسازی کرد [به عنوان مثال:

A/NWS/33(H0N1)].

4. ویروس هایی با هر دو زیر واحد HA و NA

مقاوم در برابر دناتوره شدن SDS. برای این ویروس ها، هر دو زیر

واحدها در طول الکتروفورز - به صورت کاتیون ها مهاجرت می کنند

و نمی توان به این شکل تقسیم کرد [به عنوان مثال:

A/سنگاپور؟ 1/57 (H2N2)].

زیر واحدهای HA و NA گروه دوم ویروس ها را می توان همانطور که در 36 نشان داده شده است جدا کرد. در جریان الکتروفورز سلولز استات، آنها با هم به عنوان کاتیون حرکت کردند (نگاه کنید به 31، بالا) و به این ترتیب نمی توان آنها را از هم جدا کرد. با زیرواحدهای HA یا NA حساس به دناتوره شدن SDS، زیرواحدهای ویروس پرندگان HA و NA پایدار با SDS از ذرات ویروس نوترکیب مختل شده با SDS با الکتروفورز بر روی نوارهای استات سلولز (مثلاً 31، IB میانی و پایینی) جدا شدند. و تهیه آنتی سرم "تک اختصاصی".

زیرواحدهای HA و NA را می‌توان از سویه‌های خاصی از ویروس آنفولانزا با درمان ذرات ویروسی با آنزیم‌های اسکروتئولیتیک جدا کرد (Noll و همکاران، 1962؛ ستو و همکاران، 1966؛ کامپس و همکاران، 1970؛ برند، اسکل، 1972؛ نول و همکاران، 1962، 1972؛ برند، اسکل، 1972. Wrigley et al., 1973. با این روش، جداسازی زیر واحدهای سطحی از ذرات ویروسی ظاهراً در نتیجه هضم آبگریز (انتهای زنجیره پلی پنتید، که مسئول اتصال زیر واحدها به لایه لیپیدی هستند، رخ می دهد. با این حال، هضم جزئی باید در سایر نواحی زیر واحد HA نیز رخ دهد، در نتیجه فعالیت هماگلوتیناسیون مختل شده و برخی از عوامل تعیین کننده آنتی ژنی از بین می روند.

ب. جداسازی پلی پپتیدهای هماگلوتینین (HA1 و HA2)

زنجیره های سبک و سنگین زیرواحدهای هماگلوتینه کننده را می توان با الکتروفورز بدن SDS-پلی آکریل آمید جدا کرد. با این حال، برای اهداف آماده‌سازی، بهترین جداسازی با سانتریفیوژ با گرادیان چگالی گوانیدین هیدروکلراید-دی تیوتریتول (Laver, 1971)، که تحت شرایط شکستن پیوند دی سولفید انجام می‌شود، یا با فیلتراسیون تل در محلول گوانیدین هیدروکلراید-دی تیوتریتول به دست می‌آید. 1970 a). به نظر می رسد این جداسازی بر اساس آبگریزی قابل توجه زنجیره پلی پپتیدی سبک باشد. در فرآیند سانتریفیوژ در محلول غلیظ گوانیدین هیدروکلراید - دی تیوتریتول، این پلی پپتید سبک آن را "سریعتر از زنجیره سنگین تجزیه می کند و در طی فیلتراسیون ژل، زنجیر سبک اول ظاهر می شود، ظاهراً به این دلیل که حتی در چنین شدیداً محیط تفکیک، زنجیره سبک iB به عنوان یک مونومر وجود ندارد.

این اظهارات فقط در مورد "زیر واحدهای HA مشتق شده از یک ویروس رشد یافته روی سلول هایی که در آن شکاف کامل پروتئولیتیک قبل از

پلی پپتید HA به NAL و HA2. علاوه بر این، پلی پپتیدهای سنگین و سبک (HA1 و HA2) زیر واحدهای HA تولید شده توسط هضم پروتئولیتیک را نمی توان به این روش جدا کرد، احتمالاً به این دلیل که "مناطق آبگریز زنجیره سبک" در طول هضم از بین می روند (Skehel، Laver، داده های منتشر نشده). . ).

ب. خواص HA1 و HA2

زنجیره های پلی پپتیدی سبک و سنگین ویروس آنفولانزای A، سویه BEL (H0N1)، دارای ترکیب مشابهی از پلی پپتیدها بودند، با این تفاوت که پلی پپتید سنگین به طور قابل توجهی حاوی پرولین بیشتری نسبت به زنجیره سبک بود (لاور و راکر، 1972). با این حال، نقشه‌های پپتیدی محصولات برش تریپتیک این دو زنجیره کاملاً متفاوت بود که نشان‌دهنده یک توالی اسید آمینه متفاوت در این زنجیره‌ها بود (Laver, 1971). هر دو زنجیره پلی پپتیدی حاوی کربوهیدرات هستند، اما تجزیه و تحلیل گلوکزامین نشان می دهد که پلی پپتید سنگین حاوی کربوهیدرات های بسیار بیشتری نسبت به زنجیره سبک است. زنجیره سنگین حاوی 9.4% N-acetylglucosamine و همچنین قندهای خنثی بود. بنابراین، احتمالاً حاوی حدود 20٪ کربوهیدرات است.

D. تعداد ویروس های خاص

عوامل آنتی ژنیک بر روی سطح

زیر واحدها روشن است

تعداد آنتی ژن های مختلف ویروس خاص

تعیین کننده در زیر واحدهای همالگلوتیناسیون ویروس

آنفولانزا ناشناخته است (روی سطح هماگلوتینه

زیر واحدها نیز تعیین کننده های خاص وجود دارد

به سلول میزبان). آزمایشات اخیر نشان داده است

با این حال، که زیر واحد هماگلوتیناسیون سویه گون

cong (H3N2) از ویروس آنفلوانزای انسانی حداقل است

حداقل دو، و احتمالا بیشتر، مختلف ویروس خاص

عوامل تعیین کننده آنتی ژنی کال (Laver et al., 1974).

این به صورت زیر نشان داده شده است: هماگلو

زیر واحدهای رنگی از ویروس آنفولانزا به دست آمد

هنگ کنگ (A/Hong Kong/68، H3N2) و نوع آنتی ژنی آن

الف / ممفیس / 102/72، که در نتیجه آنتی ژن به وجود آمد

رانش آزمایشات ایمونودیفیوژن نشان داده است که زیر واحد

میزبان های ویروس هنگ کنگ/68 حداقل دو نفر دارند

انواع مختلفتعیین کننده های آنتی ژنی، در حالی که

نوع 1972 ظاهراً حداقل سه بار تحمل می شود

عوامل تعیین کننده شخصی (37).

زیرواحدهای هماگلوتینه کننده ویروس های A/Hong Kong/68 و A/Memphis/102/72 یک عامل تعیین کننده مشترک داشتند. آنتی‌بادی‌های این عامل تعیین‌کننده با هر دو ویروس در آزمایش‌های ایمونودیفیوژن، مهار هم آگلوتیناسیون و خنثی‌سازی واکنش متقابل نشان دادند. واضح است که در فرآیند ضد

به دلیل رانش ژنتیکی، ویروس آنفولانزای هنگ کنگ تغییرات قابل توجهی را در یکی از عوامل تعیین کننده "ویژه" خود تجربه کرده است. داده های لاور و همکاران (1974) (پیشنهاد می کند که تعیین کننده های آنتی ژنی مختلف در یک زیر واحد HA محلی هستند و ذرات ویروسی دارای مخلوطی از زیر واحدهای متمایز آنتی ژنی نیستند.

E. محل یابی آنتی ژن سلول میزبان

اگرچه اولین توصیفات آنتی ژن سلول میزبان در ویروس آنفولانزا "(Knight, 1944, 1946)" با شک و تردید مواجه شد، وجود آنها اکنون کاملاً ثابت شده است. وجود چنین آنتی ژن هایی با تعدادی از روش های سرولوژیکی از جمله واکنش های رسوبی (Knight, 1944)، ایمونودیفیوژن (Howe et al., 1967)، تثبیت کمپلمان (Smith et al., 1955)، مهار هماتگلوتیناسیون (Knight, 1944؛ Harboe et al., 1961; Harboe, 1963a) و روش مسدود کردن مهار هماگلوتیناسیون (Harboe, 1963b؛ Laver and Webster, 1966). آنتی ژن سلول میزبان عمدتاً از کربوهیدرات ها تشکیل شده است و به طور جوالی به یولیپپتیدهای زیر واحد HA و NA متصل می شود. پیوندهای آنتی ژن میزبان (و کربوهیدرات ها) با پروتئین های داخلی ذره ویروسی یافت نشد.

یکی از ویژگی های مرموز آنتی ژن میزبان ویروس های آنفولانزا این است که در ویروس های رشد یافته در حفره آلانتویس جنین های مرغ یا بوقلمون (Harboe, 1963a) شناسایی می شود، اما در ویروس های رشد یافته، به عنوان مثال، در حفره آلانتویس اردک شناسایی نمی شود. جنین‌ها، در ریه‌های موش یا در کشت‌های سلولی مختلف، ویروس‌های رشد یافته روی این سلول‌ها در واکنش مهار تماگلوتیناسیون توسط آنتی‌سرم‌های به‌دست‌آمده در برابر عصاره‌های سلول‌های میزبان غیر آلوده، به هیچ وجه مهار نشدند. این احتمالاً به این دلیل است که ویروس رشد کرده است. در این سلول ها، "حاوی کربوهیدرات" سلول میزبان، اما به دلایلی "خواص آنتی ژنی ندارند، یا آنتی بادی های معطوف به آنها، آگلوتیناسیون هم را مهار نمی کنند.

E. نقش آنتی ژن سلول میزبان

جزء کربوهیدرات ممکن است نقش بسیار مهمی در مونتاژ پوشش ویروسی داشته باشد. زیر واحدهای NA و HA جدا شده در غیاب SDS جمع می شوند. این نشان می دهد که این زیر واحدها دارای هر دو انتهای آبگریز و آبدوست (Laver and Valentine, 1969) و احتمالاً جزء کربوهیدراتی سلول میزبان هستند و آبگریزی یک انتهای واحدهای HA و NA را تعیین می کند.

ز. تغییرپذیری آنتی ژنیک زیر واحدها

هماگلوتینین و نورامینیداز شناسایی شد

آنتی سرم MONOSPECIFIC

تا اینکه «اخیراً اعتقاد بر این بود که آنتی ژن V یا پوسته ذرات ویروس آنفولانزا» چیزی غیرقابل تقسیم است، اما اینطور نیست. اکنون مشخص شده است که آنتی ژن V از HA، NA و آنتی ژن ویروسی سلول میزبان تشکیل شده است. در هیچ یک از آثار منتشر شده قبلی، اما روابط آنتی ژنی بین ویروس های آنفولانزا وجود دارد<не принималось во внимание, <в результате чего уровни реакций перекреста ■между данными вирусами зависели от используемых тестов. Так, широко используемая штаммоспецифическая реакция связывания комплемента выявляла перекрестные реакции окзк между нейраминидазными, так и между гемагглютипи-рующими антигенами, :в то время как реакция перекреста между нейраминидазным"и антигенами может выявляться также и в РТГА. Это происходит потому, что в интактном вирусе может возникать «стерическая нейтрализация» нейр-аминидазной активности антителами к гемагглютинину и наоборот (Laver, Kilbourne, 1966; Schulman, Kilbourne, 1969; Easterday et al., 1969; Webster, Darlington, 1969).

رانش آنتی ژنی آنتی ژن های منفرد ویروس آنفلوانزا را می توان با جداسازی این آنتی ژن ها از ذره ویروسی (Webster and Darlington, 1969) یا با "جداسازی ژنتیکی این آنتی ژن ها" (Kilbourne et al., 1967) مطالعه کرد. مطالعات سرولوژیکی دقیق از رانش آنتی ژنی آنتی ژن های فردی ویروس آنفولانزا

V. مکانیسم رانش آنتی ژنی

(آنتی ژن جزئی

تغییر دادن)

الف. مقدمه

دو تظاهرات متمایز تنوع آنتی ژنی مشاهده شده در بین ویروس های آنفولانزای A، یعنی ظهور ناگهانی زیرگروه های آنتی ژنی جدید و رانش تدریجی در یک زیرگروه، احتمالاً به یکدیگر مرتبط نیستند.

به طور کلی پذیرفته شده است که رانش - "جایگزینی پی در پی ویروس های آنفولانزای A با سویه های جدید آنتی ژنی - نتیجه ...

بررسی برهمکنش تنوع جهشی ویروس و انتخاب ایمونولوژیک

اهمیت این مکانیسم انتخاب با تولید تجربی انواع آنتی ژنی با انتشار ویروس های آنفولانزا در حضور مقادیر کمی آنتی سازوروتای تایید می شود (Burnet and Lind, 1949; Archetti and Horsfall, 1950; Isaacs and Edney, 1950; Edney, 1957; لاور و وبستر، 1968) یا در حیوانات تا حدی ایمن (گربر و همکاران،

1955، 1956; مگیل، 1955; حمره و همکاران، 1958). اپیدمیولوژیک

این مشاهدات نیز با چنین مکانیزمی مطابقت دارد که

که توضیح معقولی برای ناپدید شدن دهان ارائه می دهد

سویه های پوسیده از جمعیت انسانی

چندین فرضیه برای توضیح مکانیسم رانش آنتی ژنی ارائه شده است. یکی از آنها (فرانسیس، 1952، 1955، 1960؛ جنسن و همکاران، 1956؛ جنسن، 1957) نشان می دهد که سطح ویروس آنفولانزا از موزاییکی از آنتی ژن های متعلق به همه سویه های یک نوع خاص، اما در سویه های آنتی ژنی منفرد تشکیل شده است. به نسبت های مختلف یا در مکان های مختلف. تنوع آنتی ژنی باید به دلیل جابجایی این آنتی ژن ها بر روی پوشش ویروسی از بیرون زدگی به "موقعیت نهفته" باشد. طبق فرضیه دیگری (هیلمن، 1952؛ مگیل، جوتز، 1952؛ اندروز،

1956، 1957; Takatsy، Furesz، 1957)، آنتی ژن ها به تدریج

در مسیر تغییر حرکت کنید هر دوی این فرضیه ها مستلزم

وجود تعداد نسبتاً زیادی آنتی ژن

اما مولکول های مختلف پروتئین در سطح

جنسن و همکاران (1956) دریافت که در هر یک از سویه‌های موجود در مجموعه وسیعی از ویروس‌های آنفلوانزای A موجود برای تحقیق در سال 1953، تعداد آنتی‌ژن‌های موجود در (مقدارها و (یا) مکان‌های مختلف) به 18 عدد رسید. این داده‌ها را به بسیاری از انواع جدید گسترش داد. از آن زمان کشف شده احتمالاً باید منجر به "پیشنهاد آنتی ژن های بیشتر در هر ویروس شود، به خصوص اگر پذیرفته شود، و احتمالاً

مو، منطقی است که سویه های جدا شده از انسان، خوک، اسب و پرندگان بخشی از یک مجموعه باشند.

وجود چنین "تعداد زیادی از مولکول‌های پروتئینی منفرد در ویروس‌های آنفولانزا را نمی‌توان به ظرفیت کدگذاری RNA ویروسی (Laver, 1964) مرتبط کرد. Fazekas de St. Groth, Webster, 1963, 1964) و بیوشیمیایی (Laver, 1964) داده‌ها با حضور تعداد بسیار محدودی از مولکول‌های پروتئینی متمایز آنتی ژنی روی پوشش ویروسی سازگارتر است.

بر اساس آزمایش‌های اخیر، پیشنهاد می‌شود که رانش آنتی‌ژنی نتیجه انتخاب یک جمعیت ایمنی از ذرات ویروسی جهش‌یافته با «تعیین‌کننده‌های آنتی ژنی تغییریافته، و بنابراین با مزایای رشد در حضور آنتی‌بادی‌ها» است (جدول 26). ثابت کرد که تغییراتی در توالی اسیدهای آمینه در پلی پپتیدهای واحدهای هماگلوتینه کننده جهش‌های آنتی ژنیک جدا شده با انتخاب آنتی‌بادی در سیستم آزمایشگاهی وجود دارد (Laver, Webster, 1968) (شکل 38).

نقشه های پپتیدی نشان داد که در طول رانش آنتی ژنی طبیعی نیز تغییراتی در توالی اسید آمینه هر دو زنجیره پلی پپتیدی سبک و سنگین وجود دارد (39).

این نتایج نشان می دهد که تنوع آنتی ژنی در بین ویروس های آنفولانزا به دلیل تغییرات در توالی اسید آمینه پروتئین های آنتی ژنی آنها است. اگرچه برخی از تغییرات توالی ممکن است تصادفی باشد، با تأثیر کم یا بدون تأثیر بر تعیین کننده های آنتی ژنی، این احتمال وجود دارد که برخی از این تغییرات بر تعیین کننده های آنتی ژنی تأثیر بگذارد.

زیرواحدهای HA، که آنها را کمتر قادر می سازد به طور دقیق با مولکول های آنتی بادی مربوطه "تناسب" داشته باشند. با این حال، آزمایش نشان نمی‌دهد که آیا این تغییرات دقیقاً در تعیین‌کننده‌های آنتی ژنی پروتئین‌های ویروسی وجود دارد یا در برخی مناطق دیگر مولکول.

ویروس‌های آنفولانزا واکنش‌های متقاطع نامتقارن را در RTGA نشان می‌دهند. Fazekas de St.-Groth (1970) ویروس ها را نام برد،

که به روشی مشابه رفتار می کنند، سویه های "سالمند" و "جوانور". علاوه بر این، او "پیشنهاد کرد (Fazekas de St. Groth, 1970) که در فرآیند رانش آنتی ژنی طبیعی، ویروس های "قدیمی" آنفولانزا جایگزین سویه های "جوانتر" می شوند. فرض اخیر تنها با داده های بسیار کمی "تأیید می شود".

ب. آیا می توان جهت رانش را پیش بینی کرد؟

توانایی ویروس آنفولانزا برای دستخوش تغییرات آنتی ژنیک یک مشکل بزرگ باقی مانده است. قبل از شروع تولید واکسن، هر گونه جدید باید جداسازی و شناسایی شود، بنابراین هر نوع جدید این پتانسیل را دارد که تعداد زیادی از افراد را قبل از اینکه توسط واکسن کنترل شود، آلوده کند.

در این راستا، تلاش هایی برای پیش بینی رانش آنتی ژنی در آزمایشگاه انجام شده است، اما کاملاً موفقیت آمیز نبوده است. هانون و فزکاس د سنت. گروت در انستیتو پاستور در پاریس، سویه A/Hong Kong/68 (H3N2) را در حضور غلظت های کمی از آنتی سرم عبور داد. همانطور که نویسندگان پیشنهاد کردند، نشان دهنده نقطه پایانی تکامل در سروتیپ H3 بود و بنابراین یک ویروس از ظهور (که می توان پس از سال 1970 انتظار داشت. این فرض با کشف اینکه نوع لندنی ویروس آنفولانزا که برای اولین بار در سال 1972 جدا شد) تأیید شد (A/England/42/72)، از نظر آنتی ژنی بسیار شبیه به اولین جهش یافته بود. Hannoun و Fazekas de St. Groth یک سال قبل در آزمایشگاه خود به دست آورده بودند (Fazekas de St. Groth, Hannoun, 1973).

امید می رفت که واکسن های مشتق شده از نوع نهایی "قدیمی" محافظت در برابر همه گونه های H3 که می توانند در "انسان" ظاهر شوند. با این حال، ویروس ها (آنفولانزای A که متعاقباً در سال 1973 و 1974 جدا شد (به عنوان مثال، A/Port Chalmers/1 /73)، که از نظر آنتی ژنی از سویه A/England/42/72 متمایز بودند، همچنین به طور قابل توجهی با نوع تولید شده مصنوعی متفاوت بودند، که نشان می دهد در شرایط طبیعی، رانش در جهت پیش بینی شده پیش نمی رود.

در هر صورت، واریانت تولید شده در آزمایشگاه توسط معابر در حضور آنتی سرم تنها در HA رانش شد، در حالی که واریانت های بومی در هر دو HA و NA رانش شدند. بنابراین، این تلاش برای تهیه واکسن "آینده"، lo-tidymoma، ناموفق بود.

ج. امکان تغییرات قابل توجهی که در برخی از عوامل تعیین کننده آنتی ژنی در طول رانش آنتی ژنی رخ می دهد

در بخش IV، نشان داده شد که زیرواحدهای HA ویروس آنفولانزای هنگ کنگ دارای حداقل دو نوع تعیین کننده آنتی ژن هستند و در فرآیند تکامل، با رانش آنتی ژنی آنفولانزای هنگ کنگ، یک ویروس تشکیل شده است (A/Memphis /102/72) که در آن یکی از این عوامل آنتی ژنی است

thermianant یک تغییر آنتی ژنی قابل توجهی را تجربه کرد (مقایسه در اندازه با یک تغییر آنتی ژنی)، در حالی که دیگری "رانده شد" (om. 37). ما اولین مورد از این عوامل را "خاص" و دومی را "عمومی" برای این دو ویروس نامیدیم.<(Laver et al., 1974).

آنتی بادی‌های تعیین‌کننده «ویژه» هیچ واکنش متقابلی را بین این دو ویروس در آزمایش‌های ایمونودیفیوژن، RTGA یا خنثی‌سازی عفونی نشان نمی‌دهند. تعیین کننده (های) دیگر برای هر دو ویروس مشترک بود (اگرچه مقداری رانش آنتی ژنی در این تعیین کننده وجود داشت)، و واکنش های متقابل بین ویروس های هنگ کنگ/68 و ممفیس/72 به دلیل آنتی بادی های یکسان به این "مشترک" یافت شد. تعیین کننده (ها).

حیوانات IB مختلف با درجات مختلف زمانی که با همان آماده سازی زیر واحدهای HA ایزوله ایمن سازی می شوند به عوامل تعیین کننده خاصی پاسخ می دهند. این تغییرات در پاسخ ایمنی ممکن است تغییرپذیری در واکنش‌های متقاطع را توضیح دهد که گاهی اوقات بین دو ویروس هنگام آزمایش با سرم‌های مختلف مشاهده می‌شود.

علیرغم تغییر قابل توجه آنتی ژنی در IB ONE

از عوامل تعیین کننده، نقشه های پپتیدی پلی سنگین و سبک

پپتیدها (HA1 و HA2) زیر واحدهای HA ویروس هنگ کنگ/68

■ و ممفیس/72 تا حد زیادی مشابه بودند (نک

39)، بر اساس آن فرض می شود که در این فرآیند

تکامل ویروس هنگ کنگ و آموزش میم متفاوت

fis/72 در توالی اسید آمینه این پلی پپتیدها

فقط تغییرات نسبتا کوچک رخ می دهد. خیانت

تغییرات در نقشه های پپتیدی به صورت سنگین (HA1) رخ می دهد،

و سبک (HA2) زنجیره پلی پپتیدی. برخی از آنها

ممکن است تغییرات تصادفی باشد، دیگران انتخاب می شوند

تحت فشار آنتی بادی ها

د. تغییرات آنتی ژنی در نورامینیداز

رانش آنتی ژنی در آنتی ژن نورآمینیداز مشاهده شد

ویروس های غیر آنفلوانزا از هر دو نوع A و B (Paniker, 1968;

شولمن و کیلبورن 1969; شیلد و همکاران، 1973; کری و همکاران

1974). احتمالاً با انتخاب (تحت فشار).

آنتی بادی ها) جهش یافته هایی که توالی تغییر یافته دارند

ارزش اسید آمینه در پلی پپتیدهای زیر واحد NA

(کندال و کیلی، 1973). تاکنون امکان دستیابی به آن وجود نداشته است

رانش ژنتیکی در آزمایشگاه آنتی بادی های ضد NA خنثی نیستند

عفونت ویروس zuyut؛ بنابراین این احتمال وجود دارد که

تنوع این آنتی ژن برای بقا اهمیت کمتری دارد

ویروس نسبت به تنوع HA (Seto and Rott, 1966; Dowdle et al.,

E. تغییرپذیری آنتی ژنی ویروس های آنفلوانزا نوع B

رانش آنتی ژنی در بین ویروس‌های آنفلوانزا نوع B تقریباً به همان میزان در بین ویروس‌های آنفلوانزا رخ می‌دهد: نوع A، اما تغییرات آنتی ژنی قابل توجهی که در آن‌ها دیده می‌شود در بین سویه‌های آنفلوانزای نوع B یافت نشده است. رانش آنتی‌ژنی (شامل تغییرات در هر دو آنتی‌ژن - HA و NA (Chakraverty, 1972a, b; Curry et al., 1974) مکانیسم تنوع آنتی ژنی در سویه های B احتمالاً شبیه به ویروس های آنفلوانزا نوع A است، اما «هیچ مطالعه بیوشیمیایی انجام نشده است.

E. تغییرات آنتی ژنی در ویروس های آنفلوانزای پرندگان و حیوانات

تغییرات آنتی ژنی در میان ویروس‌های آنفلوانزا که پستانداران و پرندگان پایین‌تری را آلوده می‌کنند به اندازه کافی مورد مطالعه قرار نگرفته است و اطلاعات کمی در مورد آنها در دسترس است. با این حال، بر اساس برخی نتایج، می‌توان فرض کرد که رانش آنتی ژنی در سویه‌ها (آنفلوانزای پستانداران و پرندگان، اما به میزان کمتری نسبت به ویروس‌های آنفلوانزا که انسان را آلوده می‌کنند) رخ می‌دهد.

رانش آنتی ژنی در ویروس های آنفلوانزای خوکی و اسب (هروتیپ 2) مشاهده شده است (Meier-Ewert et al., 1970; Pereira et al., 1972)، اما هیچ داده ای در مورد رانش آنتی ژنی در ویروس های آنفلوانزای پرندگان وجود ندارد. شاید دلیل این امر این باشد که پرندگان به خصوص پرندگان اهلی کمتر از یک فرد یا اسب زندگی می کنند. در انسان، هر نسخه بعدی از ویروس آنفولانزای A به سرعت به طور کامل جایگزین نسخه قبلی می شود، اما در میان حیوانات و پرندگان، ویروس هایی که با یکدیگر متفاوت هستند اغلب به طور همزمان در گردش هستند.

VI. مکانیسم تغییرات آنتی ژنی (تغییرات آنتی ژنی قابل توجه)

در جریان تغییرات آنتی ژنی نوع دیگر، زیرواحدهای سطحی ویروس تغییرات آنتی ژنی قابل توجهی را تجربه می کنند. با این تغییرات قابل توجه، تغییرات ناگهانی و کاملی در یک یا هر دو آنتی ژن سطحی ایجاد می شود، به طوری که ویروس های "جدید" ایجاد می شوند که در جمعیت نسبت به آنها ایمنی وجود ندارد، این ویروس ها هستند که باعث همه گیری آنفولانزا می شوند.

ویروس های H2N2 آنفلوانزای انسانی یک سیستم طبیعی برای مطالعه جنبه های مولکولی تغییرات آنتی ژنی قابل توجه است. ویروس هایی که در سال 1957 در انسان ظاهر شدند دارای زیرواحدهای HA و NA بودند که از نظر آنتی ژنی کاملاً متفاوت از سویه های H1N1 بودند. ویروس های H2N2

رانش آنتی ژنی را تا سال 1968 تجربه کرد، زمانی که یک سویه همه گیر "جدید" ظاهر شد؛ m هنگ کنگ. ویروس های .A2 (H2N2) و سویه هنگ کنگ (H3N2) در چین منشأ گرفته اند. ویروس هنگ کنگ دارای NA مشابه با ویروس های A2 قبلی بود، اما از نظر آنتی ژنی HA متفاوت بود (کلمن و همکاران، 1968؛ شولمن و کیلبورن، 1969). این به وضوح با استفاده از آنتی سرم های اختصاصی زیر واحدهای HA جدا شده از نمایندگان ویروس های آنفولانزای A2 (رشد شده در جنین جوجه نشان داده شد. این سرم های تک اختصاصی در RTGA با ویروس های رشد یافته در جنین اردک استفاده شدند (Webster, Laver, 1972) که مشکلات استریک را از بین برد. سرکوب هماگلوتیناسیون توسط آنتی بادی های NA و آنتی ژن سلول میزبان، که می تواند هنگام استفاده از سرم به ویروس های کامل رخ دهد.

نتایج این آزمایشات (جدول 27) نشان داد که مطابقت سرولوژیکی بین آنتی ژن های هماگلوتینین سویه های "قدیمی" A2/Asia جدا شده بین سال های 1957 و

1968 و ویروس هنگ کنگ وجود نداشت (1968). در میان سه سویه هنگ کنگ جدا شده در طول 3 سال اول همه گیری آنفولانزا، تنوع بسیار کمی وجود داشت یا اصلاً وجود نداشت (Webster and Laver, 1972). در آن زمان زیر واحدهای "جدید" HA ویروس آنفولانزای هنگ کنگ از کجا آمده اند؟ به نظر می رسد دو دلیل احتمالی برای تشکیل زیرواحدهای هماگلوتینه کننده "جدید" وجود داشته باشد: یا آنها از یک ویروس آنفلوانزای انسانی از قبل موجود جهش یافته اند یا از منبع دیگری مانند ویروس های آنفلوانزای حیوانی یا پرندگان آمده اند.

یک جهش منفرد از ویروس آنفلوانزای "قدیمی" A2/Asia می تواند باعث شود زنجیره های پلی پپتیدی زیرواحدهای HA به گونه ای تا شوند که زنجیره های کاملا جدید تشکیل شوند.

عوامل تعیین کننده آنتی ژن اگر زیرواحدهای HA ویروس آنفولانزای هنگ‌کنگ با چنین جهشی از ویروس‌های A2 قبلی بدست آمده باشند، توالی اسیدهای آمینه در پلی پپتیدهای زیر واحدهای "قدیمی" و "جدید" باید نزدیک باشد. قبلاً، یک تغییر کامل در یکی از تعیین کننده های آنتی ژنی زیر واحدهای HA که در فرآیند رانش آنتی ژنی رخ داده است، شرح داده شد و این "تغییر" در یکی از عوامل تعیین کننده با هیچ "تغییر کلی قابل توجهی" به دنبال "N" همراه نیست. اسیدهای آمینه Osti در پلی پپتیدهای HA. با این حال، اگر زیرواحدهای "جدید" از طریق جهش و انتخاب ایجاد نشوند، بلکه از ویروس آنفولانزای حیوانی ناشی شوند، زنجیره های پلی پپتیدی آنها ممکن است به طور قابل توجهی از نظر توالی اسید آمینه با زنجیره های لولیپاپتید ویروس های "قدیمی" A2/Asia متفاوت باشد.

زیرواحدهای HA از سه سویه آنفولانزای A2/Asia که در سال 1968 قبل از شروع همه‌گیری آنفلوانزای هنگ‌کنگ به‌دست آمدند، و از سه سویه ویروس آنفلوانزای هنگ‌کنگ جدا شده در نقاط مختلف جهان در سال‌های 1968، 1970 و 1971 جدا شده‌اند. به دلیل رانش آنتی ژنی، سه ویروس جدا شده در پایان دوره A2/Asia تفاوت های آنتی ژنی قابل توجهی را نشان می دهند. از سوی دیگر، سه سویه هنگ کنگ که در طول 3 سال اول همه گیری جدید جدا شده اند، تقریباً هیچ گونه تنوع آنتی ژنی را نشان نمی دهند.

زیر واحدهای HA جدا شده از هر یک از این شش سویه ویروسی با تیمار گوانیدین هیدروکلراید و دی تیوتریتول جدا شدند و اهداف سبک و سنگین آنها با سانتریفیوژ جدا شدند (Laver, 1971). هر یک از اهداف پلی پپتیدی جدا شده تریپسینیزه شد و پپتیدهای تریلتیک نقشه برداری شدند. نقشه ها نشان دادند که زنجیره های پلی پپتیدی از زیر واحدهای هماگلوتینه کننده ویروس های A2 "قدیمی" جدا شده در سال 1968 به طور قابل توجهی در ترکیب اسید آمینه با زنجیره های لولیپتید سویه های "جدید" هنگ کنگ تفاوت داشتند (40 و 41). در عین حال، فرض بر این بود که پلی پپتیدهای "جدید" نیستند (با جهش از پلی پپتیدهای "قدیمی" به دست می آیند (Laver, Webster, 1972).

یک توضیح برای این نتیجه، فرض یک جهش تغییر چارچوب است که منجر به پلی پپتیدهایی با توالی اسید آمینه کاملاً متفاوت می شود. با این حال، بعید به نظر می رسد که چنین جهشی، در صورت وقوع، منجر به پلی پپتیدهایی شود که قادر به تشکیل یک واحد هماگلوتینه کننده عملکردی هستند. ثانیاً، جهش‌هایی می‌توانند اتفاق بیفتند که عمدتاً اسیدهای آمینه اساسی را تحت تأثیر قرار می‌دهند، به طوری که نقشه‌های پپتیدهای تریشی می‌توانند به طور قابل‌توجهی بدون هیچ تغییر قابل توجهی در توالی اسید آمینه کلی در لولیللتیدها متفاوت باشند.

اکنون شواهدی به دست آمده است که به برخی از ویروس های آنفلوانزای حیوانی به عنوان پیش سازهای احتمالی ویروس آنفلوانزای انسانی هنگ کنگ اشاره می کند. (Hav7Neq2) جدا شده از اسب ها و اردک ها در سال 1963، یعنی 5 سال قبل از ظهور آنفولانزای هنگ کنگ در انسان، نشان داده شد که از نظر آنتی ژنی نزدیک به سویه هنگ کنگ است (Coleman و همکاران، 1968؛ Masurel، 1968؛ Kaplan، 1969). Zakstelskaja و همکاران، 1969؛ تومووا و ایستردی، 1969؛ کاسل و همکاران، 1969).

زیرواحدهای HA ویروس‌های اسب و اردک با زیر واحدهای سویه هنگ‌کنگ ویروس آنفلوانزای انسانی A/Hong Kong/1/68 (H3N2) در RTGA و در تست ایمونودیفیوژن واکنش متقابل نشان دادند. علاوه بر این، نقشه‌های پپتیدی زنجیره‌های اولی پپتیدی سبک از زیرواحدهای تمپلوتین‌کننده ویروس‌های اسب، utk و انسانی تقریباً یکسان بود، که نشان می‌دهد زنجیره‌های سبک از این سه سویه دارای توالی اسید آمینه تقریباً یکسانی هستند (لاور و وبستر، 1973). . این به وضوح از 42 مشاهده می‌شود، جایی که نقشه‌های پپتیدی زنجیره‌های سبک لولیپپتید از زیر واحدهای HA ویروس آنفولانزای هنگ‌کنگ و از سویه‌های اردک//اوکراین و اسب/میامی (سروتیپ دوم) تقریباً یکسان هستند و به طور قابل‌توجهی با نور لولی‌پپتید تفاوت دارند. نقشه زنجیره ای از ویروس "قدیمی" آسیا/68.

این نتایج نشان می‌دهد که ویروس‌های اسب و پرندگان و ویروس انسانی هنگ‌کنگ می‌توانند از طریق نوترکیبی ژنتیکی از یک اجداد مشترک به وجود آمده باشند و مکانیسم جایگزینی را برای توضیح منشأ ویروس آنفلوانزای هنگ‌کنگ در مقایسه با جهش پیشنهاد می‌کنند.

مطالعات اخیر نشان داده‌اند که سرم پرندگان وحشی حاوی آنتی‌بادی‌هایی است که علیه آنتی‌ژن‌های موجود در ویروس‌های آنفولانزا که انسان را آلوده می‌کنند، هدایت می‌شوند (سازمان بهداشت جهانی، 1972). علاوه بر این، ویروس‌های آنفلوانزا اخیراً از پرندگان وحشی دور از کلنی‌های انسانی جدا شده‌اند، که نشان می‌دهد آنفولانزا برای هزاران سال عفونت طبیعی پرندگان بوده است (Downie and Laver, 1973).

راسموسن (1964) اولین کسی بود که پیشنهاد کرد ویروس‌های آنفلوانزای همه‌گیر از چنین ویروس‌های حیوانی در نتیجه فرآیند نوترکیبی به وجود می‌آیند. متعاقبا، تومووا و پریرا (1965)، کیلبورن (1968) و ایستردی و همکاران (1969) هیبرید آنتی ژنی دریافت کردند. ویروس‌ها با نوترکیبی ژنتیکی در شرایط آزمایشگاهی بین ویروس‌های آنفلوانزای انسانی و سویه‌های ویروس آنفلوانزای حیوانی و پرندگان اخیراً، وبستر و همکاران (1971، 1973) ظهور یک سویه جدید همه‌گیر ویروس آنفولانزا را در آزمایش‌های in vivo تقلید کردند (این موارد بعداً توضیح داده خواهد شد).

VII. شواهد اضافی،

تایید نقش فرآیند

نوترکیبی در مبدا جدید

ویروس های آنفلوآنزای همه گیر

داده های بیوشیمیایی ارائه شده از این نظریه پشتیبانی نمی کند که آنتی ژن HA ویروس هنگ کنگ به دلیل یک جهش واحد از سویه های آسیایی قبلی بوده است. بنابراین، می توان پرسید که آیا داده هایی از مطالعات آزمایشگاهی in vitro یا in vivo یا به ویژه از مشاهدات به دست آمده است؟

in vivo، که از این نظریه حمایت می کند که ویروس های جدید از طریق ترکیب مجدد ایجاد می شوند.

A. داده های آزمایشگاهی

هیبریدهای آنتی ژنی (نوترکیب‌های) بسیاری از ویروس‌های آنفولانزای A پستانداران و پرندگان پس از عفونت مختلط جنین مرغ یا کشت سلولی با ویروس‌های مختلف آنفولانزای A جدا شده‌اند (Tumova, Pereira, 1965؛ Kilbourne, Schulman, 1965؛ Kilbourne, et al., 1965). ؛ کیلبورن، 1968؛ ایستردی و همکاران، 1969). این مطالعات در بررسی های کیلبورن و همکاران خلاصه شده است. (1967) و وبستر و لیور (1971). اکنون آشکار است که ویروس های نوترکیب آنفلوانزای A با آنتی ژن های سطحی مخلوط (Webster, 1970b) یا قدرت رشد (Kilbourne and Murphy, 1960; Kilbourne et al., 1971) یا سایر ویژگی های بیولوژیکی (McCahon and Schild, 1971) ممکن است ساخته شوند. سفارش.

به این ترتیب، ویروس‌های «جدید» آنفولانزا را می‌توان در آزمایشگاه ایجاد کرد، اما اخیراً شواهدی به دست آمده است که نشان می‌دهد نوترکیب و انتخاب ویروس‌های «جدید» می‌تواند در شرایطی نزدیک به طبیعت در داخل بدن نیز رخ دهد (Webster et al., 1971). .

B. IN VIVO DATA

1. نمایش نوترکیبی در سیستم

کیلبورن (1970) اشاره کرد که نوترکیبی بین دو سویه مختلف از ویروس آنفلوانزای نوع A هنوز در حیوانات دست نخورده حتی در شرایط تجربی نشان داده نشده است. برای اینکه مشخص شود آیا نوترکیبی در داخل بدن می تواند اتفاق بیفتد یا خیر، از دو سیستم استفاده شد: در سیستم اول، تنها یکی از ویروس های والدین در حیوان میزبان تکثیر می شود و در دوم، هر دو ویروس والدین زمانی که حداقل یکی از ویروس ها تکثیر می شوند. تکثیر شد، حیوانات سلاخی شدند. سوسپانسیون‌های ریه مستقیماً در غشاهای آلانتویس برای حضور ویروس‌های نوترکیب (آنتی ژنی-هیبرید) مورد بررسی قرار گرفتند.

در سیستم اول، مخلوطی از ویروس آنفلوانزای خوکی - VG"C (A / خوک / ویسکانسین / 1/67) و ویروس دیستمپر پرندگان نوع A - HPV (دانمارک / 27) (43) به خوک ها تزریق شد. پس از تزریق به خوک ها سوسپانسیون ریه جمع آوری شده باعث ایجاد یک ویروس عفونی نمی شود

در سیستم دوم، جایی که هر دو ویروس تکثیر شدند، بوقلمون‌ها با HPV و ویروس آنفلوانزای بوقلمون - CHI (A / I "ndyuk / Massachusetts / 3740/65) آلوده شدند. همانطور که نشان داده شد، هیبریدهای آنتی ژنی دارای CHI (G) بودند. جدا شده در سیستم غشایی آلانتویون -VChP (N) (Hav6Neql) و VChP (N)-VGI (1H) (Havl-N2).

دو ایراد احتمالی در مورد این واقعیت وجود دارد که نوترکیبی توصیف شده در داخل بدن رخ می دهد. اول، نوترکیبی می تواند در سیستم کشت سلولی مورد استفاده برای انتخاب ویروس انجام شود. دوم، مشخص نیست که آیا این هیبریدهای آنتی ژنی از نظر ژنتیکی پایدار هستند و صرفاً ذرات ترکیبی فنوتیپی نیستند.

اولین اعتراض را می توان نادیده گرفت، زیرا انتخاب ویروس های هیبریدی آنتی ژنی مستقیماً در غلظت های بسیار بالایی از آنتی بادی ها انجام شد که باید ویروس های والدین را خنثی کند. به منظور به دست آوردن شواهد دقیق تر مبنی بر اینکه ویروس های هیبریدی ضد بارداری در طول جداسازی در خارج از میزبان آلوده ایجاد نمی شوند، لازم بود پلاک های ویروسی برداشت مخلوط از سوسپانسیون ویروس های کلوخه به دست آوریم تا پلاک های فردی جدا شوند و نمونه های ویروس به دست آمده مشخص شود. 25% پلاک‌های جدا شده از سوسپانسیون ریه بوقلمون‌های آلوده به HPV+HIV ویروس‌های نوترکیب بودند.

پایداری ژنتیکی ویروس‌های نوترکیب با «تجویز ویروس‌های هیبرید آیاتی‌ژنیک کلون‌شده به حیوانات میزبان» ایجاد شده است (Webster et al., 1971). به عنوان مثال، جوجه های آلوده به ویروس هیبریدی آنتی ژنی حامل HPV(N)-HI(N)، (HavliN2) در اثر یک عفونت گذرا مردند و ویروس که پس از 3 روز دوباره از ریه این پرندگان جدا شد، یک کشت خالص ویروس، دارای B4n(H)-(Havl-N2). سایر ویروس های آنتی ژن-تیبرید نیز دوباره از حیوانات جدا شدند و ثابت شد که از نظر ژنتیکی پایدار هستند.

2. انتقال طبیعی ویروس و انتخاب

مطالعات توصیف‌شده نشان داده‌اند که دو سویه مختلف از ویروس آنفولانزای A می‌توانند در شرایط in vivo دوباره ترکیب شوند، اگر به طور همزمان به یک حیوان داده شوند.

با این حال، تجویز همزمان دوزهای زیاد دو ویروس مختلف آنفولانزای A به حیوانات، یک سیستم مصنوعی است که احتمالاً در طبیعت وجود ندارد. به منظور بررسی اینکه آیا نوترکیبی می‌تواند در شرایط طبیعی‌تر اتفاق بیفتد، به دو ویروس مختلف آنفولانزای A اجازه داده شد که به طور همزمان در گله‌ای از پرندگان حساس به ویروس پخش شوند: 30 بوقلمون محافظت‌شده حساس در خانه قرار گرفتند. دو بوقلمون آلوده به HPV دیگر به همان گله وارد شدند. روزانه 2 بوقلمون در هر گله کشتار شدند و نمونه های ریه از نظر وجود هر یک از ویروس های هیبریدی والدین و آیاتیژنیک در غلاف آلانتویس و با جداسازی پلاک ها و شناسایی ویروس ها مورد بررسی قرار گرفتند (Webster) و همکاران، 1971) HPV به سرعت در بین پرندگان محافظت شده گسترش یافت و 3 روز پس از معرفی شناسایی شد؛ 1973) ویروس های آنتی ژنیک هیبریدی حامل HPV(H)-CHI(N) در روز دهم پس از قرار گرفتن در معرض اولیه شناسایی شدند و این ویروس ها را تشکیل می دادند. بخش عمده ای از جمعیت ویروس در سوسپانسیون یکی از پرندگان مورد مطالعه قرار دارد. آزمایش هایی از این دست سه بار انجام شد و در هر آزمایش هیبریدهای آنتی ژنی در روز 9-10 جداسازی شدند. این هیبریدها دارای HSP (H) -VHI (N) بودند، اما هیچ β-هیبرید معکوس جدا نشد. ویروس نوترکیب 1 جدا شده احتمالاً مزیت رشدی نسبت به ویروس‌های والدین داشت. در هر آزمایش، این ویروس به عنوان غالب از یک یا چند پرنده جدا شد. برای اینکه یک سویه "جدید" از ویروس آنفولانزا با این نوع نوترکیب در طبیعت ظاهر شود و به یک سویه اپیدمی تبدیل شود، ویروس "جدید" باید دارای مزیت انتخابی باشد. این مزیت انتخابی ممکن است در اختیار داشتن آنتی ژن هایی باشد که اکثریت جمعیت نسبت به آن ایمن نیستند، اما ویروس باید بتواند به میزبان های حساس نیز منتقل شود. هر دو احتمال در آزمایش های ارائه شده مورد بررسی قرار گرفت. بنابراین، برای مثال، زمانی که ویروس نوترکیب وجود داشت، پرندگان عادی به گله وارد شدند، «اما نوترکیب‌ها نتوانستند سویه غالب شوند و همه پرندگان عادی در تماس به دلیل عفونت با HPV والدین جان خود را از دست دادند.

3. انتخاب و انتقال ویروس "جدید" آنفلوانزا در سیستم in vivo

اگر فرض کنیم که گونه‌های جدیدی از ویروس‌های آنفلوانزای نوع A می‌توانند از طریق نوترکیبی در طبیعت ایجاد شوند، مهم است که نشان دهیم چگونه این ویروس‌ها می‌توانند انتخاب شوند و به سویه‌های غالب یا اپیدمی جدید تبدیل شوند. یک مکانیسم ممکن برای انتخاب می‌تواند این باشد که نوترکیبی و انتخاب انجام شود.<в иммунных животных. Опыты Webster и Campbell (1974) показали, что рекомбинация и селекция «нового» штамма -вируса гриппа может происходить у индеек с низкими уровнями антител к НА одного родительского вируса и к NA другого родительского вируса (45).

بوقلمون هایی با سطوح پایین آنتی بادی به HAI HA (A/incj/Wisconsin/bb) و به NA NA در معرض عفونت ترکیبی TMH و CHI قرار گرفتند. هر دو ویروس والدین و ویروس آنفلوانزای نوترکیب حامل HPV(H)-HIV(N) در نای بوقلمون 1-2 روز پس از عفونت مختلط وجود داشتند. در روز 6 پس از عفونت مخلوط، تنها ویروس نوترکیب B4n(H)iBrH(N) وجود داشت. در روز هفتم، «بعد از یک عفونت مختلط، بوقلمون‌ها مردند و فقط ویروس‌های آنفولانزای نوترکیب با HPV (H)-HI (N) جدا شدند. همه ویروس‌ها در حداکثر رقت‌ها از غشای آلانتویس یا از جنین‌ها جدا شدند و هیچ آنتی‌بادی نداشتند. برای انتخاب ویروس‌های نوترکیب استفاده شد. تمامی پرندگان غیرایمنی وارد شده به گله در روز پنجم بر اثر عفونت گذرا تلف شدند و تنها از آنها جدا شدند (ویروس‌های آنفلوانزای نوترکیب).

پس از عفونت مختلط بوقلمون‌های غیرایمن یا بیش ایمنی، ویروس آنفولانزای نوترکیب ته نشین نشد. بنابراین، عفونت مختلط پرندگانی که دارای سطوح پایین آنتی بادی نسبت به HA یک ویروس و NA ویروس دیگر هستند، شرایط ایده آلی را برای انتخاب نوترکیب ها فراهم می کند. به دنبال عفونت، هر دو ویروس والدین به میزان محدودی تکثیر می‌شوند و در نتیجه خود سیستم ایمنی را تحریک می‌کنند که ویروس‌های والدین را از بین می‌برد. به این ترتیب می توان نوترکیب ها را انتخاب کرد و به شرط داشتن خواص حدت لازم و قابلیت انتقال به افراد دیگر، این نوترکیب ها باعث ایجاد بیماری همه گیر می شوند.

این آزمایش‌ها نشان می‌دهد که تحت شرایط نسبتاً طبیعی بین ویروس‌های مختلف آنفولانزای نوع A نوترکیبی وجود دارد و ویروس‌های جدید ممکن است برتری انتخابی نسبت به هر دو سویه والدین داشته باشند. این آزمایش‌ها ثابت نمی‌کنند که همه ویروس‌های آنفولانزای جدید پستانداران، پرندگان و انسان‌ها با چنین مکانیزمی به وجود می‌آیند، اما ثابت می‌کنند که این مکانیسم یکی از راه‌هایی است که ویروس‌های جدید «از طریق آن» ظاهر می‌شوند.

ب. داده‌های مربوط به نوترکیبی ویروس‌های آنفلوانزا در طبیعت

این آزمایش‌ها هیچ شکی باقی نمی‌گذارند که سویه‌های جدید ویروس آنفولانزا را می‌توان در شرایط in vitro و in vivo به دست آورد و نشان می‌دهد که فرآیندهای مشابهی می‌توانند در طبیعت انجام شوند. 1) مطابقت آنتی ژنی بین ویروس های آنفولانزا جدا شده از انسان و پستانداران و پرندگان پایین تر. 2) عدم وجود طیف میزبانی دقیق از ویروس های آنفولانزا.

1. روابط آنتی ژنی بین ویروس های آنفلوانزای انسانی، پستانداران تحتانی و پرندگان

شواهدی که نشان می‌دهد نوترکیبی بین ویروس‌های آنفلوانزای انسانی و حیوانی در طبیعت امکان‌پذیر است، شواهدی است که نشان می‌دهد برخی از ویروس‌های آنفلوانزای انسانی، پستانداران پایین‌تر و پرندگان، اگر نگوییم یکسان، مشابه (آنتی ژن‌های سطحی) دارند.

الف) روابط آنتی ژنی با واسطه NA. NA برخی از ویروس های آنفلوانزای پرندگان از نظر آنتی ژنی بسیار نزدیک به ویروس های آنفلوانزای اولیه انسانی است. برای مثال، ویروس اردک (A/snake/Germany/1868/68) دارای NA مشابه ویروس‌های انسانی NOSH و H1N1 است (Schild و Newman، 1969). ویروس های آنفولانزا جدا شده از خوک ها نیز حامل آنتی ژن NA هستند که مربوط به آنتی ژن NA ویروس های انسانی است.

H0N1 (Meier-Ewert et al., 1970).به طور مشابه، HGI (A/incj/MA/65) دارای NA مشابه ویروس‌های آنفلوانزای انسانی، اگر یکسان نباشد، دارد. H2N2 (پریرا و همکاران، 1967؛ وبستر و پریرا، 1968؛ شیلد و نیومن، 1969).سایر ویروس های آنفولانزای پرندگان دارای آنتی ژن NA هستند که نزدیک به NA ویروس های آنفلوانزای اسب نوع 1 و 2 (وبستر و پریرا، 1968؛ سازمان بهداشت جهانی، 1971).بنابراین، NA VChP (A/ VChP/ Holland/27) شبیه NA ویروس آنفلوانزای اسب نوع 1 است (A/losha، d/پراگ/1/57). این روابط بین گونه ای در نامگذاری اصلاح شده ویروس آنفلوانزا (سازمان بهداشت جهانی، 1971) استفاده می شود. هشت زیرگروه مختلف از ویروس‌های آنفلوانزای پرندگان وجود دارد که چهار نوع از آن‌ها آنتی‌ژن‌های NA مرتبط با آنتی‌ژن‌های NA ویروس‌های آنفلوانزای انسانی و اسبی دارند.

ب) مطابقت های آنتی ژنی ناشی از آنتی ژن HA. کمتر چنین نمونه‌هایی با ویروس‌های آنفولانزای جدا شده از پستانداران و پرندگان پایین‌تر یافت شده است که آنتی‌ژن‌های HA مرتبط با آنتی‌ژن‌های HA ویروس‌های انسانی داشته باشند. مکاتبات بین HA ویروس های هنگ کنگ، اردک/اوکراین/63 و اسب/نوع 2 در بالا مورد بحث قرار گرفت. خانواده آنفلوانزای آسیا. بنابراین، با جداسازی ویروس‌های بیشتر، تعداد منطبق‌های شناسایی شده افزایش می‌یابد.

2. دایره میزبان

ویروس های آنفولانزای A همیشه به طور دقیق تعریف نشده اند

ویژگی میزبان (نگاه کنید به ایستردی و تومووا، 1971؛

وبستر، 1972). به عنوان مثال، ویروس آنفولانزای هنگ کنگ بود

جدا شده از خوک، سگ، گربه، بابون و گیبون. ویروس

ویروس های آنفولانزای A/Hong Kong (H3N2) نیز اخیراً جدا شده اند

از جوجه ها و گوساله ها (Zhezmer, 1973). این ویروس ها آزمایشی هستند

اما به گوساله ها و جوجه ها منتقل شدند. در تمام موارد

ویروس در میزبانی که از آن جدا شده است تکثیر شده است

کتانی بنابراین، ویروس آنفلوانزای گوساله باعث عفونت تنفسی شد

گوساله ها و ویروس آنفولانزای مرغ تکثیر شدند، اما نشد

علائم بیماری را در جوجه ها نشان داد (Schild, Campbell, Web

آنفولانزای هنگ کنگ rus نمی تواند در جوجه ها تکثیر شود.

در مورد ویروس آنفولانزای هنگ کنگ، واضح است که این ویروس

برای ایجاد عفونت طبیعی سازگار است

از صاحبان دیگر، و در نتیجه شرایط ایجاد شد،

زمانی که عفونت مضاعف و ژنتیکی است

فعل و انفعالات

د. تعمیم داده هایی که نقطه را تأیید می کند

دیدگاه ها در مورد ظاهر سویه های جدید

ویروس آنفلوانزا از طریق نوترکیب

1. بیماری های همه گیر آنفلوانزا در انسان فقط توسط یک ویروس ایجاد می شود.

mi از آنفلوانزای نوع A، و تنها ویروس‌های آنفلوانزا از این نوع بوده‌اند

جدا شده از پستانداران و پرندگان پایین تر. ویروس های آنفولانزا

نوع B دائماً در شرایط آزمایشگاهی دوباره ترکیب می شوند، اما در طبیعت می توانند

ممکن است چنین ترکیبی از اطلاعات ژنتیکی وجود نداشته باشد

پیوند، [که امکان ظهور یک بیماری همه گیر را فراهم می کند

سویه ویروس آنفلوانزا نوع B. نوترکیبی بین ویروس

آنفلوانزای mi نوع A و B نشان داده نشد.

2. داده های بیوشیمیایی که قبلا ارائه شده است

به احتمال بعید اشاره کنید

سویه های همه گیر "جدید" ویروس آنفولانزا توسط نه

معنی جهش از ویروس های قبلی آنفلوانزا

شخص

3. ویروس های جدید آنفولانزا که قادر به ایجاد یک بیماری همه گیر هستند

می تواند از طریق نوترکیب و انتخاب تحت شرایط ایجاد شود

آزمایش in vivo

4. بر اساس مکاتبات آنتی ژنی و بیوشیمیایی

vii بین همالگلوتیناسیون و نورآمینیداز an

ببرهای ویروس های آنفلوانزای انسانی، پستانداران پایین تر

و پرندگان نشان می دهند که تبادلات ژنتیکی وجود دارد

و در طبیعت

شواهد ارائه شده غیرمستقیم است. اگر مشخص شود که سویه های همه گیر آینده دارای آنتی ژن هایی مشابه با آنتی ژن های جدا شده مرتبط با ویروس های آنفلوانزا در حیوانات اهلی یا وحشی هستند، شواهد مستقیم تری به دست می آید (همچنین به فصل 15 مراجعه کنید).

هشتم. تغییرات آنتی ژنی در آینده

ویروس های آنفولانزا و فرصت ها

پیش بینی های متغیر

و کنترل بیماری

الف. توضیحات احتمالی برای ماهیت چرخه ای همه گیری

بر اساس مطالعه آنتی‌بادی‌ها در سرم افراد مسن، می‌توان فرض کرد که ویروس آنفولانزای مشابه ویروس چنار هنگ‌کنگ در زمان‌های گذشته در بین مردم وجود داشته و ممکن است باعث «همه‌گیری آنفلوانزا در پایان قرن نوزدهم» شده باشد. در سرم های افراد مسن، آنتی بادی های ضد ویروس HA آنفولانزای اسب نوع 2 و آسیا نیز با تیترهای پایین شناسایی شد.

نوع 2 شناسایی شده است. این نشان می‌دهد که ویروس‌هایی با زیرواحدهای HA مشابه اما زیرواحدهای NA متفاوت مسئول اپیدمی‌های گذشته و کنونی هستند. شواهد اپیدمیولوژیک نشان می‌دهد که ویروس‌های آنفلوانزای انسانی همه‌گیر در چرخه‌ها ظاهر می‌شوند. فقدان داده‌های همولوژی NA باعث می‌شود که همان "ویروس آنفلوانزای هنگ کنگ" بعید باشد. وجود دارد. در پایان قرن نوزدهم و دوباره در سال 1968. به نظر می رسد احتمال بیشتری وجود دارد که ویروس آنفولانزا که در پایان قرن نوزدهم وجود داشت دارای یک زیر واحد HA بود که شباهت آنتی ژنی کمی به ویروس آنفولانزای هنگ کنگ نشان داد، اما حامل آن بود. یک آنتی ژن کاملاً متفاوت NA بر اساس سرولوژی، این NA از نظر آنتی ژنی با آنفولانزای اسب نوع 2 مرتبط است. چرخه جدیدی از ویروس های آنفولانزا ممکن است در نتیجه ظهور ویروس ها از مخزن مرتبط با حیوانات، با یا بدون نوترکیبی، رخ دهد. مصونیت گله "دیگر از جمعیت انسانی در برابر آن محافظت نمی کند.

یکی دیگر از پدیده های مرتبط با ظهور سویه های جدید آنفولانزا ناپدید شدن آشکار سویه های قبلی است. این می‌تواند صرفاً به دلیل عدم علاقه به جمع‌آوری نمونه‌هایی از ویروس‌های آنفلوانزا باشد که دیگر برای اکثریت جامعه خطرناک نیستند (فنر، 1968)، اما این توضیح بعید است، زیرا عمل نشان داده است که ویروس‌های آنفلوانزای انسانی در کنار هم وجود ندارند. طبیعت برای هر مدت زمان. می توان ناپدید شدن سویه هایی را که در نتیجه رانش آنتی ژنی توسط خود تخریبی ظاهر شدند توضیح داد. از نظر سرولوژیکی ویروس جدیدسطح آنتی بادی های قدیمی را افزایش می دهد و در نتیجه از انتشار ویروس قدیمی جلوگیری می کند. ناپدید شدن سویه های قدیمی (Fazekas de St. Groth, 1970) از هر زیرگروه پس از یک تغییر آنتی ژنی قابل توجه کمتر واضح است و هنوز توضیح رضایت بخشی ندارد.

ب. احتمالات برای کنترل آتی تغییرات آنتی ژنی در ویروس آنفلوانزا

داده های بیولوژیکی، بیوشیمیایی و ایمونولوژیکی ارائه شده در بالا تنها شواهدی را ارائه می دهند که تغییرات آنتی ژنی قابل توجهی در ویروس های آنفلوانزای انسانی با نوترکیبی رخ می دهد. اگر بتوان در طبیعت بازترکیبی بین ویروس‌های آنفولانزای مختلف را که منجر به ظهور سویه‌ی همه‌گیری جدید می‌شود، در طبیعت امکان‌پذیر کرد. نادر بودن چنین رویدادی عملاً این احتمال را رد می‌کند. یک رویکرد جایگزین برای این مشکل این است که ویروس‌های آنفولانزا را از جمعیت‌های حیوانی قبل از همه‌گیری بعدی انسانی جدا کنید.

ایجاد "بانک" ویروس های آنفولانزا. پس از ظهور سویه عامل بیماری همه گیر انسانی بعدی، این ویروس را می توان با ویروس های موجود در "دوچرخه" مقایسه کرد و اطلاعاتی در مورد وقوع آن به دست آورد. جمعیت حیات وحش به عنوان "منابع ویروس های آنفلوانزای جدید تا حد زیادی نادیده گرفته شده است. جمعیت پرندگان جهان برای مدت طولانی تری نسبت به پستانداران یا انسان ها در مستعمرات با تراکم بالا زندگی می کنند. جالب توجه است که هشت زیرگروه مختلف از ویروس های آنفلوانزای پرندگان قبلاً جدا شده اند، شش مورد از آنها - از پرندگان اهلی.بنابراین منطقی است که جستجوی ویروس های آنفولانزا در طبیعت در کلنی های پرندگان بزرگ به ویژه در پایان فصل لانه سازی آغاز شود. چنین مطالعات اکولوژیکی به تعیین تعداد زیرگروه های مختلف ویروس آنفولانزا که در طبیعت وجود دارد کمک می کند. و ممکن است در نهایت نشان دهد که چگونه گونه های جدید در حال ظهور هستند. اگر فقط تعداد محدودی از ویروس های آنفولانزای A وجود داشته باشد، در آینده می توان به کنترل این ویروس ها فکر کرد، که معضل بزرگی برای انسان است.

ادبیات

آدا G. L.، Lind P. E.، Laver W. G. J. gen. Microbiol.، 1963، v. 32، ص. 225.

اندروز سی اچ کالیفرنیا. Med., 1956, v. 84، ص. 375.

اندروز سی H.N.engl. J. Med., 1957, y. 242، ص. 197.

اندروز اس.اچ . در: Perspectives in Virology (M. Pollard, ed.);نیویورک،

وایلی، 1959، ص. 184-196.

آرچتی I. ، Horsfall F. L. J. exp. Med., 1950, v. 92، ص. 441. Becht H., Hammerling U., Rott R. Virology, 1971, v. 46، ص. 337. برندبا M.، Skehel J. J. Nature (لندن ). New Biol., 1972, v. 238، ص. 145. Bucher D. J.، Kilbourne E. D. J. Virol.، 1972، v. 10، ص. 60. Burnet F. M. "Principles of Animal Virology"، 1st ed.نیویورک ، 1955، ص. 380. Burnet F. M.، Clarke E. Influenza،ملبورن ، والتر و الیزا هال اینست، 1942.

Burnet F. M.، Lind P. E. Aust. J. Sci., 1949, v. 22، ص. 109.

Burnet F. M., Lind P. E. J. gen. Microbiol.، 1951، v. 5، ص. 67.

Burnet F. M., White D. O. Natural History of Infectious Disease, ویرایش چهارم.لندن-نیویورک، دانشگاه کمبریج. مطبوعات، 1972، ص. 202-212.

چاکراورتی پی بول. Wld Hlth Org., 1972a, v. 45، ص. 755.

چاکراورتی پی بول. Wld Hlth Org., 1972b, v. 46، ص. 473.

چو سانتی متر. J. Hyg., Epidemiol., Microbiol., Immunol., 1958, v. 2، ص. 1.

کلمن ام تی .، داودل دبلیو آر.، پریرا اچ. جی.، شید جی سی، چانگ دبلیو. کی-لانست، 1968، ج. 2، ص. 1384.

Compans R. W.، Klenk H. D.، Caliguiri L. A.، Choppin P. W. Virology، 1970

آنفولانزای A/H1N1 به عنوان یک عفونت نوظهور معمولی: ویژگی های کلی ویروس های آنفولانزا، تنوع، ظهور سویه های همه گیر جدید

ویروس های آنفولانزا - ویروس های حاوی RNA - متعلق به خانواده هستند. Orthomyxoviridae و به ویروس های A، B و C تقسیم می شوند (جدول 1).

میز 1.

ویژگی های مقایسه ای ویروس های آنفولانزا

شاخص	نوع A	نوع B	نوع C
شدت بیماری	++++	++	+
مخزن طبیعی	بخور	خیر	خیر
همه گیری های انسانی	تماس می گیرد	باعث نمی شود	باعث نمی شود
اپیدمی های انسانی	تماس می گیرد	تماس می گیرد	ایجاد نمی کند (فقط بیماری پراکنده)
تغییرات آنتی ژنی	شیفت، رانش	دریفت	دریفت
ژنوم قطعه بندی شده	آره	آره	آره
حساسیت به ریمانتادین	حساس	حساس نیست	حساس نیست
حساسیت به زانامیویر	حساس	حساس	-
گلیکوپروتئین های سطحی	2 (HA، NA)	2 (HA، NA)	1 (HA)

ویروس آنفولانزا دارای شکل کروی و اندازه 80-120 نانومتر است. هسته با یک زنجیره RNA منفی تک رشته ای، متشکل از 8 قطعه که 11 پروتئین ویروسی را کد می کند، نشان داده می شود.

ویروس های آنفولانزای A به طور گسترده در طبیعت پراکنده هستند و هم انسان و هم طیف وسیعی از پستانداران و پرندگان را تحت تاثیر قرار می دهند. ویروس های آنفلوانزای نوع B و C تنها از انسان جدا شده اند.

از نظر اپیدمیولوژیکی 2 زیرگروه از ویروس آنفولانزای A مهم هستند - H3N2 و H1N1 و ویروس آنفلوانزا نوع B (A.A. Sominova و همکاران، 1997؛ O.M. Litvinova و همکاران، 2001). نتیجه چنین گردش مشترک ایجاد اپیدمی های آنفلوانزا با علل مختلف در یک فصل اپیدمیولوژیک در کشورهای مختلف بود. ناهمگونی جمعیت ویروس های همه گیر نیز به دلیل ماهیت واگرای تنوع ویروس های آنفولانزا افزایش می یابد، که منجر به گردش همزمان ویروس های متعلق به شاخه های تکاملی مختلف می شود (O.M. Litvinova et al., 2001). در این شرایط، پیش نیازهایی برای عفونت همزمان انسان با پاتوژن‌های مختلف ایجاد می‌شود که منجر به تشکیل جمعیت‌های مختلط و دسته‌بندی مجدد هم بین ویروس‌های زیرگروه‌های هم‌گردش و هم در میان سویه‌های درون زیرگروه یکسان می‌شود (O.I. Kiselev et al., 2000).

طبقه بندی انواع ویروس آنفلوانزا بر اساس تفاوت آنتی ژنی بین دو گلیکوپروتئین سطحی، هماگلوتینین (HA) و نورآمینیداز (NA) است. بر اساس این طبقه بندی، ویروس های آنفولانزا به 3 نوع تقسیم می شوند - ویروس های آنفلوانزا نوع A، نوع B و نوع C. 16 زیرگروه HA و 9 زیرگروه NA وجود دارد.

برنج. 1. طبقه بندی ویروس های آنفولانزای A و گونه های حیوانات و پرندگان - میزبان های میانی و نهایی در زنجیره انتقال عفونت به انسان.
اخیراً زیرگروه 16 (H16) هماگلوتینین کشف شده است
نکته: ∗ HA 7 و NA 7-NA8 نیز در اسب یافت شد

روی انجیر شکل 1 زیرشاخه های ویروس آنفولانزای A و میزبان های واسطه و مخازن طبیعی آنها (پرندگان مهاجر) را نشان می دهد. میزبان اصلی ویروس های آنفولانزای A آن دسته از گونه هایی هستند که به آنفولانزا حساس هستند.

در جمعیت انسانی، ویروس آنفولانزای A تنها از سه زیرگروه با HA1، HA2 و HA3 تاکنون شناسایی شده است. در عین حال، ویروس ها فقط حاوی دو نوع نورآمینیداز هستند - NA1 و NA2 (شکل 1). گردش خون پایدار آنها در طول قرن گذشته از زمان همه گیری 1918 ثابت شده است (R.G. Webster et al., 1978; K.G. Nicholson et al., 2003).

ویروس های آنفولانزای A (به میزان کمتر B) توانایی تغییر ساختار HA و NA را دارند. ویروس آنفولانزای A با دو نوع تنوع مشخص می شود:

• جهش های نقطه ای در ژنوم ویروسی با تغییر متناظر در HA و NA (رانش آنتی ژنی).
• جایگزینی کامل یک یا هر دو گلیکوپروتئین سطحی (HA و NA) ویروس با دسته بندی مجدد / نوترکیب (تغییر آنتی ژنی)، که منجر به یک نسخه اساسی جدید از ویروس می شود که می تواند باعث همه گیری آنفولانزا شود.

برای ویروس آنفولانزای B، تنوع آنتی ژنی تنها با رانش، tk محدود می شود. به نظر نمی رسد که در میان پرندگان و حیوانات مخزن طبیعی داشته باشد. ویروس آنفولانزا C با ثبات بالای ساختار آنتی ژنی مشخص می شود و تنها شیوع موضعی و موارد پراکنده بیماری با آن همراه است.

مورد علاقه ظهور گونه های جدید ویروس آنفولانزادر جمعیت انسانی و بیماری های همه گیر مرتبط (شکل 2). روی انجیر جدول 2 تغییرات آنتی ژنی اصلی مرتبط با همه گیری های قرن بیستم ناشی از ویروس آنفولانزای A را نشان می دهد:

• در سال 1918 بیماری همه گیر توسط ویروس H1N1 ایجاد شد.
• در سال 1957 - سویه H2N2 A/Singapore/1/57;
• در سال 1968 - سویه H3N2 A/Hong Kong/1/68;
• در سال 1977 - سویه H1N1 A / اتحاد جماهیر شوروی / 1/77 (بسیاری از دانشمندان این را یک بیماری همه گیر نمی دانستند، اما با ظهور این سویه، وضعیتی با گردش همزمان 2 سویه از ویروس آنفلوانزای A - H3N2 و H1N1).

در سال 1986، ویروس A/Taiwan/1/86 باعث یک اپیدمی گسترده آنفولانزای A/H1N1 در چین شد که تا سال 1989 ادامه داشت. انواع رانش این ویروس تا سال 1995 زنده ماندند و باعث شیوع موضعی و موارد پراکنده شدند. بر اساس نتایج مطالعات بیولوژیکی مولکولی، جهش های متعددی در ژنوم ویروس A/H1N1 در این سال ها به وجود آمد. در سال 1996، دو نوع آنتی ژنی ویروس آنفولانزای A/H1N1 ظاهر شد: A/Bern و A/Beijing، ویژگی آنها نه تنها آنتی ژنی، بلکه از هم گسیختگی جغرافیایی نیز بود. بنابراین، در روسیه، ویروس آنفولانزای A/Bern در اپیدمی آنفولانزای 1997-1998 مشارکت فعال داشت. در همان فصل، گردش سویه های ویروس A/Beijing در شرق کشور به ثبت رسید. بعداً در سال 2000-2001. ویروس آنفولانزا A/H1N1 عامل اپیدمی آنفولانزا در روسیه شده است. ویروس‌های آنفلوانزای مدرن A/H1N1 فعالیت ایمنی‌زایی پایینی دارند؛ ویروس‌های جدا شده تازه تنها در گلبول‌های قرمز پستانداران (گروه 0 انسان و خوکچه هندی) برهمکنش دارند.

برنج. 2. ظهور گونه های جدید ویروس آنفولانزا در جمعیت انسانی و همه گیری های مرتبط

در طول قرن گذشته، ویروس‌های آنفولانزای A دستخوش تغییرات ژنتیکی قابل توجهی شده‌اند که منجر به همه‌گیری‌های جهانی با مرگ و میر بالای انسان شده است. بزرگترین همه گیری آنفلوانزا (H1N1) در سال های 1918-1919 بود. ("اسپانیایی"). این ویروس که در سال 1918 ظاهر شد، یک رانش آشکار ایجاد کرد، انواع اولیه (Hsw1N1) و نهایی (H1N1) تغییر در نظر گرفته می شوند. این ویروس باعث ایجاد یک اپیدمی ویرانگر شد که جان 20 میلیون نفر را گرفت (نیمی از کشته شدگان را جوانان بین 20 تا 50 سال تشکیل می دادند (M.T. Osterholm, 2005).

تحقیق J.K. Tanbenberger و همکاران، (2005) نشان دادند که ویروسی که باعث بیماری همه گیر سال 1918 شد، بین ویروس آنفلوانزای مرغی و ویروس آنفلوانزای انسانی ارتباط مجددی نداشت - همه 8 ژن ویروس H1N1 بیشتر به انواع ویروس "پرندگان" شباهت داشتند تا به انسان ها (شکل .3). بنابراین به گفته ر.ب. Belshe (2005)، یک ویروس آنفولانزای مرغی، باید انسان را آلوده کند (با دور زدن میزبان میانی) و از فردی به فرد دیگر منتقل می شود.

برنج. 3. مکانیسم های منشاء ویروس های آنفلوانزای همه گیر

« آنفولانزای آسیایی(1957-1958)، ناشی از ویروس A / H2N2، که برای اولین بار در چین مرکزی ثبت شد، برای بشریت چندان چشمگیر نبود، اما کل مرگ و میر در جهان به 1-2 میلیون نفر رسید. همچنین بیشترین میزان مرگ و میر در بین بیماران بالای 65 سال مشاهده شد. همه گیری های 1957 و 1968 ناشی از ویروس های جدیدی بود که در نتیجه طبقه بندی مجدد ظاهر شدند. در سال 1957، عفونت مضاعف احتمالاً انسان یا خوک با ویروس H2N2 پرندگان و ویروس H1N1 انسانی منجر به ایجاد یک ویروس جدید حاوی ژن‌های HA، NA و یک ژن کد کننده یکی از پروتئین‌های پلیمراز (PB1) شد - از "پرندگان" ویروس و 5 بخش ژنتیکی ویروس آنفولانزای H1N1 انسانی در سال 1918. این ویروس تا سال 1968 در جمعیت انسانی گردش داشت، زمانی که یک ویروس جدید H3N2 (هنگ کنگ) جایگزین آن شد.

« آنفولانزای هنگ کنگناشی از ویروس A/H3N2 (1968-1969) اولین بار در هنگ کنگ جدا شد. در نتیجه جایگزینی ژن H2 و پلیمراز (PB1) ویروس H2N2 با 2 ژن جدید ویروس آنفلوانزای پرندگان H3 و PB1 ظاهر شد. 6 ژن باقیمانده این ویروس انسانی بودند (یعنی از ویروس قبلی سال 1957) و امروزه نسل این ویروس مطابق شکل. 3 همچنان در بین مردم به گردش در می آید. ژن های ویروس A/H3N2 از ویروسی نشأت می گیرد که در سال 1918 باعث بیماری همه گیر شد (R.B. Belshe, 2005) (شکل 3). آنفولانزای هنگ کنگ مانند همه گیری های قبلی میزان مرگ و میر بالایی نداشت، زیرا تغییرات آنتی ژنی فقط در HA (تغییر آنتی ژنی) رخ داد و NA ویروس بدون تغییر باقی ماند. وجود آنتی بادی های NA مانع از پیشرفت بیماری نمی شود، اما می تواند شدت عفونت را کاهش دهد (W.P. Glesen, 1996). این احتمال وجود دارد که میزان پایین مرگ و میر در میان سالمندان به دلیل سویه H3 ویروس آنفولانزا باشد که در قرن حاضر در سراسر جهان در گردش بوده است و بنابراین افراد بالای 60 سال دارای آنتی بادی های محافظ در برابر این ویروس هستند (L. Simonsen). و همکاران، 2004).

پس از 20 سال وقفه، دوباره شروع به گردش کرد نوع جدید ویروس آنفولانزا A/H1N1، که در سال 1977-1978. باعث ایجاد یک اپیدمی، به اندازه کافی متوسط، و پس از آن 3 نوع از پاتوژن به طور همزمان در جهان شروع به گردش کردند: ویروس های آنفولانزا A از زیرگروه های H1N1 و H3N2 و نوع B.

توجه به این نکته مهم است که ویروس‌های آنفلوانزای پرندگان در ظهور ویروس‌های آنفلوانزای جدید «انسانی» که با بیماری‌زایی بالا و توانایی ایجاد بیماری‌های همه‌گیر مشخص می‌شوند، شرکت می‌کنند (EG Deeva, 2008). این ویروس‌ها (H1N1، H2N2 و H3N2) دارای مجموعه‌ای از ژن‌های داخلی متفاوتی بودند که منشأ آن‌ها نشان‌دهنده ارتباط فیلوژنتیکی آن‌ها با ویروس‌های پرندگان و خوکی است.

مکانیسم های منشاء سویه های همه گیر چیست و چه ویژگی های بیولوژیکی برای ظهور یک ویروس بسیار بیماری زا با پتانسیل همه گیری لازم است؟

ویروس های آنفولانزای A با فراوانی فراوانی از وقوع ترکیب مجدد در نتیجه عفونت مختلط مشخص می شوند که به دلیل تقسیم بندی ژنوم ویروسی است. غلبه یک ترکیب مجدد از یک ترکیب ژنی خاص، نتیجه انتخاب در نظر گرفته می‌شود، که در آن، یکی که بیشتر برای تولید مثل در شرایط معین سازگار است، از مجموعه گسترده‌ای از ترکیب‌های مجدد مختلف انتخاب می‌شود (N.L. Varich و همکاران، 2009). خواص سویه خاص بخش‌های ژنومی می‌تواند تأثیر زیادی بر ترکیب ژنی reassortants تحت شرایط غیر انتخابی داشته باشد. به عبارت دیگر، مشخصه ویروس های آنفولانزا این است که هشت بخش از ژن ها، به ویژه ژن HA، به طور مکرر و غیرقابل پیش بینی جهش می یابند. طبقه بندی مجدد نقش مهمی در ظهور انواع ویروس های جدید، به ویژه در منشاء سویه های همه گیر ایفا می کند. و گاهی اوقات امکان ظهور یک ویروس با حدت بالاتر در طول یک بیماری همه گیر را نمی توان رد کرد.

مطالعات مدرن نشان داده‌اند که ساختار ژنی ویروس جدید A/H1N1 پیچیده است و همانطور که در مقدمه اشاره کردیم، شامل ژن‌های آنفولانزای خوکی است که خوک‌ها را در آمریکای شمالی آلوده می‌کند. ژن های آنفولانزای خوکی بر خوک ها در اروپا و آسیا. ژن آنفولانزای پرندگان؛ ژن آنفلوانزای انسانی اساسا، ژن های ویروس جدید از چهار منبع مختلف می آیند. یک میکروگراف از ویروس آنفولانزا A/H1N1 در شکل نشان داده شده است. 4.

برنج. 4. میکروگراف ویروس آنفولانزا A/H1N1

WHO "راهنمای آزمایشگاه های آنفولانزا" را منتشر کرده است و داده های جدیدی را در مورد توالی ژن های ویروسی و طول آنها از ویروس جدید آنفولانزای جدید A / H1N1 (ایزوله - A / کالیفرنیا / 04/2009): HA، NA، M، PB1 ارائه کرده است. , PB2, PA, NP, NS. این داده‌ها نشان‌دهنده شکل‌گیری یک نوع همه‌گیر جدید از ویروس است که به دلیل عدم ایمنی، آسیب‌پذیری عمومی در برابر عفونت ایجاد می‌کند. واضح است که انواع همه گیر ویروس آنفولانزا از طریق حداقل دو مکانیسم ایجاد می شود:

• دسته بندی مجدد بین ویروس های آنفلوانزای حیوانی / پرندگان و انسانی؛
• سازگاری مستقیم ویروس حیوان / پرنده با انسان.

برای درک منشأ ویروس‌های آنفلوانزای همه‌گیر، مطالعه ویژگی‌های مخزن طبیعی عفونت و مسیرهای تکاملی این خانواده از ویروس‌ها در طول تغییر میزبان مهم است. از قبل به خوبی شناخته شده و قابل بحث است که پرندگان آبزی مخزن طبیعی ویروس های آنفولانزای A هستند (که با این میزبان های واسط در طول قرن ها سازگار شده اند)، همانطور که توسط حامل همه 16 زیرگروه HA این ویروس مشهود است. از طریق مدفوع پرندگان که می توانند بیش از 400 روز در آب باقی بمانند (آنفلوآنزای مرغی ...، 2005)، هنگام نوشیدن آب از یک مخزن، ویروس ها می توانند به سایر گونه های جانوری منتقل شوند. (K. G. Nicholson et al., 2003). این توسط تجزیه و تحلیل فیلوژنتیکی توالی های اسید نوکلئیک زیرگروه های مختلف ویروس آنفولانزای A از میزبان های مختلف و از مناطق جغرافیایی مختلف پشتیبانی می شود.

تجزیه و تحلیل توالی‌های ژن نوکلئوپروتئین نشان داد که ویروس‌های آنفلوانزای پرندگان با ظهور 5 خط میزبان خاص تکامل یافته‌اند: ویروس‌های اسب‌های وحشی و اهلی، مرغان دریایی، خوک‌ها و انسان‌ها. علاوه بر این (!) ویروس های آنفلوانزای انسانی و خوکی به اصطلاح گروه خواهری را تشکیل می دهند که نشان دهنده رابطه نزدیک و البته منشأ مشترک آنهاست. به نظر می رسد که پیش ساز ویروس های آنفلوانزای انسانی و ویروس کلاسیک خوکی منشأ کاملاً «پرندگان» داشته باشد. در کشورهای آسیای مرکزی، به دلایل واضح، گوشت خوک رایج نیست و این حیوانات عملاً در دامداری وجود ندارند. این منجر به این واقعیت می شود که (برخلاف چین، به عنوان مثال)، این منطقه میزبان اصلی میانی در جمعیت حیوانات اهلی - خوک ها نیست، بنابراین احتمال "تولد" ویروس های همه گیر در منطقه آسیای مرکزی کمتر از در چین، که عملاً از داده‌های مربوط به تجزیه و تحلیل منشأ آنها حاصل می‌شود (آنفولانزای پرندگان، 2005). منبع دائمی ژن‌های ویروس آنفلوآنزای همه‌گیر (در حالت فنوتیپی بدون تغییر) در مخزن طبیعی ویروس‌های پرندگان آبزی و پرندگان مهاجر وجود دارد (R.G. Welster, 1998). باید در نظر داشت که پیش سازهای ویروس هایی که باعث همه گیری آنفولانزای اسپانیایی (1918) شدند، و همچنین ویروس هایی که منشأ ژنوم سویه های همه گیر آسیا / 57 و هنگ کنگ / 68 بودند، هنوز در گردش هستند. در میان جمعیت پرندگان وحشی با تغییرات جهشی جزئی (پرندگان آنفلوانزا…، 2005).

نظرات

(فقط برای متخصصانی که توسط ویراستاران MEDI RU تأیید شده اند قابل مشاهده است)

اولین ذکر آنفولانزا قرن ها پیش - در سال 412 قبل از میلاد - ذکر شد.

آگهی توصیفی از یک بیماری شبه آنفولانزا توسط بقراط ارائه شد. همچنین

شیوع شبه آنفولانزا در سال 1173 مشاهده شد. ابتدا مستند شد

همه گیری آنفلوآنزا که زمان زیادی را به خود اختصاص داده است

زندگی می کند، در سال 1580 اتفاق افتاد.

در سال های 1889-1891، یک بیماری همه گیر نسبتاً شدید رخ داد که توسط ویروسی از نوع H3N2 ایجاد شد.

"آنفولانزای اسپانیایی" بدنام ناشی از ویروس H1N1 در سال های 1918-1920 رخ داد.

این شدیدترین بیماری همه گیر شناخته شده است.

جان بیش از 20 میلیون نفر را گرفت. از "اسپانیایی"

20-40 درصد از جمعیت جهان به طور جدی تحت تأثیر قرار گرفته اند.مرگ خیلی آمد

سریع. یک فرد هنوز صبح می تواند کاملاً سالم باشد، تا ظهر بیمار می شود و

تا شب مرد کسانی که در روزهای اول نمردند، اغلب در اثر عوارض جان خود را از دست دادند.

ناشی از آنفولانزا، مانند ذات الریه. یک ویژگی غیر معمول "اسپانیایی" بود

که اغلب جوانان (معمولاً از آنفولانزا در وهله اول) تأثیر می گذارد

کودکان و سالمندان رنج می برند).

عامل ایجاد کننده، ویروس آنفولانزا، توسط ریچارد شاپ در سال 1931 کشف شد.

ویروس آنفلوانزای A اولین بار توسط ویروس شناس بریتانیایی اسمیت شناسایی شد.

اندروز و لیدلاو (موسسه ملی تحقیقات پزشکی لندن) در سال 1933

سال سه سال بعد، فرانسیس آنفولانزای B را جدا کرد.

در سال 1940، یک کشف مهم انجام شد - ویروس آنفولانزا می تواند باشد

کشت در جنین جوجه در نتیجه جدید

فرصت هایی برای مطالعه ویروس آنفولانزا

تیلور اولین بار در سال 1947 ویروس آنفولانزای C را جدا کرد.

در سال 1957-1958 یک بیماری همه گیر وجود داشت

آنفولانزای آسیایی که توسط ویروس H2N2 ایجاد می شود. پاندمی

در فوریه 1957 در خاور دور و به سرعت آغاز شد

در سراسر جهان گسترش یافته است. تنها در ایالات متحده آمریکا در طول این بیماری همه گیر جان خود را از دست داد

بیش از 70000 نفر

در سال های 1968-1969، یک "آنفولانزای هنگ کنگ" با شدت متوسط ​​وجود داشت که توسط

ویروس H3N2 این همه گیری در اوایل سال 1968 در هنگ کنگ آغاز شد. اغلب اوقات

این ویروس افراد مسن بالای 65 سال را تحت تاثیر قرار داد. تعداد کل

33800 نفر بر اثر این بیماری همه گیر جان خود را از دست دادند.

در سال 1977-1978، یک بیماری همه گیر نسبتا خفیف رخ داد.

آنفولانزای "روسی" نامیده می شود. ویروس آنفولانزا (H1N1) که باعث این همه گیری شد

قبلاً در دهه 1950 همه گیر شد.

بنابراین متولدین بعد از 1950 اولین کسانی بودند که رنج می بردند.

پاتوژن های آنفولانزا متعلق به خانواده ارتومیکسوویروس ها هستند که شامل 3 جنس ویروس است.آنفولانزا: A، B، C. ویروس های آنفولانزا حاوی RNA، پوسته خارجی، که حاوی 2 آنتی ژن - هماگلوتینین و نورآمینیداز است، که می تواند خواص آنها را تغییر دهد، به خصوص در ویروس نوع A. تغییرات هماگلوتینین و نورآمینیداز باعث ظهور زیرگروه های جدید ویروس می شود. که معمولاً بیماری های شدیدتر و گسترده تر است.

بر اساس نامگذاری بین المللی، تعیین سویه های ویروس شامل اطلاعات زیر است: جنس، محل جداسازی، تعداد ایزوله، سال جداسازی، نوع هماگلوتینین (H) و نورآمینیداز (N). برای مثال، A/Singapore/l/57/H2N2 به ویروسی از جنس A اشاره دارد که در سال 1957 در سنگاپور جدا شده و دارای انواع آنتی ژن های H2N2 است.

بیماری های همه گیر آنفولانزا با ویروس هایی از جنس A مرتبط هستند. ویروس‌های آنفولانزای B باعث همه‌گیری نمی‌شوند، اما امواج محلی افزایش شیوع می‌تواند یک یا چند کشور را درگیر کند. ویروس آنفولانزا C باعث ایجاد موارد پراکنده این بیماری می شود. ویروس های آنفولانزا در برابر دماهای پایین و یخ زدگی مقاوم هستند، اما با گرم شدن سریع می میرند.

Orthomyxoviruses - ویروس های آنفولانزا A، B، C

ویژگی های ساختاری

ارتومیکسوویروس ها ویروس های پوشش دار (سوپر کپسید، "لباس") هستند، اندازه متوسط ​​ویریون ها از 80 تا 120 نانومتر است. ویریون ها کروی شکل هستند. ژنوم با یک RNA منفی تک رشته ای (تکه تکه شده) نشان داده می شود. ویریون دارای یک سوپر کپسید حاوی دو گلیکوپروتئین است که به شکل برآمدگی (خار) از بالای غشاء بیرون زده است - هماگلوتینین (HA) و نورآمینیداز (NA). ویروس‌های آنفولانزای A دارای 17 نوع هماگلوتینین و 10 نوع نورآمینیداز هستند.

طبقه بندی ویروس های آنفولانزا بر اساس تفاوت در آنتی ژن های نوکلئوپروتئین (تقسیم شده به ویروس های A، B و C) و پروتئین های سطحی HA و NA است. نوکلئوپروتئین (که آنتی ژن S نیز نامیده می شود) از نظر ساختاری ثابت است و نوع ویروس (A، B یا C) را تعیین می کند. آنتی ژن های سطحی (هماگلوتینین و نورآمینیداز - آنتی ژن های V)، برعکس، متغیر هستند و سویه های مختلف یک نوع ویروس را تعیین می کنند. تغییرات هماگلوتینین و نورآمینیداز باعث ظهور زیرگروه های جدیدی از ویروس می شود که معمولاً باعث بیماری های شدیدتر و گسترده تر می شود.

وظایف اصلی هماگلوتینین:

گیرنده سلولی - موکوپپتید را می شناسد.

مسئول نفوذ ویریون به داخل سلول، اطمینان از همجوشی غشاهای ویریون و سلول. (هماگلوتینین توانایی ویروس را برای اتصال خود به سلول فراهم می کند.)

آنتی ژن های آن بیشترین خاصیت محافظتی را دارند. تغییرات در خواص آنتی ژنی (رانش و شیفت آنتی ژنیک) به توسعه اپیدمی های ناشی از موارد جدید کمک می کند. Ag انواع ویروس (در برابر آن ها ایمنی گله به اندازه کافی ایجاد نشده است).

نورآمینیداز پاسخ می دهدبرای انتشار ویریون ها، همراه با هماگلوتینین، خواص اپیدمی ویروس را تعیین می کند.

نورآمینیداز اولاً مسئول توانایی یک ذره ویروسی برای ورود به سلول میزبان و ثانیاً توانایی ذرات ویروسی برای خروج از سلول پس از تولید مثل است.

نوکلئوکپسید از 8 بخش vRNA و پروتئین های کپسید تشکیل شده است که یک رشته مارپیچ را تشکیل می دهند.

چرخه زندگی یک ویروس

تکثیر ارتومیکسوویروس ها در درجه اول در سیتوپلاسم یک سلول آلوده انجام می شود، سنتز RNA ویروسی در هسته انجام می شود. سه نوع RNA اختصاصی ویروس در هسته روی vRNA سنتز می شوند: mRNA پیام رسان مثبت (الگویی برای سنتز پروتئین های ویروسی)، cRNA تکمیلی تمام قد (الگویی برای سنتز RNA ویریون منفی جدید) و vRNA ویریون منفی. (ژنوم ویریون های تازه سنتز شده).

پروتئین های ویروسی بر روی پلی ریبوزوم ها سنتز می شوند. علاوه بر این، پروتئین های ویروسی در هسته به vRNA متصل می شوند و یک نوکلئوکپسید تشکیل می دهند. مرحله نهایی مورفوژنز توسط پروتئین M کنترل می شود. نوکلئوکپسید که از غشای سلولی عبور می کند، ابتدا توسط پروتئین M، سپس توسط لایه لیپیدی سلولی و گلیکوپروتئین های سوپر کپسید HA و NA پوشانده می شود. چرخه تولید مثل 6-8 ساعت است و با جوانه زدن ویریون های تازه سنتز شده به پایان می رسد.

تنوع آنتی ژنی

(تغییرپذیری آنتی ژنی ویروس های آنفولانزا. تنوع ویروس آنفولانزا به خوبی شناخته شده است. این تنوع خواص آنتی ژنی و بیولوژیکی یکی از ویژگی های اساسی ویروس های آنفولانزای A و B است. تغییرات در آنتی ژن های سطحی ویروس - هماگلوتینین و نورآمینیداز. بیشتر اتفاق می افتد. احتمالاً این یک مکانیسم تکاملی برای سازگاری ویروس برای تضمین بقا است. سویه‌های جدید ویروس‌ها، بر خلاف نسخه‌های قبلی خود، آنتی‌بادی‌های خاصی را که در جمعیت انباشته می‌شوند متصل نمی‌کنند. دو مکانیسم تنوع آنتی ژنی وجود دارد: تغییرات نسبتاً کوچک (رانش آنتی‌ژنی) ) و تغییرات بزرگ (تغییر آنتی ژنی).)

تقسیم مدرن ارتومیکسوویروس ها به جنس ها (یا انواع A، B و C) با خواص آنتی ژنی پروتئین های اصلی نوکلئوکپسید (پروتئین نوکلئوکپسید - فسفوپروتئین NP) و ماتریکس پوشش ویروسی (پروتئین M) مرتبط است. علاوه بر تفاوت در پروتئین های NP و M، ارتومیکسوویروس ها با بالاترین تنوع آنتی ژنی به دلیل تنوع پروتئین های سطحی HA و NA متمایز می شوند. دو نوع اصلی تغییر وجود دارد - رانش آنتی ژنی و شیفت آنتی ژنی.

رانش آنتی ژنیبه دلیل جهش های نقطه ای که ساختار این پروتئین ها را تغییر می دهد. تنظیم کننده اصلی فرآیند اپیدمی در آنفولانزا ایمنی (جمعی) جمعیت است. در نتیجه تشکیل آن، انتخاب سویه هایی با ساختار آنتی ژنی تغییر یافته (عمدتاً هماگلوتینین)، که آنتی بادی ها در برابر آنها کمتر مؤثر هستند، رخ می دهد. رانش آنتی ژنی تداوم روند اپیدمی را حفظ می کند.

(انحراف آنتی ژنی - بین همه گیرها در همه انواع ویروس ها (A، B و C) رخ می دهد. این تغییرات جزئی در ساختار آنتی ژن های سطحی (هماگلوتینین و نورآمینیداز) ناشی از جهش های نقطه ای در ژن هایی است که آنها را رمزگذاری می کند. چنین تغییراتی در هر اپیدمی رخ می دهد، زیرا محافظت در برابر مواجهه قبلی با ویروس حفظ می شود، اگرچه کافی نیست.)

با این حال، شکل دیگری از تنوع آنتی ژنی، تغییر آنتی ژنی، نیز در ویروس های آنفولانزای A یافت شده است.(تغییر) مرتبط با تغییر یک نوع هماگلوتینین (یا نورآمینیداز) به نوع دیگر، به عنوان مثال. در مورد ظهور یک نوع آنتی ژنیک جدید ویروس. این نادر است و با ایجاد بیماری های همه گیر مرتبط است. در کل تاریخ شناخته شده آنفلوانزا، تنها چند فنوتیپ آنتی ژنی شناسایی شده است که باعث اپیدمی آنفلوانزا در انسان می شود: HoN1، H1N1، H2N2، H3N2، به عنوان مثال. فقط سه نوع هماگلوتینین (HA1-3) و دو - نورآمینیداز (NA 1 و 2). ویروس های آنفولانزای نوع B و C فقط در انسان ایجاد بیماری می کنند، ویروس آنفولانزای A در انسان، پستانداران و پرندگان. متغیرترین ویروس آنفولانزای A بیشترین نقش اپیدمی را دارد.ویروس‌های آنفلوانزا C فاقد نورآمینیداز هستند، این ویروس‌ها معمولاً تصویر بالینی خفیف‌تری ایجاد می‌کنند.

عقیده ای وجود دارد که تغییر آنتی ژنی نتیجه تبادل ژنتیکی (نوترکیبی) بین ویروس های آنفلوانزای انسانی و حیوانی است. تاكنون نهايتاً مشخص نشده است كه در دوره بين اپيدمي - خارج از جمعيت انساني (در پرندگان يا پستانداران) يا در جمعيت انساني (به دليل تداوم درازمدت، گردش موضعي) ويروس‌هايي كه آنها را از بين برده‌اند، ذخيره مي‌شوند. احتمال اپیدمی برای مدتی

پرندگان میزبان اصلی و اصلی ویروس های آنفلوانزای A هستند که بر خلاف انسان دارای ویروس هایی با تمام 17 نوع HA و 10 نوع NA هستند. اردک‌های وحشی میزبان طبیعی ویروس‌های آنفلوانزای A هستند که در آن عامل بیماری‌زا در دستگاه گوارش قرار دارد و آسیب قابل توجهی به صاحبان آن وارد نمی‌کند. ویروس ها زمانی که به سایر پرندگان و پستانداران منتقل می شوند خاصیت بیماری زایی خود را نشان می دهند. در میان پستانداران، خوک ها بیشترین اهمیت را دارند که میزبان واسط در نظر گرفته می شوند و با "رگ مخلوط" مقایسه می شوند.

(ویروس های آنفولانزای انسانی مدرن ضعیف به حیوانات منتقل می شوند. همه همه گیری های آنفلوانزای A از سال 1930 در چین آغاز شد، دروازه اصلی توزیع سیبری است (کوچ های انبوه پرندگان).

H1N1 - 1930 در انسان، خوک، نهنگ (1972)، پرندگان اهلی و وحشی شناسایی شد. این بیماری با بیماری همه گیر آنفولانزای اسپانیایی مرتبط است. این نوع از سال 1977 دوباره معرفی شد.

H2N2 از سال 1957 شناسایی شده است. در انسان و پرندگان اپیدمی های مرتبط با این ویروس ها به صورت دوره ای بروز می کردند. اکنون هر دو نوع به صورت موازی شناسایی می شوند.

H3N2 در سال 1963 شناسایی شد. (هنگ کنگ).

ویروس A/ سنگاپور/1/57 (H2N2) دارای سه ژن از ویروس های آنفلوانزای پرندگان اوراسیا، ویروس A/Hong Kong/1/68 (H3N2) دارای 6 ژن از ویروس سنگاپور و دو ژن از پرندگان است. این داده ها تأیید می کند که بشریت انواع اپیدمی جدید ویروس آنفولانزای A را از پرندگان - میزبان اصلی - دریافت می کند. نزدیک‌ترین پیش‌بینی احتمال ظهور گونه‌های اپیدمی جدید ویروس آنفلوانزا A است که هماگلوتینین HA5 یا 7 دارند (کافی است یک یا دو اسید آمینه در ساختار آنها جایگزین شود).

خانواده ارتومیکسوویروس ها (به یونانی orthos - صحیح، tuha - mucus) شامل ویروس های آنفلوانزا از انواع A، B، C است که مانند پارامیکسو ویروس ها میل ترکیبی به موسین دارند. ویروس آنفولانزای A انسان و برخی گونه های حیوانی (اسب، خوک و غیره) و پرندگان را آلوده می کند. ویروس های آنفلوانزا نوع B و C فقط برای انسان بیماری زا هستند. اولین ویروس آنفلوانزای انسانی در سال 1933 توسط دبلیو اسمیت، سی. اندروز و پی لیدو (سویه WS) با آلوده کردن موش‌های سفید از انسان جدا شد. بعداً این ویروس به نوع A اختصاص یافت. در سال 1940، T. Francis و T. Medzhill ویروس آنفلوانزای نوع B و در سال 1949 R. Taylor - ویروس آنفلوانزای نوع C با تنوع آنتی ژنی خود را کشف کردند. ویروس های آنفولانزا به سه نوع A، B و C تقسیم می شوند. نوع A شامل چندین زیرگروه است که از نظر آنتی ژن با یکدیگر متفاوت هستند - هماگلوتینین و نورآمینیداز. طبق طبقه بندی WHO (1980)، ویروس های آنفلوانزای انسانی و حیوانی از نوع A به 13 زیر گروه آنتی ژنیک برای هماگلوتینین (H1-H13) و 10 برای نورآمینیداز (N1-N10) تقسیم می شوند. از این میان، ویروس های آنفلوانزای انسانی نوع A شامل سه هماگلوتینین (HI، H2 و H3) و دو نورآمینیداز (N1 و N2) می باشد.ویروس نوع A نشان دهنده زیرگروه هماگلوتینین و نورآمینیداز در براکت ها است. به عنوان مثال، ویروس آنفولانزای A: Khabarovsk/90/77 (H1N1).

ساختار و ترکیب شیمیایی

ویروس آنفولانزا شکل کروی دارد و قطر آن بین 80 تا 120 نانومتر است. فرم های رشته ای کمتر رایج هستند. نوکلئوکپسید مارپیچ یک رشته ریبونوکلئوپروتئین مارپیچ دوگانه (RNP) است که هسته ویریون را تشکیل می دهد. RNA پلیمراز و اندونوکلئازها (P1 و P3) با آن مرتبط هستند. هسته توسط غشایی متشکل از پروتئین M احاطه شده است که RNP را با یک لایه لیپیدی مضاعف از پوسته بیرونی و فرآیندهای استیلوئیدی متشکل از هماگلوتینین و نورآمینیداز متصل می کند.ویریون ها حاوی حدود 1% RNA، 70% پروتئین، 24% لیپید و 5 درصد کربوهیدرات. لیپیدها و کربوهیدرات ها بخشی از لیپوپروتئین ها و گلیکوپروتئین های پوسته بیرونی هستند و منشا سلولی دارند. ژنوم ویروس توسط یک مولکول RNA تکه تکه شده با رشته منهای نشان داده می شود. ویروس های آنفولانزای نوع A و B دارای 8 قطعه RNA هستند که از این تعداد 5 قطعه هر کدام یک پروتئین و 3 مورد آخر هر کدام دو پروتئین را رمزگذاری می کنند.

آنتی ژن ها

ویروس های آنفولانزای A، B و C در آنتی ژن نوع خاص مرتبط با RNP (پروتئین NP) و پروتئین ماتریکس M که ساختار ویریون را تثبیت می کند با یکدیگر متفاوت هستند.این آنتی ژن ها در CSC ها شناسایی می شوند. ویژگی باریک تر ویروس نوع A توسط دو آنتی ژن سطحی دیگر - هماگلوتینین H و نورآمینیداز N که با شماره سریال مشخص می شوند تعیین می شود.هماگلوتینین یک گلیکوپروتئین پیچیده با خواص محافظتی است. این باعث ایجاد آنتی بادی های خنثی کننده ویروس در بدن می شود - آنتی هماگلوتینین ها که در RTGA شناسایی شده اند. تغییرپذیری هماگلوتینین (آنتی ژن H) رانش آنتی ژنی و جابجایی ویروس آنفولانزا را تعیین می کند. رانش آنتی ژنی به عنوان تغییرات جزئی در آنتی ژن H در اثر جهش های نقطه ای در ژنی که تشکیل آن را کنترل می کند، درک می شود. چنین تغییراتی می تواند تحت تأثیر عوامل انتخابی مانند آنتی بادی ها در فرزندان جمع شود. این در نهایت منجر به یک تغییر کمی می شود که در تغییر خواص آنتی ژنی هماگلوتینین بیان می شود. با شیفت آنتی ژنی، جایگزینی کامل ژن رخ می دهد که ممکن است بر اساس نوترکیبی بین دو ویروس باشد. این منجر به تغییر در زیرگروه هماگلوتینین یا نورآمینیداز و گاهی اوقات هر دو آنتی ژن و ظهور انواع آنتی ژنی جدید ویروس می شود که باعث اپیدمی ها و همه گیری های بزرگ می شود.هماگلوتینین همچنین گیرنده ای است که توسط آن ویروس بر روی سلول های حساس جذب می شود. از جمله گلبول های قرمز، باعث چسبیدن آنها به هم می شود و در همولیز گلبول های قرمز نقش دارد. نورآمینیداز ویروسی آنزیمی است که جدا شدن اسید سیالیک از بستر را کاتالیز می کند. خاصیت آنتی ژنی دارد و در عین حال در آزادسازی ویریون ها از سلول میزبان شرکت می کند. نورآمینیداز، مانند هماگلوتینین، در نتیجه رانش و شیفت آنتی ژنی تغییر می کند.

کشت و تولید مثل

ویروس آنفولانزا در جنین مرغ و در کشت سلولی کشت می شود. محیط بهینه جنین مرغ است که در حفره آمنیوتیک و آلانتوئیک آنها ویروس به مدت 36-48 ساعت تکثیر می شود.حساس ترین آنها به ویروس آنفولانزا کشت های اولیه سلول های کلیه جنین انسان و برخی حیوانات است. تولیدمثل ویروس در این فرهنگ ها با CPP خفیف همراه است که شبیه انحطاط خود به خود سلولی است. ویروس‌های آنفولانزا بر روی گیرنده‌های گلیکوپروتئینی سلول‌های اپیتلیال جذب می‌شوند که با اندوسیتوز گیرنده به داخل آن نفوذ می‌کنند. رونویسی و تکثیر ژنوم ویروس در هسته سلول انجام می شود. در این مورد، تک تک قطعات RNA خوانده شده به شکل mRNA به ریبوزوم ها ترجمه می شوند، جایی که پروتئین های ویژه ویروس سنتز می شوند. پس از تکثیر ژنوم ویروس، مخزن RNA ویروسی تشکیل می شود که در مونتاژ نوکلئوکپسیدهای جدید استفاده می شود.

پاتوژنز

تولید مثل اولیه ویروس در سلول های اپیتلیال دستگاه تنفسی رخ می دهد. از طریق سطح فرسایش یافته غشای مخاطی، ویروس وارد جریان خون می شود و باعث ویرمی می شود. گردش ویروس در خون با آسیب به سلول های اندوتلیال مویرگ های خون همراه است و در نتیجه نفوذپذیری آنها افزایش می یابد. در موارد شدید، خونریزی در ریه ها، عضله قلب و سایر اندام های داخلی مشاهده می شود. ویروس های آنفولانزا که وارد غدد لنفاوی می شوند، به لنفوسیت ها آسیب می رسانند و در نتیجه نقص ایمنی اکتسابی ایجاد می شود که به بروز عفونت های باکتریایی ثانویه کمک می کند.آنفولانزا باعث مسمومیت بدن با شدت های مختلف می شود.

مصونیت

مکانیسم ایمنی ضد آنفولانزا با عوامل طبیعی حفاظت غیر اختصاصی ضد ویروسی، عمدتاً با تولید اینترفرون و سلول‌های کشنده طبیعی مرتبط است. ایمنی خاص توسط عوامل پاسخ سلولی و هومورال ایجاد می‌شود. اولی توسط ماکروفاژها و کشنده های T نشان داده می شود. دومی ایمونوگلوبولین ها، در درجه اول آنتی هماگلوتینین ها و آنتی بادی های ضد نورومینیداز هستند که دارای خواص خنثی کننده ویروس هستند. دومی، بر خلاف آنتی هماگلوتینین ها، فقط تا حدی ویروس آنفولانزا را خنثی می کند و از گسترش آن جلوگیری می کند. آنتی بادی های تثبیت کننده مکمل به نوکلئوپروتئین ویروسی خاصیت محافظتی ندارند و بعد از 1.5 ماه. از خون دوران نقاهت ناپدید می شود آنتی بادی ها 4-3 روز پس از شروع بیماری در سرم خون یافت می شوند و پس از 2-3 هفته به حداکثر عیار می رسند. مدت زمان ایمنی خاص به دست آمده پس از عفونت آنفولانزا، بر خلاف تصورات قبلی، در چندین دهه اندازه گیری می شود. این نتیجه بر اساس مطالعه ساختار سنی بروز آنفولانزای ناشی از ویروس A (H1N1) در سال 1977 به دست آمد. مشخص شد که این ویروس که از سال 1957 وجود نداشت، در سال 1977 تنها افرادی را تحت تأثیر قرار داد. بزرگتر از 20 سال. بنابراین، پس از ابتلا به عفونت آنفولانزای ناشی از ویروس آنفلوانزای نوع A، ایمنی شدیدی ایجاد می‌شود که کاملاً مختص به زیرگروه ویروس (توسط آنتی‌ژن‌های H و N) است که باعث تشکیل آن شده است. علاوه بر این، نوزادان تازه متولد شده دارای ایمنی غیرفعال ناشی از آنتی بادی های کلاس IgG نسبت به زیرگروه ویروس مربوطه A هستند. ایمنی برای 6-8 ماه باقی می ماند.

همهگیرشناسی

منبع عفونت افراد بیمار و ناقلان ویروس هستند. انتقال پاتوژن توسط قطرات معلق در هوا صورت می گیرد. آنفولانزا به عفونت های همه گیر اطلاق می شود که اغلب در ماه های زمستان و زمستان و بهار رخ می دهد. تقریباً هر ده سال یکبار، اپیدمی‌های آنفولانزا به شکل همه‌گیری در می‌آیند که جمعیت قاره‌های مختلف را پوشش می‌دهد. این به دلیل تغییر در آنتی‌ژن‌های H و N ویروس نوع A مرتبط با رانش و شیفت آنتی‌ژنی است. به عنوان مثال، ویروس آنفولانزای A با هماگلوتینین NSW1 باعث همه گیری آنفولانزای اسپانیایی در سال 1918 شد که جان 20 میلیون انسان را گرفت. در سال 1957، ویروس آنفلوانزای "آسیایی" (H2N2) باعث ایجاد یک بیماری همه گیر شد که بیش از 2 میلیارد نفر را تحت تاثیر قرار داد. در سال 1968، یک نوع بیماری همه گیر جدید ظاهر شد، ویروس آنفلوانزا A (H3N2) به نام "ویروس هنگ کنگ" که تا به امروز به گردش خود ادامه می دهد. در سال 1977، یک ویروس نوع A (H1N1) به آن ملحق شد. این غیرمنتظره بود، زیرا یک ویروس مشابه قبلاً در سال 1947-1957 در گردش بود و سپس به طور کامل با زیرگروه "آسیایی" جایگزین شد. در این راستا، این فرضیه مطرح شد که انواع تغییر این ویروس از نظر تاریخی جدید نیستند. آنها زیرگونه‌های سروزی هستند که در سال‌های اخیر در گردش هستند. توقف گردش ویروس آنفولانزا که باعث اپیدمی دیگری شد با ایمنی جمعی جمعیتی که نسبت به این نوع آنتی ژنی پاتوژن ایجاد شده است توضیح داده می‌شود. در برابر این پس زمینه، انتخاب انواع آنتی ژنی جدید رخ می دهد، که ایمنی جمعی هنوز در برابر آن شکل نگرفته است. هنوز مشخص نیست که گونه های آنتی ژنی جابجا شده (سروسیپ های) ویروس آنفولانزای A که در یک دوره تاریخی خاص گردش خون فعال را ترک کرده اند، کجا باقی مانده اند. برای مدت طولانی این احتمال وجود دارد که مخزن این گونه ویروس ها در حیوانات وحشی و اهلی به ویژه پرندگان باشد که به گونه های انسانی ویروس آنفلوانزای A آلوده شده و آنها را برای مدت طولانی در گردش نگه می دارند. همزمان نوترکیبی های ژنتیکی بین ویروس های پرندگان و انسانی در بدن پرندگان اتفاق می افتد که منجر به تشکیل انواع آنتی ژنی جدید می شود.براساس فرضیه ای دیگر، ویروس های آنفلوانزا از همه زیرگروه های شناخته شده به طور مداوم در بین جمعیت در گردش هستند، اما از نظر اپیدمی مرتبط می شوند. تنها با کاهش ایمنی جمعی، ویروس های آنفلوانزای نوع B و C پایداری آنتی ژنی بالاتری دارند. ویروس های آنفولانزای نوع B باعث اپیدمی های با شدت کمتر و شیوع موضعی می شوند. ویروس آنفولانزا نوع C عامل بیماری های پراکنده است.ویروس آنفولانزا به سرعت توسط دمای بالای 56 درجه سانتی گراد، اشعه ماوراء بنفش، مواد ضدعفونی کننده، مواد شوینده از بین می رود. ماندگاری خود را به مدت 1 روز حفظ می کند. در دمای اتاق، روی سطوح صاف فلزی و پلاستیکی - تا 2 روز. ویروس های آنفلوانزا در دمای پایین (70- درجه سانتیگراد) زنده می مانند.

پروفیلاکسی اختصاصی

برای پیشگیری از آنفولانزا از ریمانتادین استفاده می شود که تولید مثل ویروس آنفولانزای A را سرکوب می کند.برای پیشگیری غیرفعال از ایمونوگلوبولین ضد آنفلوانزای انسانی که از سرم خون اهداکنندگان واکسینه شده با واکسن آنفولانزا به دست می آید استفاده می شود. اینترفرون لکوسیت انسانی اثر خاصی دارد برای واکسیناسیون از واکسن های زنده و غیرفعال استفاده می شود. با معرفی واکسن های زنده، مصونیت عمومی و موضعی ایجاد می شود. علاوه بر این، القای اینترفرون ذکر شده است.در حال حاضر، واکسن های غیرفعال از انواع مختلف به دست آمده است: ویریون، زیر واحد، تقسیم و مخلوط. واکسن های ویریون از طریق تصفیه با کیفیت بالا از ویروس های رشد یافته در جنین مرغ به دست می آیند. واکسن های زیر واحد آنتی ژن های سطحی خالص شده ویروس آنفولانزا - هماگلوتینین ها و نورآمینیداز هستند. چنین آماده سازی واکسن با واکنش زایی کم و ایمنی زایی بالا مشخص می شود. واکسن های بریده شده یا متلاشی شده از سوسپانسیون خالص ویریون ها با درمان با مواد شوینده به دست می آیند. با این حال، هنوز هیچ اتفاق نظری در مورد مزایای هر یک از این واکسن ها وجود ندارد. واکسن های غیرفعال باعث ایجاد پاسخ ایمنی در سیستم ایمنی هومورال عمومی و موضعی می شوند، اما به میزان کمتری نسبت به واکسن های زنده باعث سنتز اینترفرون می شوند.تجربه سال ها در استفاده از واکسن های زنده و غیرفعال نشان می دهد که عدم تطابق آنتی ژنی سویه های واکسن با سویه های اپیدمی دلیل اصلی، اما نه تنها دلیل اثربخشی کم واکسیناسیون آنفولانزا است. در سال های اخیر تلاش هایی برای ایجاد واکسن های دستکاری ژنتیکی و مصنوعی آنفلوانزا صورت گرفته است.

آنفولانزا

آنفولانزا یک بیماری حاد تنفسی انسان است که تمایل به گسترش همه گیر دارد. با التهاب کاتارال دستگاه تنفسی فوقانی، تب، مسمومیت عمومی شدید مشخص می شود. آنفولانزا اغلب با بروز عوارض شدید همراه است - پنومونی باکتریایی ثانویه، تشدید بیماری های مزمن ریوی. پاتوژن های آنفولانزا متعلق به خانواده Orthomyxoviridae هستند. این شامل سه جنس ویروس است - A، B، C. ویروس آنفولانزا شکل کروی دارد، ابعاد آن 80-120 نانومتر است. گاهی اوقات ویریون های رشته ای تشکیل می شوند. ژنوم توسط یک رشته منفی تک رشته ای از RNA تشکیل شده است که از هشت قطعه تشکیل شده است و توسط یک کپسید پروتئینی احاطه شده است. RNA مرتبط با 4 پروتئین داخلی: نوکلئوپروتئین ها (NP) و پروتئین های با وزن مولکولی بالا PI، P2، P3 که در رونویسی ژنوم و تکثیر ویروس نقش دارند. نوکلئوکپسید دارای تقارن مارپیچ است. بالای غشای کپسید لایه ای از پروتئین ماتریکس (پروتئین M) قرار دارد. در غشای خارجی سوپر کپسید، هماگلوتینین (H) و نورآمینیداز (N) به شکل خارها قرار دارند. هر دو گلیکوپروتئین (N و H) خواص آنتی ژنی مشخصی دارند. در ویروس های آنفولانزا، 13 نوع آنتی ژنی مختلف هماگلوتینین (NI-13) و 10 نوع نورآمینیداز (N1-10) یافت شد.با توجه به آنتی ژن نوکلئوپروتئین داخلی، سه نوع ویروس آنفولانزا متمایز می شود - A، B، C، که را می توان در RSK تعیین کرد. ویروس های نوع A که انسان را آلوده می کنند دارای سه نوع هماگلوتینین (HI، H2، H3) و دو نوع نورآمینیداز (N1، N2) هستند. بسته به ترکیب آنها، انواعی از ویروس های آنفولانزای A وجود دارد - H1N1، H2N2، H3N2. آنها در واکنش مهار هماگلوتیناسیون با سرم های مربوطه تعیین می شوند.ویروس های آنفولانزا به راحتی در جنین مرغ و کشت های سلولی مختلف کشت می شوند. حداکثر تجمع ویروس ها پس از 2-3 روز رخ می دهد. در محیط خارجی، ویروس به سرعت از طریق خشک شدن قابلیت عفونت خود را از دست می دهد. در دمای پایین در یخچال به مدت یک هفته، در -70 درجه سانتیگراد - بسیار طولانی تر نگهداری می شود. گرمایش بعد از چند دقیقه منجر به غیرفعال شدن آن می شود. تحت تأثیر اتر، فنل، فرمالین به سرعت فرو می ریزد.

روش تشخیص ویروس شناسی

سواب نازوفارنکس، ترشحات بینی گرفته شده با سواب پنبه استریل خشک یا مرطوب در روزهای اول بیماری، خلط به عنوان ماده برای تحقیق استفاده شد. ویروس ها را می توان در خون، مایع مغزی نخاعی یافت. در موارد کشنده، تکه هایی از بافت های آسیب دیده دستگاه تنفسی فوقانی و تحتانی، مغز و ... گرفته می شود، سواب بینی نازوفارنکس با معده خالی گرفته می شود. بیمار باید گلو را سه بار با محلول کلرید سدیم سالین استریل (15-10 میلی لیتر) که در یک شیشه دهان گشاد استریل جمع آوری می شود، شستشو دهد. پس از آن، دیواره پشتی حلق، مجرای بینی با یک تکه پنبه استریل پاک می شود، سپس با فلاشینگ در یک شیشه فرو می رود. پس از گرفتن مواد، سواب در یک لوله آزمایش با سالین فیزیولوژیکی غوطه ور می شود که 5 درصد سرم حیوانی غیرفعال شده به آن اضافه می شود. در آزمایشگاه، سواب ها در مایع شسته می شوند، روی دیواره لوله آزمایش فشرده می شوند و خارج می شوند. زهکش را برای ته نشین شدن در یخچال نگهداری می کنند، سپس قسمت میانی مایع را داخل لوله های آزمایش استریل می برند. آنتی بیوتیک های پنی سیلین (200-1000 واحد بر میلی لیتر)، استرپتومایسین (200-500 میکروگرم در میلی لیتر)، نیستاتین (100-1000 واحد بر میلی لیتر) به مواد اضافه می شوند تا فلور میکروبی مرتبط را از بین ببرند، به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق نگه داشته و استفاده می شوند. برای جداسازی ویروس ها، که قبلاً آن را از نظر عقیمی بررسی کرده باشید. روشی حساس برای جداسازی ویروس هایی که جنین مرغ 10-11 روزه را آلوده می کنند. این ماده در حجم 0.1-0.2 میلی لیتر به داخل حفره آمنیوتیک یا آلانتویس تزریق می شود. به عنوان یک قاعده، 3-5 جنین را آلوده کنید. جنین ها در دمای بهینه 33-34 درجه سانتی گراد به مدت 72 ساعت انکوبه می شوند. به منظور افزایش تعداد ویریون ها در ماده آزمایش، آن را از قبل غلیظ می کنند. برای این کار از روش های جذب ویروس ها بر روی گلبول های قرمز مرغ، تیمار با محلول 2/0 درصد تریپسین به منظور افزایش خاصیت عفونی ویروس ها و یا رسوب دهی آن ها با روش های خاص استفاده کنید و جنین های مرغ را پس از انکوباسیون در دمای سرد سرد می کنند. 4 درجه سانتیگراد به مدت 2-4 ساعت، سپس پیپت های استریل یا سرنگ آلانتویزنو یا مایع آمنیوتیک آسپیره کنید. در این، با کمک RHA، وجود یک ویروس عفونی مشخص می شود. برای انجام این کار، حجم مساوی (0.2 میلی لیتر) از مواد ویروسی و 1 درصد سوسپانسیون گلبول های قرمز مرغ را مخلوط کنید. یک واکنش مثبت (وجود ویروس در ماده) با ته نشین شدن گلبول های قرمز به شکل چتر مشخص می شود.اگر ویروسی در ماده وجود داشته باشد که خاصیت هماگلوتیناسیون داشته باشد، با استفاده از یک RGA منبسط شده تیتر می شود و تعیین می شود. تیتر فعالیت هماگلوتیناسیون با کمک این واکنش، تیتر ویروس هماگلوتیناسیون تعیین می شود - بالاترین رقت ماده، که هنوز هم واکنش هماگلوتیناسیون را نشان می دهد. این مقدار ویروس به عنوان یک واحد هماگلوتیناسیون (HAU) در نظر گرفته می شود.

شناسایی ویروس های آنفولانزا با استفاده از RTGA

برای انجام این کار، ابتدا یک رقت کاری از ماده ویروسی تهیه کنید که حاوی 4 GAO از ویروس در یک حجم معین است.بررسی واکنش پس از تشکیل رسوب گلبول قرمز در چاهک های کنترل انجام می شود. یک واکنش مثبت با تاخیر در هماگلوتیناسیون در چاهک های آزمایشی مشهود است.ویروس های آنفولانزا را می توان با استفاده از خطوط کشت سلولی مختلف جدا کرد - جنین انسان، کلیه میمون، خط سلولی پیوسته کلیه سگ سگ (MDCK) و غیره. در کشت های سلولی، اثر سیتوپاتیک ویروس ها آشکار می شود (ظاهر سلول هایی با لبه های پوسته پوسته، واکوئل ها، تشکیل ادخال های داخل هسته ای و سیتوپلاسمی)، که با انحطاط تک لایه سلولی به پایان می رسد. 1:8). علاوه بر این واکنش، RGGads قابل استفاده است، اما حساسیت کمتری دارد و به تیتر سرم ایمنی حداقل 1:160 و همچنین RSK، RN، PEMA و غیره نیاز دارد.

مطالعه سرولوژیکی

برای تأیید تشخیص آنفولانزا از آزمایش سرولوژیکی استفاده می شود. این بر اساس تعیین افزایش چهار برابری در تیتر آنتی بادی در سرم بیمار است. سرم اول در شروع بیماری در دوره حاد (2-5-1 روز بیماری) و دوم - پس از 10-14 به دست می آید. روز بیماری از آنجایی که سرم ها را می توان به طور همزمان مصرف کرد، اولین آنها در یخچال در دمای -20 درجه سانتیگراد نگهداری می شود. RTGA، RSK، RNGA اغلب استفاده می شود. این واکنش ها با مجموعه های ویژه ای از کیت های تشخیص ویروسی استاندارد (سویه های مرجع ویروس آنفولانزا از انواع مختلف سرولوژیکی) تنظیم می شوند. از آنجایی که سرم بیماران ممکن است حاوی مهارکننده های غیر اختصاصی هماگلوتیناسیون باشد، ابتدا آنها را در دمای 56 درجه سانتیگراد گرم می کنند و همچنین با یک آنزیم خاص (به عنوان مثال نورآمینیداز) یا محلول های پریودات پتاسیم، ریوانول، کلرید منگنز درمان می شوند. سیستم تعلیق لاستیک سفید و غیره طبق طرح های خاص و

واکنش مهار هماگلوتیناسیون

واکنش مهار هماگلوتیناسیون را می توان در لوله های آزمایش (macroshtod) یا در صفحات ویژه برای مطالعات ایمونولوژیک قرار داد.این واکنش زمانی مثبت تلقی می شود که یک رسوب گلبول قرمز فشرده و متراکم با لبه های صاف تشکیل شود.

تشخیص سریع

این روش بر اساس تشخیص آنتی ژن های ویروسی خاص در مواد آزمایش با استفاده از ایمونوفلورسانس در RIF مستقیم یا غیرمستقیم است. مخاط از مجرای بینی یا دیواره خلفی حلق به دست می آید، سانتریفیوژ می شود و اسمیر از رسوب سلول های اپیتلیوم استوانه ای غشای مخاطی روی لام های شیشه ای تهیه می شود. آنها با سرم های ایمونوفلورسانس کونژوگه به ​​فلوروکروم ها، مانند FITC (فلورسئین ایزوتیوسیانات) درمان می شوند. هنگام بررسی آماده سازی با استفاده از میکروسکوپ شب تاب، درخشش مشخصی از ویروس های آنفولانزا به رنگ زرد مشاهده می شود که در شروع بیماری در هسته سلول های اپیتلیال موضعی می شوند. اخیراً استفاده از ELISA، RZNGA و PCR پیشنهاد شده است. برای نشان دادن آنتی ژن های ویروسی خاص.