انجراف فيروس الأنفلونزا. هيكل مستضدي. فيروسات الأنفلونزا A النموذجية هي الهيماجلوتينين والنورامينيداز. يعتمد تصنيف فيروسات الأنفلونزا على مزيج من هذه البروتينات. الوراثة الجزيئية لفيروس الأنفلونزا

الفئات النموذجية لفيروسات الأنفلونزا من النوع A - ; يعتمد تصنيف فيروسات الأنفلونزا على مزيج من هذه البروتينات. على وجه الخصوص، تم عزل 13 Ags من فيروس الأنفلونزا A أنواع مختلفةالراصة الدموية و10 أنواع من النيورامينيداز. تحدد الاختلافات المستضدية بين الفيروسات من الأنواع A وB وC الاختلافات في بنية البروتينات NP وM. جميع سلالات الفيروسات من النوع A موجودة مجموعة (س-) اي جيتم اكتشافه في RTGA. نوع محدد Ag - الهيماجلوتينين والنورامينيداز; يؤدي الاختلاف في بنيتها إلى ظهور متغيرات مصلية جديدة، غالبًا في ديناميكيات تفشي وباء واحد (الشكل 1). 26 –2 ). يمكن أن تحدث التغيرات في بنية المستضد بطريقتين:

تخطيط Y، الشكل 26-02.

أرز. 26 –2 . مخطط الآلية, مما يسبب التحول المستضدي والانجراف المستضدي لفيروسات الأنفلونزا. التوضيحات في النص.

الانجراف المستضدي. يسبب تغييرات طفيفة في هيكل Agالناجمة عن الطفرات النقطية. إلى حد أكبر، يتغير هيكل الهيماجلوتينين. يتطور الانجراف في ديناميكيات العملية الوبائية ويقلل من خصوصية التفاعلات المناعية التي تطورت لدى السكان نتيجة للتداول السابق للعامل الممرض.

التحول المستضدي. يؤدي إلى ظهور متغير مستضدي جديد للفيروس, غير مرتبطة أو مرتبطة بشكل مستضدي بعيد بالمتغيرات المنتشرة سابقًا. من المفترض أن التحول المستضدي يحدث نتيجة لإعادة التركيب الجيني بين سلالات الفيروس البشرية والحيوانية أو الدورة الكامنة في مجموعة الفيروس التي استنفدت قدراتها الوبائية. كل 10-20 سنة، يتجدد عدد السكان، لكن "الطبقة" المناعية تختفي، مما يؤدي إلى ظهور الأوبئة.

آر جي ويبستر، ودبليو جي ليفر أنا (آر جي ويبستر ودبليو جي لاير)

I. مقدمة

يعد فيروس الأنفلونزا من النوع A1 فريدًا من بين العوامل المسببة للأمراض المعدية البشرية نظرًا لقدرته على تغيير تركيبته المستضدية بقوة لدرجة أن المناعة المحددة المكتسبة استجابة للعدوى بسلالة واحدة توفر حماية قليلة جدًا أو معدومة ضد الفيروس الناشئ التالي. ونتيجة لذلك، وبسبب تنوع الفيروس، لا تزال الأنفلونزا واحدة من الأمراض الوبائية الرئيسية التي تصيب الإنسان.

تم العثور على نوعين من التباين المستضدي في فيروسات الأنفلونزا: الانجراف المستضدي (بيرنت، 1955) والتحول المستضدي الكبير. يتميز الانجراف المستضدي بتغيرات صغيرة نسبيًا تحدث بشكل رئيسي داخل عائلة معينة من السلالات، كل منها يمكن ربطها بسهولة مع جميع السلالات الأخرى من هذه العائلة فيما يتعلق بكل من المستضدات الداخلية والسطحية. ومن بين سلالات فيروس الأنفلونزا A التي تصيب البشر، يحل كل متغير لاحق محل البديل السابق. ربما يرجع هذا إلى الميزة الانتقائية التي تتمتع بها المتغيرات المستضدية الجديدة في التغلب على الحواجز المناعية للمضيف. الانجراف المستضدي هو سمة من سمات فيروسات الأنفلونزا ليس فقط A وIAO وB.

النوع الثاني من التباين المستضدي، والذي تم وصفه فقط للفيروس A، يتضمن المزيد من التغييرات غير المتوقعة والدراماتيكية. وتسمى هذه التحولات المستضدية الهامة 2. تحدث هذه التحولات على فترات تتراوح من 10 إلى 15 سنة (انظر الفصل 15) وتتميز بظهور فيروسات "جديدة" مستضدية لا يتمتع السكان بمناعة ضدها، وهذه هي على وجه التحديد "الفيروسات" التي تسبب جوائح الأنفلونزا الكبيرة.

تحتوي هذه الفيروسات "الجديدة" على وحدات فرعية HA1 وNA تختلف تمامًا عن تلك المنتشرة بين البشر قبل ظهور الفيروس الجديد. قد يحدث تحول كبير في أحد المستضدات السطحية أو كليهما؛ تم وصف اثنين من جوائح الأنفلونزا، سببتهما فيروسات تنتمي إلى كل من هاتين الفئتين (انظر الفصل 15).

كما تعد الأنفلونزا عدوى طبيعية تصيب بعض الحيوانات والطيور. تم عزل الفيروسات، حصريًا من النوع A، من الخنازير والخيول ومجموعة متنوعة من الطيور، بما في ذلك الدجاج والبط والديوك الرومية والسمان والدراج وخطاف البحر (McQueen et al., 1968; Pereira, 1969; World Health Organization, 1972). ). في السابق، كان يُعتقد أن سطح جسيم فيروس الأنفلونزا يتكون من فسيفساء من المستضدات التي تشكل جزءًا من جميع السلالات من هذا النوعوأن الاختلاف المستضدي ينتج عن حركة هذه المستضدات من المواضع البارزة إلى الغائرة والعكس. وفي وقت لاحق، تم اقتراح آلية أخرى للانجراف المستضدي. يُعتقد حاليًا أن التغييرات تحدث باستمرار في الأحماض الأمينية التي تشكل المحددات المستضدية للوحدات الفرعية HA و NA. وهي نتيجة لانتقاء الطفرات التي تظهر تغيرات في تسلسل الأحماض الأمينية لوحدات فرعية من متعدد الألتيد، والتي تنتج بدورها عن طفرة في الحمض النووي الريبي الفيروسي. والتحولات المستضدية الكبيرة، ونتيجة لذلك تنشأ فيروسات "جديدة"، ربما ترجع إلى آلية مختلفة. إن الوحدات الفرعية للتراص الدموي والنورامينيداز لهذه الفيروسات "الجديدة" تختلف تمامًا من الناحية المستضدية عن الوحدات الفرعية للفيروسات المنتشرة بين البشر قبل ظهور سلالات جديدة. ونحن نعتقد أن الفيروس "الجديد" ليس نتيجة طفرة في فيروس أنفلونزا بشري سابق، ولكنه ينشأ من إعادة التركيب الجيني بين فيروس بشري وواحدة من سلالات فيروس الأنفلونزا A العديدة التي يكون مضيفها الطبيعي حيوانات أو طيور. وبعد ظهوره، يحل الفيروس "الجديد" محل الفيروس "القديم"، الذي يختفي تماما من البشر.

لم يتم بعد تحديد التحولات المستضدية الهامة في فيروسات الأنفلونزا B. اقترح بيريرا (1969) أن عدم وجود تغيرات مستضدية مهمة في فيروسات الأنفلونزا B قد يكون نتيجة لغياب فيروسات الأنفلونزا بين الحيوانات والطيور الدنيا.

يشمل الاختلاف المستضدي فقط الوحدات الفرعية HA و NA؛ البروتينات الداخلية للفيروس (مستضد النيوكليويروتين وبروتين المصفوفة أو الغشاء M) ثابتة إلى حد كبير. من بين المستضدات السطحية، يعد HA هو الأكثر أهمية لأن الأجسام المضادة لهذا المستضد تعمل على تحييد عدوى الفيروس.

ثانيا. الأنفلونزا من الناحية التاريخية (انظر أيضًا الفصل 15)

أ. دليل على التغيرات المستضدية

تم الإبلاغ عن أمراض شبيهة بالأنفلونزا بشكل متكرر في القرون الماضية (هيرش، 1883)؛ حدث المرض إما على شكل جوائح، أثرت على جزء كبير جدًا من السكان وانتشر في جميع أنحاء العالم تقريبًا، أو على شكل فاشيات محلية. حتى عام 1933، عندما تم عزل فيروس الأنفلونزا لأول مرة (من البشر. إد.) 1، كان من المستحيل القول على وجه اليقين ما إذا كان سبب جائحة معين هو فيروس الأنفلونزا بالفعل. ومع ذلك، فإن خصائص الأوبئة الموصوفة في الوثائق التاريخية تشير إلى أن هذه الأوبئة يمكن أن تكون ناجمة عن فيروسات الأنفلونزا. على الرغم من أن الأمراض المعدية الأخرى قد يكون لها أعراض مميزة للأنفلونزا، إلا أن الأنفلونزا فقط هي التي تسبب أوبئة مفاجئة تستمر لعدة أسابيع وتختفي فجأة (بيرنت، وايت، 1972). وتشير الدراسات المصلية التي أجريت على كبار السن أيضًا إلى أوبئة أنفلونزا سابقة حدثت في أماكن مختلفة. العصور البعيدة (مولدر، مازوريل، 1958).

تم تسجيل أول وباء أنفلونزا معروف في ألمانيا عام 1170 (هيرش، 1883)، ومن الممكن من مصادر تاريخية أخرى تجميع قائمة كاملة إلى حد ما من الأوبئة في أوروبا منذ عام 1500. سيتم ذكر الأوبئة الأشد خطورة هنا فقط. يمكن العثور على مزيد من التفاصيل في هيرش (1883)، وكريتون (1891، 1894)، وبيرنت وكلارك (1942)، وبيرنت ووايت (1972).

وباء 1781-1782 بدأت في آسيا عام 1781، ثم انتشرت في أوائل عام 1782 عبر روسيا إلى أوروبا. تسبب هذا الوباء في عدد قليل نسبيا من الوفيات، لكن خصوصيته كانت أن المرض يصيب في كثير من الأحيان الأشخاص في منتصف العمر أكثر من الأطفال وكبار السن. حدثت أيضًا أوبئة شديدة جدًا في أعوام 1803 و1833 و1837 و1847. وباء 1847-1848 بدأت في روسيا الشرقية في 1 مارس-847 ووصلت إلى أوروبا وإنجلترا في شتاء 1847-1848. وقد تسبب هذا الوباء في وفاة العديد من الأشخاص، خاصة بين كبار السن.

كما جاء جائحة عام 1889 إلى أوروبا من روسيا، ووصل إلى إنجلترا وأمريكا في أوائل عام 1890. وانتشر المرض بسرعة المسافرين. بعد ظهور الفيروس في عام 1889، كانت هناك أربع موجات أخرى من العدوى في كل سنة من السنوات التالية. وتسببت التفشيتان الثانية والثالثة في حدوث العديد من الوفيات، خاصة بين الأطفال وكبار السن. وتشير الدراسات المصلية (مولدر ومازوريل، 1958) وغيرها (بيريرا، 1969) إلى أن الفيروسات المرتبطة بفيروسات الأنفلونزا في آسيا وهونغ كونغ والنمط المصلي للخيول 2 كانت موجودة في ذلك الوقت.

حدثت أشد حالات جائحة الأنفلونزا في الفترة 1918-1919. الموقع الدقيق لهذا الوباء غير معروف، لكن بيرنت وكلارك (1942) يعتقدان أن الفيروس كان من الممكن أن يتطور بشكل مستقل في آسيا وأوروبا أو يمكن أن يكون قد انتقل إلى أوروبا (عن طريق العمال الصينيين). حدث الوباء على شكل موجات وقتل متوسطًا من 20 إلى 50 مليون شخص. "حياة البشر، وخاصة الشباب. ربما كان سبب وباء 1918-1919 هو سلالة من فيروسات الأنفلونزا A المرتبطة بفيروس أنفلونزا الخنازير. وقد اقترح هذا لأول مرة ليدلو (1935) وشوب (1936) )، ولكن من الممكن أن يكون هذا الفيروس قد انتقل من الإنسان إلى الخنازير، وليس في الاتجاه المعاكس.دراسات مكثفة حول انخفاض الأجسام المضادة مع تقدم العمر لفيروس أنفلونزا الخنازير في الأمصال البشرية، قام بها دافنبورت وآخرون (1953) -1964)، هينيسي وآخرون (1965)، أعطوا سببًا للاعتقاد بأن الفيروس الذي تسبب في وباء 1918-1919 1pg.، يرتبط مصليًا بفيروس أنفلونزا الخنازير.

دفع العدد الكبير من الوفيات بيرنت وكلارك (1942) إلى الإشارة إلى أن الفيروس ربما كان له ضراوة غير عادية. ووفقا لباحثين آخرين (Zhdanov et al., 1958; Kilbourne, 1960)، فإن أسباب ارتفاع معدل الوفيات الناجمة عن الالتهابات البكتيرية الثانوية يمكن أن تكون ظروف الحرب ونقص المضادات الحيوية. ومع ذلك، يبدو من المرجح أن بعض طفرات الفيروس كانت شديدة الضراوة. لأن فيروس الوباء عام 1781م، والذي أصاب الشباب أيضًا، لم يتسبب في ارتفاع معدل الوفيات.

ب. التغيرات المستضدية في الفيروس في فترة ما بعد عام 1933

بعد التعرف على فيروس الأنفلونزا الأول، والذي أطلق عليه اسم H0N1 (منظمة الصحة العالمية، 1971)، حدثت تحولات مستضدية في عام 1947، عندما ظهر فيروس H1N1 (على سبيل المثال، A/FM/1/47)، في عام 1957، عندما فيروسات H2N2 (على سبيل المثال A/Singapore/1/57)، وفي عام 1968، عندما ظهر فيروس هونغ كونغ (A/Hong Kong/1/68). تألف التحول المستضدي في عام 1947 من تغير في مستضد التراص الدموي (من H0N1 إلى H1N1)؛ وفي عام 1957، كان كل من HA وNA مختلفين تمامًا من الناحية المستضدية عن مستضدات فيروسات السنوات السابقة (من H1N1 إلى H2N2)، وفي عام 1968 أظهر متغير هونج كونج اختلافًا مستضديًا كبيرًا في HA (من H2N2 إلى H3N2).

احتوت السلالة الآسيوية من فيروس الأنفلونزا (H2N2)، والتي ظهرت لأول مرة في مقاطعة صينية في عام 1957، على وحدات فرعية HA وNA كانت مختلفة تمامًا من الناحية المستضدية عن الوحدات الفرعية H0N1 وH1N1 لفيروسات الأنفلونزا التي كانت منتشرة سابقًا في البشر. تسببت هذه السلالة من فيروس الأنفلونزا في حدوث جائحة غير مسبوق في التاريخ (بيرنت ووايت، 1972)، ولكن عدد الوفيات كان صغيرًا. كان سبب وباء الأنفلونزا التالي والأخير حتى الآن هو فيروس A/Hong Kong/68، حيث كانت الوحدات الفرعية NA مماثلة لتلك الموجودة في الفيروس الآسيوي A2 "القديم"، وكانت الوحدات الفرعية HA مختلفة تمامًا من الناحية المستضدية عن تلك الموجودة في فيروس A2. السلالة الآسيوية "القديمة" (كولمان وآخرون، 1968؛ شولمان، كيلبورن، 1969؛ ويبستر، لافر، 1972).

ب. الخصائص العامة للأوبئة السابقة

وتشير الطبيعة الوبائية للأنفلونزا لدى البشر إلى أن البشرية تتأثر، على فترات غير منتظمة، بفيروسات لها محددات مستضدية جديدة. تشير المعلومات الواردة أعلاه إلى أن هذه الأوبئة غالبًا ما تنشأ في جنوب شرق آسيا وتنتشر بسرعة المسافرين. تسببت معظم الأوبئة في زيادة معدل الوفيات بين الأطفال وكبار السن، ولكن تسببت جوائحتان على الأقل (1781 و1918) في زيادة معدل الوفيات بين الشباب.

ثالثا. خصائص جينوم فيروس الأنفلونزا

يحتوي فيروس الأنفلونزا على جينوم مجزأ، يتكون من سبعة أجزاء على الأقل من الحمض النووي الريبوزي (RNA) المفرد الجديلة، وهذا التجزئة يسمح للجينوم بإعادة ترتيب ("إعادة التركيب") أثناء العدوى المختلطة بسلالات مختلفة (انظر الفصل 7) وقد يكون أساسيًا في تباين مولدات الأنفلونزا بعد عدوى مختلطة للخلايا بفيروسين مختلفين من فيروسات الأنفلونزا A، تتشكل المؤتلفات الفيروسية بتردد عالٍ. تم إثبات التكرار العالي لإعادة التركيب بين فيروسات الأنفلونزا A لأول مرة بواسطة بيرنت (بيرنت، ليند، 1949، 1951) وتم تأكيده مرارًا وتكرارًا بواسطة باحثون آخرون يعملون في هذا المجال (هيرست، جوتليب، 1953، 1955؛ سيمبسون، هيرست، 1961؛ سيمبسون، 1964؛ سوجيورا، كيلبورن، 1966) وقد وجد أن تكرار إعادة التركيب يمكن أن يصل إلى 97٪.

يسمح التردد العالي لإعادة التركيب بين فيروسات الأنفلونزا بتكوين فيروسات هجينة المستضدات أثناء العدوى المختلطة في التجارب سواء في المختبر أو في الجسم الحي. لأول مرة، تم تقديم تأكيد كيميائي حيوي لهذا الأمر من قبل لافر وكيلبورن (1966)، اللذين اكتشفا أن فيروس X7 المؤتلف وراثيًا، معزول من الخلايا الممزوجة بسلالات فيروس الأنفلونزا NW-S (H0N1) وRI/5+ (H2N2). ) ، يمتلك وحدات فرعية HA من فيروس H0N1، ووحدات فرعية NA من فيروس H2N2. وقد تم فيما بعد عزل العديد من فيروسات الأنفلونزا A المؤتلفة الأخرى، وفي الواقع، يمكن إنشاؤها "بالترتيب الصحيح" (Webster, 1970) (انظر أيضًا 39). تتم مناقشة تكوين سلالات الأنفلونزا الجديدة عن طريق إعادة التركيب بين الفيروسات الحيوانية (أو الطيور) والفيروسات البشرية في القسم السابع. وقد تم الحصول على أدلة تشير إلى أن سلالات الفيروسات المسببة لجائحة الأنفلونزا يمكن أن تنشأ في الطبيعة بهذه الطريقة. من الممكن أيضًا إعادة التركيب بين فيروسات الأنفلونزا B (Perry, Burner, 1953; Perry et al., 1954; Ledinko, 1955; Tobita, Kilbourne, 1974)، ولكن لم يتم اكتشاف إعادة التركيب بين فيروسات الأنفلونزا من النوعين A وB.

رابعا. وحدات فرعية من الهيماغلوتينين

والنورامينيداز شديدة التباين

المستضدات

ترتبط أنشطة التراص الدموي والنورامينيداز لفيروس الأنفلونزا بوحدات فرعية مختلفة (Laver and Valentine، 1969؛ Laver، 1973)، والتي تشكل طبقة من "الأشواك" على سطح الجزيئات الفيروسية (32).

الهيماجلوتين هو المستضد السطحي الرئيسي. وهو مسؤول عن تفاعل الفيروس مع سطح الخلية وعن تحفيز الأجسام المضادة المعادلة. يساهم تقلب مستضد التراص الدموي في ظهور فيروسات أنفلونزا جديدة.

إن إنزيم NA هو المستضد السطحي الثاني الخاص بالفيروس في جسيم فيروس الأنفلونزا. من الناحية المستضدية، NA يختلف تمامًا عن HA (Seto, Rott, 1966; Webster, Laver, 1967). الأجسام المضادة NA لا تحيد عدوى الفيروس (Seto, Rott, 1966; Webster, Laver, 1967). باستثناء التركيزات العالية جدًا) ولكنها تبطئ بشكل كبير إطلاق الفيروس من الخلايا المصابة (Seto and Rott, 1966; Webster and Laver, 1967; Kilbourne et al., 1968; Becht et al., 1971; Dowdle et al. ، 1974)، وقد تلعب هذه الأجسام المضادة دورًا مهمًا في تقليل تكاثر الفيروس في الجسم الحي ومنع انتشاره

الالتهابات (شولمان وآخرون، 1968). في حين أن التباين الطبيعي متأصل أيضًا في NA، إلا أن الاختلافات في هذا المستضد ربما تكون أقل أهمية بالنسبة لوبائيات الأنفلونزا.

الوحدات الفرعية الملتصقة بالدم هي هياكل على شكل قضيب من البروتين السكري، مثلثة المقطع العرضي، مع وزن جزيئي نسبي يبلغ حوالي 215000 (33). فهي "أحادية التكافؤ" و(تتفاعل مع

مستقبلات الخلية في نهاية واحدة فقط (لافر وفالنتاين، 1969). تكون الوحدات الفرعية المعزولة ذات مناعة عالية عند إعطائها للحيوانات في وجود مادة مساعدة. يحتوي كل جسيم فيروس على ما يقرب من 400 وحدة فرعية من HA (Tiffany Blough، 1970؛ Schulze، 1973؛ Layer، 1973).

تتكون الوحدات الفرعية HA من اثنين من عديدات الببتيد بأوزان جزيئية نسبية تبلغ حوالي 25000 و55000 (Compans et al., 1970; Schulze, 1970; Laver, 1971; Skehel and Schild, 1971; Stanley and Haslam, 1971; Skehel, 1971, 1972; Klenk وآخرون، 1972). يتم تصنيفها على أنها ببتيدات ثقيلة وخفيفة HA1 وHA2. Oi6e، يتم تصنيع هذه السلاسل كمقدمة بلتيدية واحدة يبلغ وزنها الجزيئي حوالي 80.000، والتي تنقسم في بعض الخلايا إلى بولي ببتيدات خفيفة وثقيلة (Lazarowitz et al., 1971, 1973; Skehel, 1972; Klenk et al. ., 1972). في الوحدات الفرعية السليمة، ترتبط السلاسل الثقيلة والخفيفة بواسطة روابط ثاني كبريتيد، وتشكل ديمر، وتتكون كل وحدة فرعية HA من اثنين أو ثلاثة من هذه الثنائيات (لافر، 1971).

الوحدة الفرعية HA لها نهايات كارهة للماء ومحبة للماء (34). النهاية المحبة للماء هي المسؤولة عن النشاط البيولوجي للوحدة الفرعية، بينما تتواصل النهاية الكارهة للماء مع دهون الغلاف الفيروسي. من الواضح أن الخصائص الكارهة للماء للوحدة الفرعية مرتبطة بـ C -النهاية عن طريق قولبة سلسلة عديد الببتيد (HA2) (Skehel، Waterfield، 1975) (OM. Chapter 3).

الوحدة الفرعية للنورامينيداز عبارة عن بنية بروتين سكري يبلغ وزنها الجزيئي النسبي حوالي 240.000 وتتكون من رؤوس مربعة الشكل يبلغ عددها 8-8-4 آبار، ويرتبط في وسطها خيط بذيل منتشر أو بذيل صغير. الرأس في النهاية (، 35) (لافر وفالنتاين، 1969؛ ريجلي وآخرون، 1973). تتمتع الوحدات الفرعية المعزولة بنشاط إنزيمي كامل وتكون شديدة المناعة عند إعطائها للحيوانات مع مادة مساعدة. يحتوي كل جسيم فيروس على ما يقرب من 80 وحدة فرعية من NA (Schulze، 1973؛ Laver، 1973). ومع ذلك، فإن عدد الوحدات الفرعية NA في الجسيم الفيروسي يمكن أن يختلف اعتمادًا على السلالة (Webster et al., 1968; Webster and Laver, 1972; Palese and Schulman, 1974)، وكذلك على نوع الخلية المضيفة التي يوجد عليها الفيروس. لقد نما الفيروس

تتكون وحدات NA الفرعية من أربعة ببتيدات غليكوزيلية ذات وزن جزيئي نسبي يبلغ حوالي 60.000، مرتبطة ببعضها البعض بواسطة روابط ثاني كبريتيد موجودة في الخيط أو في ذيله (انظر أيضًا الفصل 4). في معظم السلالات، تبدو هذه البوليبتيدات الأربعة متطابقة، ومع ذلك، في بعض السلالات، قد تتكون NA من نوعين من متعددات الببتيد يختلفان قليلاً في الحجم (Webster, 1970a; Skehel, Schield, 1971; Bucher, Kilbourne, 1972; Laver, Baker ، 1972؛ لازدينز وآخرون، 1972؛ داوني، لافر، 1973؛ ريجلي وآخرون، 1973).

يتم تحديد الموقع النشط للإنزيم ومحددات المستضدات في مناطق مختلفة من رأس الوحدة الفرعية NA (Ada et al.، 1963؛ Fazekas de St. Groth، 1963)، وهذه الرؤوس لها خصائص محبة للماء. "ذيل" NA كاره للماء ويعمل على ربط الوحدة الفرعية بالقشرة الدهنية للفيروس (Laver، Valentine، 1969) (انظر "29).

أ. عزل وفصل الوحدات الفرعية عن بعضها البعض

بالنسبة لبعض سلالات فيروسات الأنفلونزا، يمكن الحصول على وحدات فرعية نقية وسليمة من HA وNA عن طريق الرحلان الكهربائي على شرائح خلات السليلوز بعد تدمير الجزيئات الفيروسية باستخدام SDS (Laver، 1964، 1971؛ Laver and Valentine، 1969؛ Downie، 1973). يعتمد نجاح عزل أي من هذه الوحدات الفرعية باستخدام هذه التقنية على مقاومتها للتسخين بواسطة SDS في درجة حرارة الغرفة. ووفقا لهذا المعيار، يمكن تقسيم فيروسات الأنفلونزا إلى أربع مجموعات.

1. الفيروسات ذات الوحدات الفرعية HA المقاومة للكحول المحوَّل الصفات

SDS. عندما يتم تدمير هذا النوع من الفيروسات بواسطة SDS وelec

الرحلان على شرائح خلات السليولوز وجميع البروتينات الفيروسية،

"إلى جانب الوحدات الفرعية HA، فإنها تهاجر على شكل أنيونات. هيماغلوتي-

يمكن عزل النين المهاجر ككاتيون بشكل نقي

شكل مع استعادة كاملة للنشاط البيولوجي

في ظل ظروف لا تدمر الروابط التساهمية [على سبيل المثال

التدابير: أ/بيل/42 (H0N1)].

2. الفيروسات ذات الوحدات الفرعية NA المقاومة للتشوه

SDS. يمكن للوحدات الفرعية النقية والنشطة لزمالة المدمنين المجهولين أن تكون أنت

يتم فصلها عن هذه الفيروسات بالطريقة الموضحة أعلاه (على سبيل المثال

التدابير: ب/لي/40).

3. الفيروسات التي لا يكون فيها HA أو NA مقاومًا للدينا

توريشن SDS. في هذه الحالة، تهاجر جميع البروتينات الفيروسية

مثل الأنيونات ولا تستطيع أي من الوحدات الفرعية السطحية ذلك

يمكن عزلها باستخدام الطرق الموضحة [على سبيل المثال:

A/NWS/33 (H0N1)].

4. الفيروسات التي تحتوي على وحدتين فرعيتين HA وNA

مقاومة تمسخ SDS. بالنسبة لهذه الفيروسات، كلاهما فرعي

الوحدات أثناء الرحلان الكهربائي - تهاجر على شكل كاتيونات

ولا يمكن تقسيمها بهذه الطريقة [على سبيل المثال:

أ/سنغافورة؟ 1/57 (ح2ن2)].

يمكن عزل الوحدات الفرعية HA وNA للمجموعة الأخيرة من الفيروسات، كما هو موضح في 36. تم عزل فيروس أنفلونزا الطيور (A/petrel/Australia/1/72(Hay6Mau5)) والذي كان مستقرًا لـ SDSHAHNA (Downie and Laver) ، 1973). في التقدم الكهربي لخلات السليولوز، تتحرك معًا على شكل كاتيونات (انظر 31، أعلى) ولا يمكن فصلها بهذه الطريقة. في هذا الصدد، تم فصل نوعي هذه الوحدات الفرعية وراثيًا باستخدام إعادة التركيب (ويبستر، 1970 ب). للحصول على المواد المؤتلفة، يتم عزل الفيروسات الأبوية ذات الوحدات الفرعية HA أو NA الحساسة لتغيير طبيعة SDS. تم بعد ذلك عزل الوحدات الفرعية لفيروس الطيور المستقر SDS HA وNA من جزيئات الفيروس المؤتلف المتحللة SDS بواسطة الرحلان الكهربائي على شرائح خلات السليلوز (em. 31، IB وسط و القاع) الوحدات الفرعية النقية اللازمة للتحليل الكيميائي وتحضير الأمصال المضادة "أحادية النوعية".

يمكن أيضًا عزل الوحدات الفرعية HA و NA من سلالات معينة من فيروس الأنفلونزا عن طريق معالجة الجزيئات الفيروسية باستخدام الإنزيمات المحللة للسكر (Noll et al.، 1962؛ Seto et al.، 1966؛ Compans et al.، 1970؛ Brand and Skehel، 1972؛ Wrigley). وآخرون، 1973).بهذه الطريقة، يحدث فصل الوحدات الفرعية السطحية عن الجزيئات الفيروسية، على ما يبدو، نتيجة لهضم النهايات الكارهة للماء (نهايات سلسلة البوليبنتيد، المسؤولة عن ربط الوحدات الفرعية بالدهون) ومع ذلك، يجب أن يحدث الهضم الجزئي أيضًا في مناطق أخرى من الوحدة الفرعية HA، ونتيجة لذلك يتعطل نشاط التراص الدموي ويتم فقدان بعض محددات المستضدات.

ب. فصل متعددات الببتيد الهيماجلوتينين (HA1 وHA2)

يمكن فصل السلاسل الخفيفة والثقيلة من الوحدات الفرعية الملتصقة بالدم عن طريق الفصل الكهربائي لجسم بولي أكريلاميد SDS. ومع ذلك، لأغراض تحضيرية، يتم تحقيق أفضل فصل عن طريق الطرد المركزي المتدرج للكثافة لجوانيدين هيدروكلوريد-ثنائي ثيوثريثول (لافر، 1971)، والذي يتم تنفيذه في ظل ظروف يتم فيها كسر روابط ثاني كبريتيد، أو عن طريق الترشيح الهاتفي في محلول جوانيدين هيدروكلوريد-ثنائي ثيوثريثول ( ويبستر، 1970 أ). يبدو أن هذا الفصل يعتمد على الكارهة للماء الكبيرة لسلسلة البولي ببتيد الخفيفة. أثناء الطرد المركزي في محلول مركّز من جوانيدين هيدروكلوريد - ثنائي ثيوثريثول، يهضم هذا البوليببتيد الخفيف بشكل أسرع من السلسلة الثقيلة، وأثناء ترشيح الهلام، تخرج السلسلة الخفيفة أولاً، ويرجع ذلك على ما يبدو إلى حقيقة أنه حتى في مثل هذه البيئة المنفصلة بقوة، فإن السلسلة الخفيفة لا يوجد iB كمونومر.

تنطبق هذه الملاحظات فقط على "الوحدات الفرعية HA التي تم الحصول عليها من فيروس نما على الخلايا التي يحدث فيها انقسام بروتيني كامل للسلائف."

من البولي ببتيد HA إلى NAL وHA2. علاوة على ذلك، لا يمكن فصل الببتيدات الثقيلة والخفيفة (HA1 وHA2) للوحدات الفرعية HA الناتجة عن الهضم المحلل للبروتين بهذه الطريقة، ربما لأن الهضم يدمر المناطق الكارهة للماء في السلسلة الخفيفة (Skehel، Laver، بيانات غير منشورة).

ب. خصائص NA1 و NA2

كان لسلاسل البولي ببتيد الخفيفة والثقيلة لسلالة فيروس الأنفلونزا A BEL (H0N1) تركيبة بولي ببتيد مماثلة، فيما عدا أن البولي ببتيد الثقيل يحتوي على برولين أكثر بكثير من السلسلة الخفيفة (Laver and Raker، 1972). ومع ذلك، فإن خرائط الببتيد لنواتج الانقسام التربتي لهاتين السلسلتين كانت مختلفة تمامًا، مما يشير إلى اختلاف تسلسلات الأحماض الأمينية في هذه السلاسل (Laver, 1971). تحتوي كلتا سلسلتي البولي ببتيد على الكربوهيدرات، لكن تحليل الجلوكوزامين يشير إلى أن البولي ببتيد الثقيل يحتوي على عدد أكبر بكثير من الكربوهيدرات من السلسلة الخفيفة. تم العثور على السلسلة الثقيلة تحتوي على 9.4٪ N-acetylglucosamine، بالإضافة إلى السكريات المحايدة. لذا فهو على الأرجح يحتوي على حوالي 20% من الكربوهيدرات.

د. عدد الفيروسات المحددة المختلفة

محددات المستضد على السطح

الوحدات الفرعية لكل

عدد المستضدات المختلفة الخاصة بالفيروس

المحددات على الوحدات الفرعية للفيروس

أنفلونزا غير معروفة (على سطح التراص الدموي

وحدات فرعية هناك أيضا محددات محددة

إلى الخلية المضيفة). وقد أظهرت التجارب الأخيرة

ومع ذلك، فإن الوحدات الفرعية الملتصقة بالدم من سلالة غون

كونغ (H3N2) فيروس الأنفلونزا البشرية لديهم على الأقل

ما لا يقل عن اثنين، وربما أكثر، مختلفة خاصة بالفيروسات

المحددات المستضدية الشكلية (لافر وآخرون، 1974).

وقد تم إثبات ذلك على النحو التالي: هيماغلو

تم اشتقاق وحدات فرعية من القصدير من فيروس الأنفلونزا

هونغ كونغ (A/Hong Kong/68, H3N2) ومتغيرها المستضدي

A/Memphis/102/72 والتي نشأت نتيجة المستضدات

المغزى. وأظهرت اختبارات الانتشار المناعي أن الوحدات الفرعية

تحتوي متغيرات فيروس هونج كونج/68 على اثنين على الأقل

أنواع مختلفةالمحددات المستضدية، في حين VA

riant 1972 يحمل، على ما يبدو، ثلاث مرات على الأقل

المحددات الشخصية (37).

كان للوحدات الفرعية للتراص الدموي للفيروسات A/Hong Kong/68 وA/Memphis/102/72 محدد مشترك واحد. تفاعلت الأجسام المضادة لهذا المحدد مع كلا الفيروسين في الانتشار المناعي، وتثبيط تراص الهيم، واختبارات التعادل. ولم تظهر الأجسام المضادة للمحددات الأخرى أي تفاعلات مصلية هامة بين فيروسات هونج كونج/68 وممفيس/72. وبالتالي، فمن من الواضح أنه في عملية مكافحة

الانجراف الوراثي، شهد فيروس أنفلونزا هونج كونج تغيرات كبيرة في أحد محدداته "المحددة". بيانات من لافر وآخرون. (1974) (يشير إلى أن المحددات المستضدية المختلفة يتم وضعها على نفس الوحدة الفرعية HA وأن الجزيئات الفيروسية لا تمتلك خليطًا من الوحدات الفرعية المتميزة من الناحية المستضدية.

د. توطين مستضد الخلية المضيفة

على الرغم من أن الأوصاف الأولى لمستضد الخلية المضيفة في فيروس الأنفلونزا (نايت، 1944، 1946) قوبلت ببعض الشكوك، إلا أن وجودها أصبح الآن راسخًا. تم الكشف عن وجود مثل هذه المستضدات من خلال عدد من الطرق المصلية، بما في ذلك تفاعلات الترسيب (نايت، 1944)، وتفاعلات الانتشار المناعي (هاو وآخرون، 1967)، والتثبيت التكميلي (سميث وآخرون، 1955)، وتثبيط التراص الدموي (نايت، 1955). 1944؛ Harboe وآخرون، 1961؛ Harboe، 1963a) وطريقة منع تثبيط التراص الدموي (Harboe، 1963b؛ Laver، Webster، 1966). يتكون مستضد الخلية المضيفة بشكل أساسي من الكربوهيدرات ويرتبط بالبولي ببتيدات للوحدات الفرعية HA و NA. لم يتم اكتشاف أي اتصالات بين المستضد المضيف (والكربوهيدرات) والبروتينات الداخلية للجسيم الفيروسي.

إحدى السمات الغامضة للمستضد المضيف لفيروسات الأنفلونزا هي أنه يتم اكتشافه في الفيروسات التي تنمو في تجويف السقاء لأجنة الدجاج أو الديك الرومي (Harboe، 1963a)، ولكن ليس في الفيروسات التي تنمو، على سبيل المثال، في تجويف السقاء في البط. في الأجنة أو في رئتي الفئران أو في مزارع الخلايا المختلفة. لم يتم تثبيط الفيروسات التي تنمو على هذه الخلايا على الإطلاق في تفاعل تثبيط التراص بواسطة الأمصال المضادة التي تم الحصول عليها من مستخلصات من خلايا مضيفة غير مصابة. ربما يرجع هذا إلى حقيقة أن الفيروس الذي نما في هذه الخلايا "تحتوي على كربوهيدرات" الخلية المضيفة، ولكن لسبب ما إما أنها لا تحتوي على خصائص مستضدية أو أن الأجسام المضادة الموجهة ضدها لا تمنع تراص الهيم.

E. دور مستضد الخلية المضيفة

قد يلعب مكون الكربوهيدرات دورًا مهمًا جدًا في تجميع الغلاف الفيروسي. يتم تجميع الوحدات الفرعية المعزولة NA وHA في غياب SDS. وهذا يعطي سببًا للاعتقاد بأن هذه الوحدات الفرعية لها نهايات كارهة للماء ومحبة للماء (Laver and Valentine، 1969)، وربما يحدد مكون الكربوهيدرات في الخلية المضيفة الكارهة للماء في أحد طرفي الوحدات الفرعية HA وNA.

G. التباين المستضدي للوحدات الفرعية

تم اكتشاف الهيماجلوتينين والنورامينيداز

مضادات الأمصال الأحادية النوعية

حتى وقت قريب، كان يُعتقد أن المستضد V، أو غلاف جسيم فيروس الأنفلونزا، شيء غير قابل للتجزئة، لكن الأمر ليس كذلك. من المعروف الآن أن المستضد V يتكون من HA وNA والمستضد الفيروسي للخلية المضيفة. لم يرد هذا في أي من الأعمال المنشورة سابقًا حول العلاقات المستضدية بين فيروسات الأنفلونزا<не принималось во внимание, <в результате чего уровни реакций перекреста ■между данными вирусами зависели от используемых тестов. Так, широко используемая штаммоспецифическая реакция связывания комплемента выявляла перекрестные реакции окзк между нейраминидазными, так и между гемагглютипи-рующими антигенами, :в то время как реакция перекреста между нейраминидазным"и антигенами может выявляться также и в РТГА. Это происходит потому, что в интактном вирусе может возникать «стерическая нейтрализация» нейр-аминидазной активности антителами к гемагглютинину и наоборот (Laver, Kilbourne, 1966; Schulman, Kilbourne, 1969; Easterday et al., 1969; Webster, Darlington, 1969).

يمكن دراسة الانجراف المستضدي لمستضدات فيروس الأنفلونزا الفردية بعد فصل هذه المستضدات عن الجسيمات الفيروسية (ويبستر ودارلينجتون، 1969) أو عن طريق "فصل هذه المستضدات وراثيا (كيلبورن وآخرون، 1967). وهكذا، الآن مع استخدام الأمصال المضادة أحادية النوعية "لهذين المستضدين،" من الممكن إجراء دراسات مصلية مفصلة عن الانجراف المستضدي لمستضدات فيروس الأنفلونزا الفردية.

V. آلية الانجراف المستضدي

(مستضد طفيف

يتغير)

ألف - مقدمة

من المحتمل أن المظهرين المتميزين للتباين المستضدي الذي لوحظ بين فيروسات الأنفلونزا A، وهما الظهور المفاجئ لأنواع فرعية مستضدية جديدة والانحراف التدريجي داخل نوع فرعي واحد، لا علاقة لهما ببعضهما البعض.

من المقبول عمومًا أن الانجراف - الاستبدال المتسلسل لفيروسات الأنفلونزا A بسلالات جديدة مستضدية - هو النتيجة

التفاعل المتبادل بين التباين الطفري للفيروس والاختيار المناعي

يتم تأكيد أهمية آلية الاختيار هذه من خلال الإنتاج التجريبي للمتغيرات المستضدية عن طريق انتشار فيروسات الأنفلونزا في وجود كميات صغيرة من مضادات النوبات (بيرنت، ليند، 1949؛ أركيتي، هورسفال، 1950؛ إسحاق، إيدني، 1950؛ إيدني، 1957). ؛ لافر، ويبستر، 1968) أو في الحيوانات ذات المناعة الجزئية (Gerber et al.

1955، 1956؛ ماجيل، 1955؛ هامري وآخرون، 1958). وبائية

وتتوافق الملاحظات أيضًا مع هذه الآلية التي

مما يقدم تفسيرا معقولا لاختفاء الفم

السلالات الناشئة من السكان البشريين.

تم طرح العديد من الفرضيات لشرح آلية الانجراف المستضدي. يقترح أحدهم (فرانسيس، 1952، 1955، 1960؛ جنسن وآخرون، 1956؛ جنسن، 1957) أن سطح فيروس الأنفلونزا يتكون من فسيفساء من المستضدات التي تنتمي إلى جميع السلالات من نوع معين، ولكنها موجودة في الأفراد سلالات مستضدية بنسب مختلفة أو في أماكن مختلفة. يجب أن يكون التباين المستضدي نتيجة لإزاحة هذه المستضدات على الغلاف الفيروسي من الوضع البارز إلى "الوضع المخفي". ووفقا لفرضية أخرى (هيلمان، 1952؛ ماجيل، جوتز، 1952؛ أندروز، 1952).

1956، 1957؛ Takatsy، Furesz، 1957)، المستضدات تدريجيا

تقع في سياق التقلب. وكلتا الفرضيتين تتطلبان

وجود عدد كبير نسبيا من المستضدات

لكن جزيئات بروتينية مختلفة على سطح السادس

جنسن وآخرون. (1956) وجد أنه في كل من السلالات العديدة في المجموعة الواسعة من فيروسات الأنفلونزا A المتاحة للبحث في عام 1953، كان عدد المستضدات الموجودة بكميات و/أو مواقع مختلفة يصل إلى 18. وتم توسيع هذه البيانات لتشمل العديد من المتغيرات الجديدة ويبدو أن الاكتشاف الذي تم اكتشافه منذ ذلك الحين يؤدي إلى "افتراض وجود عدد أكبر من المستضدات في كل فيروس، خاصة إذا تم قبوله، وعلى ما يبدو

حسنًا، من المنطقي أن تكون السلالات المعزولة من البشر والخنازير والخيول والطيور جزءًا من نفس المجمع.

لا يمكن ربط وجود مثل هذا العدد الكبير من جزيئات البروتين الفردية في فيروسات الأنفلونزا بقدرة تشفير الحمض النووي الريبوزي الفيروسي (لافر، 1964). بالإضافة إلى ذلك، المجهر الإلكتروني (لافرتي، أورتيليس، 1963)، والكيمياء المناعية (فازيكاس دي سانت جروث). ، 1961، 1962؛ Fazekas de St. Groth، Webster، 1963، 1964) و"البيانات الكيميائية الحيوية (Laver، 1964) أكثر اتساقًا مع وجود عدد محدود جدًا من جزيئات البروتين التي يمكن تمييزها بواسطة المستضدات على الغلاف الفيروسي.

بناءً على التجارب الحديثة، من المفترض أن الانجراف المستضدي هو نتيجة اختيار مجموعة مناعية من الجزيئات الفيروسية الطافرة ذات "محددات مستضدية متغيرة، وبالتالي مع مزايا في النمو في وجود الأجسام المضادة (الجدول 26). علاوة على ذلك، كان من المفترض "تبين أن هناك تغييرات في تسلسل الأحماض الأمينية في عديدات الببتيدات لوحدات التراص الدموي للطفرات المستضدية المعزولة عن طريق الاختيار بواسطة الأجسام المضادة في نظام في المختبر (Laver، Webster، 1968) (الشكل 38).

كشفت خرائط الببتيد أنه خلال الانجراف المستضدي الطبيعي هناك أيضًا تغييرات في تسلسل الأحماض الأمينية لكل من سلاسل البولي ببتيد الخفيفة والثقيلة (39).

تشير هذه النتائج إلى أن التباين المستضدي بين فيروسات الأنفلونزا يرتبط بالتغيرات في تسلسل الأحماض الأمينية لبروتيناتها المستضدية. على الرغم من أن بعض التغييرات في التسلسل قد تكون عشوائية، ولها تأثير ضئيل أو معدوم على محددات المستضد، فمن المحتمل أن بعض هذه التغييرات تؤثر على محددات المستضد

الوحدات الفرعية HA، مما يجعلها أقل قدرة على "الملاءمة" الصارمة لجزيئات الجسم المضاد المقابلة. ومع ذلك، فإن التجربة لا تظهر ما إذا كانت هذه التغييرات موجودة على وجه التحديد في المحددات المستضدية للبروتينات الفيروسية أو في بعض المناطق الأخرى من الجزيء.

تظهر فيروسات الأنفلونزا تفاعلات متقاطعة غير متماثلة في RTGA. قام Fazekas de St.-Groth (1970) بتسمية الفيروسات

والتي تتصرف بطريقة مماثلة، السلالات "الأكبر سنا" و"الأصغر سنا". علاوة على ذلك، "اقترح (Fazekas de St. Groth، 1970) أنه في عملية الانجراف المستضدي الطبيعي، تحل فيروسات الأنفلونزا "الأقدم" محل السلالات "الأصغر سنا". والافتراض الأخير "يتم تأكيده فقط من خلال بيانات متفرقة للغاية".

ب. هل من الممكن التنبؤ باتجاه الانجراف"

تظل قدرة فيروس الأنفلونزا على الخضوع للتغيرات المستضدية مصدر قلق كبير. ويجب عزل كل متغير جديد وتحديده قبل البدء في إنتاج اللقاح، وبالتالي فإن كل متغير جديد لديه القدرة على إصابة أعداد كبيرة من الناس قبل أن يمكن السيطرة عليه باللقاحات.

وفي هذا الصدد، جرت محاولات للتنبؤ بالانجراف المستضدي في المختبر، ولكن لم تكن ناجحة تمامًا. حنون و فازيكاس دي سانت. جروث في معهد باستور في باريس، تم تمرير السلالة A/هونج كونج/68 (H3N2) في وجود تركيزات صغيرة من المصل المضاد. وبعد عدة دورات نمو، تم الحصول على متغير لم يعد خاضعًا للطفرات المستضدية في ظل هذه التجارب التجريبية. اقترح الباحثون أن هذا المتغير يمثل نقطة النهاية للتطور داخل النمط المصلي النيوزيلندي، وبالتالي كان فيروسًا ناشئًا (والذي ربما كان متوقعًا بعد عام 1970). وقد تم دعم هذا الافتراض من خلال اكتشاف أن متغير لندن للأنفلونزا كان الفيروس، الذي تم عزله لأول مرة، في عام 1972 (A/England/42/72)، مشابهًا جدًا من الناحية الجينية للطفرة الأولى التي حصل عليها حنون وفازيكاس دي سانت جروث في مختبرهما قبل عام (فازيكاس دي سانت جروث، حنون، 1973).

كان من المأمول أن توفر اللقاحات المشتقة من النسخة النهائية "الأقدم" الحماية ضد جميع المتغيرات النيوزيلندية التي قد تنشأ لدى البشر. ومع ذلك، تم عزل فيروسات الأنفلونزا A لاحقًا في عامي 1973 و1974 (على سبيل المثال A/Port Chalmers/1/73)، والتي كانت مختلفة مستضديًا عن سلالة A/England/42/72، وكانت أيضًا مختلفة بشكل كبير عن المتغير المنتج صناعيًا، مما يشير إلى أنه في ظل الظروف الطبيعية لم يسير الانجراف في الاتجاه المتوقع.

على أية حال، فإن المتغير الذي تم الحصول عليه في المختبر عن طريق المرور في وجود مصل مضاد قد تعرض للانجراف فقط في NA، في حين أن المتغيرات الطبيعية تظهر الانجراف في كل من NA و NA. وهكذا، باءت هذه المحاولة لتحضير اللقاح «المستقبلي» لوتيديموما بالفشل.

ب. إمكانية حدوث تغييرات كبيرة في بعض محددات المستضد أثناء انجراف المستضد

في القسم الرابع، تبين أن الوحدات الفرعية HA لفيروس أنفلونزا هونج كونج تمتلك نوعين على الأقل من المحددات المستضدية وأنه في عملية التطور، من خلال الانجراف المستضدي لفيروس أنفلونزا هونج كونج، تم تشكيل فيروس (أ). /Memphis/102/72)، وفيها أحد هذه المحددات المستضدية

شهد التريميانت تغيرًا مستضديًا كبيرًا (يمكن مقارنته في الحجم بالتحول المستضدي)، بينما "انجرف" الآخر (om. 37). وقد أطلقنا على أول هذه المحددات اسم "محدد" والثاني "مشترك" لهذين الفيروسين<(Laver et al., 1974).

لا تكتشف الأجسام المضادة للمحدد "المحدد" أي تفاعلات متقاطعة بين الفيروسين في الانتشار المناعي أو العلاج التعويضي بالهرمونات أو تحييد اختبارات العدوى. كان هناك محدد (محددات) آخر مشترك بين كلا الفيروسين (على الرغم من حدوث بعض الانجراف المستضدي في هذا المحدد)، وتم العثور على تفاعلات متصالبة بين فيروسات هونج كونج/68 وممفيس/72 بسبب نفس الأجسام المضادة لهذا المحدد (المحددات "المشتركة" ).

تتفاعل حيوانات البكالوريا الدولية المختلفة مع محددات مختلفة بدرجات متفاوتة عند تحصينها بنفس إعداد وحدات فرعية HA المعزولة. قد تفسر هذه الاختلافات في الاستجابة المناعية التباين في التفاعلات المتقاطعة التي يتم ملاحظتها أحيانًا بين فيروسين عند اختبارهما بأمصال مختلفة.

على الرغم من التغير المستضدي الكبير في IB ONE

من محددات الخرائط الببتيدية للبولي الثقيل والخفيف

الببتيدات (HA1 و HA2) من وحدات فرعية HA لفيروسات هونج كونج/68

■ وممفيس/72 كانتا متشابهتين إلى حد كبير (انظر

39)، وعلى أساسه يفترض أنه في هذه العملية

تطور فيروس هونج كونج والتعليم. ميمي البديل

fis/72 في تسلسل الأحماض الأمينية لهذه الببتيدات

تحدث تغييرات صغيرة نسبيا فقط. إيزمي

تحدث اختلافات في الخرائط الببتيدية على أنها ثقيلة (HA1)،

والسلاسل الببتيدية الخفيفة (HA2)؛ البعض منهم

قد تكون تغييرات عشوائية، ويتم اختيار الآخرين

تحت ضغط الأجسام المضادة.

د. التغيرات المستضدية في النورامينيداز

لوحظ الانجراف المستضدي في مستضد النورامينيداز

ليست فيروسات الأنفلونزا من النوع A والنوع B (Paniker، 1968؛

شولمان، كيلبورن، 1969؛ شيلد وآخرون، 1973؛ كاري وآخرون.

1974). ربما يحدث من خلال الاختيار (تحت الضغط

الأجسام المضادة) المسوخات التي لها تسلسل متغير

محتوى الأحماض الأمينية في ببتيدات الوحدة الفرعية NA

(كيندال، كيلي، 1973). حتى الآن لم يكن من الممكن تحقيق مكافحة

الانجراف الوراثي في ​​المختبر. الأجسام المضادة لـ NA ليست محايدة

ومعرفة مدى عدوى الفيروس؛ ولذلك فمن المرجح أن

تقلب هذا المستضد أقل أهمية للبقاء على قيد الحياة

الفيروس من تباين HA (Seto، Rott، 1966؛ Dowdle et al.،

هـ. التباين المستضدي لفيروسات الأنفلونزا من النوع ب

يحدث الانجراف المستضدي بين فيروسات الأنفلونزا B بنفس القدر تقريبًا كما هو الحال بين فيروسات الأنفلونزا A، ولكن التحولات المستضدية المهمة التي شوهدت فيها لم يتم العثور عليها بين سلالات الأنفلونزا B. الانجراف المستضدي (يتضمن التغيرات في كلا المستضدين - NA و NA (Chakraverty، 1972a ، ب؛ كاري وآخرون، 1974).من المحتمل أن تكون آلية التباين المستضدي لسلالات B مشابهة لتلك الكامنة في فيروسات الأنفلونزا A، ولكن "لم يتم إجراء أي دراسات كيميائية حيوية.

هـ. التغيرات في المستضدات في فيروسات أنفلونزا الطيور والحيوانات

لم تتم دراسة التغيرات المستضدية بين فيروسات الأنفلونزا التي تصيب الثدييات والطيور السفلية بشكل جيد ولا يتوفر سوى القليل من المعلومات عنها. ومع ذلك، بناءً على بعض النتائج، يمكن الافتراض أن الانجراف المستضدي يحدث أيضًا في السلالات (أنفلونزا الثدييات والطيور)، ولكن بدرجة أقل مما يحدث في فيروسات الأنفلونزا التي تصيب البشر.

وقد لوحظ الانجراف المستضدي في فيروسات أنفلونزا الخنازير والخيول (النمط الظاهري 2) (Meier-Ewert et al., 1970; Pereira et al., 1972)، ولكن لا توجد بيانات عن الانجراف المستضدي في فيروسات أنفلونزا الطيور. ولعل السبب في ذلك هو أن الطيور، وخاصة الطيور الداجنة، تعيش حياة أقصر من الإنسان أو الخيول. في البشر، يحل كل متغير لاحق من فيروس الأنفلونزا A محل الفيروس السابق بسرعة، ولكن الفيروسات التي تختلف عن بعضها البعض غالبًا ما تنتشر في وقت واحد بين الحيوانات والطيور.

السادس. آلية التحول المستضدي (التغيرات الكبيرة في المستضدات)

أثناء التغيرات المستضدية من نوع آخر، تتعرض الوحدات الفرعية السطحية للفيروس لتحولات مستضدية كبيرة. ومع هذه التحولات الكبرى، يحدث تغير مفاجئ وكامل في أحد المستضدات السطحية أو كليهما، بحيث تنشأ فيروسات "جديدة" لا توجد مناعة ضدها بين السكان. وهذه هي نفس الفيروسات التي تسبب جوائح الأنفلونزا.

توفر فيروسات أنفلونزا H2N2 البشرية نظامًا طبيعيًا لدراسة الجوانب الجزيئية للتحولات المستضدية المهمة. كانت الفيروسات التي ظهرت في البشر عام 1957 تحتوي على وحدات فرعية HA وNA كانت مختلفة تمامًا من الناحية المستضدية عن تلك الموجودة في سلالات H1N1. فيروسات H2N2

شهدت انجرافًا مستضديًا حتى عام 1968، عندما ظهرت سلالة وبائية "جديدة" في هونغ كونغ. فيروسات .A2 (H2N2) وسلالة هونغ كونغ (H3N2) نشأتا في الصين. كان لفيروس هونج كونج نفس NA مثل الفيروسات A2 السابقة، ولكن NA مختلف من الناحية المستضدية (Coleman et al.، 1968؛ Schulman and Kilbourne، 1969). وقد تم توضيح ذلك بوضوح باستخدام أمصال مضادة محددة لعزل وحدات فرعية من HA لممثلي فيروسات الأنفلونزا من النوع A2 (المزروعة في أجنة الدجاج. وقد تم استخدام هذه الأمصال أحادية النوعية في RTGA مع الفيروسات المزروعة في أجنة البط (ويبستر، لافر، 1972)، مما أدى إلى القضاء على مشاكل القمع الاستاتيكي للأجسام المضادة المتراصة للدم لـ NA ومستضد الخلية المضيفة، والذي يمكن أن يحدث عند استخدام الأمصال لفيروسات كاملة.

أظهرت نتائج هذه الاختبارات (الجدول 27) أن المراسلات المصلية بين مستضدات الراصة الدموية لسلالات A2/آسيا "القديمة" المعزولة بين عامي 1957 و 1957

عام 1968، ولم يكن هناك فيروس هونج كونج (1968). ومن بين سلالات هونج كونج الثلاث التي تم عزلها خلال السنوات الثلاث الأولى من جائحة الأنفلونزا، لم يكن هناك أي اختلاف أو كان هناك اختلاف طفيف (ويبستر ولافر، 1972). من أين أتت إذن وحدات فرعية HA "الجديدة" لفيروس أنفلونزا هونج كونج؟ يبدو أن هناك سببين محتملين لتكوين وحدات فرعية "جديدة" من التراص الدموي: إما أنها نشأت نتيجة لطفرة من فيروس أنفلونزا بشري موجود أو جاءت من مصدر آخر، مثل فيروسات أنفلونزا الحيوانات أو الطيور.

يمكن أن تتسبب طفرة واحدة في فيروس الأنفلونزا "القديمة" A2/Asia في طي سلاسل البوليببتيد للوحدات الفرعية HA بحيث يتم تشكيل سلاسل جديدة تمامًا

المحددات المستضدية. إذا تم الحصول على الوحدات الفرعية HA لفيروس أنفلونزا هونج كونج عن طريق مثل هذه الطفرة من فيروسات سابقة من النوع A2، فيجب أن يكون تسلسل الأحماض الأمينية في متعددات الببتيدات للوحدات الفرعية "القديمة" و"الجديدة" قريبًا. تم وصف التحول الكامل في أحد المحددات المستضدية للوحدات الفرعية HA، والذي حدث أثناء عملية الانجراف المستضدي، سابقًا، وهذا "التحول" في أحد المحددات لا يصاحبه، على ما يبدو، أي تغييرات عامة مهمة في تابع للأحماض الأمينية "H" Osti في عديدات الببتيد HA. ومع ذلك، إذا لم تنشأ الوحدات الفرعية "الجديدة" من خلال الطفرة والاختيار، ولكنها تأتي من فيروس الأنفلونزا الحيواني، فإن سلاسل البوليببتيد الخاصة بها قد تختلف بشكل كبير في تسلسل الأحماض الأمينية عن سلاسل اللوليبابتيد لفيروسات A2/Asia "القديمة".

تم عزل وحدات HA الفرعية من ثلاث سلالات من الأنفلونزا A2/آسيا تم الحصول عليها في عام 1968 قبل ظهور جائحة أنفلونزا هونج كونج، ومن ثلاث سلالات من فيروس أنفلونزا هونج كونج المعزولة في أجزاء مختلفة من العالم في أعوام 1968 و1970 و1971. بسبب الانجراف المستضدي، تظهر الفيروسات الثلاثة المعزولة في نهاية الفترة A2/آسيا اختلافات كبيرة في المستضدات. من ناحية أخرى، فإن سلالات هونج كونج الثلاث التي تم عزلها خلال السنوات الثلاث الأولى من الوباء الجديد لا تظهر أي تباين مستضدي تقريبًا.

تم فصل وحدات HA المعزولة من كل من هذه السلالات الفيروسية الست عن طريق المعالجة باستخدام هيدروكلوريد الجوانيدين وديثيوثريتول وتم فصل أهدافها الخفيفة والثقيلة عن طريق الطرد المركزي (Laver، 1971). تم تجريب كل هدف من أهداف البولي ببتيد المعزولة وتم رسم خرائط الببتيدات الثلاثية. وأظهرت الخرائط أن سلاسل البوليببتيد من الوحدات الفرعية الملتصقة بالدم لفيروسات A2 "القديمة"، التي تم عزلها عام 1968، تختلف بشكل كبير في تركيب الأحماض الأمينية عن سلاسل لوليليبتيد من سلالات هونج كونج "الجديدة"!(40 و41). في الوقت نفسه، كان من المفترض أن البوليبلتيدات "الجديدة" لم يتم الحصول عليها عن طريق الطفرة من تلك "القديمة" (لافر، ويبستر، 1972).

أحد التفسيرات لهذه النتيجة هو أن طفرة انزياح الإطار تؤدي إلى ببتيدات ذات تسلسلات مختلفة تمامًا من الأحماض الأمينية. ومع ذلك، يبدو من غير المرجح أن مثل هذه الطفرة، في حالة حدوثها، ستؤدي إلى بوليبلتيدات قادرة على تشكيل وحدة تراص الدم الوظيفية. ثانيًا، قد تحدث طفرات تؤثر بشكل رئيسي على الأحماض الأمينية الأساسية، بحيث يمكن أن تختلف خرائط الببتيدات الثلاثية بشكل كبير دون أي تغيير مهم في تسلسل الأحماض الأمينية الإجمالي للوليليتيدات.

تم الآن الحصول على بيانات تشير إلى أن بعض فيروسات الأنفلونزا الحيوانية هي سلائف محتملة لسلالة هونج كونج من فيروس الأنفلونزا البشرية. 1/63 (Hav7Neq2)، الذي تم عزله من الخيول والبط في عام 1963، أي قبل 5 سنوات من ظهور أنفلونزا هونج كونج لدى البشر، تبين أنه مشابه من الناحية المستضدية لسلالة هونج كونج (Coleman et al., 1968; Masurel, 1968؛ كابلان، 1969؛ زاكستيلسكايا وآخرون، 1969؛ توموفا، عيد الفصح، 1969؛ كاسل وآخرون، 1969).

أعطت الوحدات الفرعية HA لفيروسات الخيول والبط تفاعلات متصالبة في RTGA وفي اختبار الانتشار المناعي مع الوحدات الفرعية لسلالة هونغ كونغ من فيروس الأنفلونزا البشرية A/Hong Kong/1/68 (H3N2). علاوة على ذلك، كانت الخرائط الببتيدية للسلاسل الخفيفة لفيروسات الخيول والبط والفيروسات البشرية متطابقة تقريبًا، مما أدى إلى افتراض أن السلاسل الخفيفة من هذه السلالات الثلاثة لها تسلسلات أحماض أمينية متطابقة تقريبًا (Laver and Webster, 1973). يظهر هذا بوضوح من 42، حيث تكون خرائط الببتيد لسلاسل ضوء المصاصات من وحدات HA الفرعية لفيروس أنفلونزا هونج كونج ومن سلالات البط // أوكرانيا والحصان/ ميامي (النمط المصلي الثاني) متطابقة تقريبًا وتختلف بشكل كبير عن الخريطة السلاسل الخفيفة المصاصية من الفيروس "القديم" Asia/68.

تشير هذه النتائج إلى أن فيروسات الخيول والطيور وفيروس سلالة هونج كونج البشرية ربما نشأت عن طريق إعادة التركيب الجيني من سلف مشترك، وتقترح آلية بديلة للطفرة لتفسير أصل فيروس أنفلونزا هونج كونج.

وقد أظهرت الدراسات الحديثة أن أمصال الطيور البرية تحتوي على أجسام مضادة موجهة ضد المستضدات الموجودة في فيروسات الأنفلونزا التي تصيب الإنسان (منظمة الصحة العالمية، 1972). بالإضافة إلى ذلك، تم مؤخرًا عزل فيروسات الأنفلونزا من الطيور البرية البعيدة عن التجمعات البشرية، مما يشير إلى أن الأنفلونزا كانت عدوى طبيعية للطيور منذ آلاف السنين (داوني ولافر، 1973).

وكان راسموسن (1964) أول من اقترح أن فيروسات الأنفلونزا الجائحة تنشأ من هذه الفيروسات الحيوانية نتيجة لعملية إعادة التركيب. وفي وقت لاحق، حصل توموفا وبيريرا (1965)، وكيلبورن (1968)، وإيسترداي وآخرون (1969) على المستضد - فيروسات هجينة عن طريق إعادة التركيب الجيني في المختبر بين فيروسات الأنفلونزا البشرية وسلالات فيروسات أنفلونزا الحيوانات وأنفلونزا الطيور. وفي الآونة الأخيرة، قام ويبستر وآخرون (1971، 1973) بمحاكاة ظهور سلالة وبائية جديدة من فيروس الأنفلونزا في تجارب على الجسم الحي (ستكون هذه هو موضح أدناه).

سابعا. أدلة إضافية،

تأكيد دور العملية

إعادة التركيب في أصل جديد

فيروسات الإنفلونزا الوبائية

لا تدعم البيانات البيوكيميائية المقدمة النظرية القائلة بأن مستضد HA لفيروس هونج كونج كان بسبب طفرة واحدة من سلالات آسيوية سابقة. ولذلك، يمكن للمرء أن يتساءل عما إذا كان هناك أي دليل تم الحصول عليه من الدراسات المخبرية في المختبر أو في الجسم الحي أو بشكل خاص من المراقبة

في الظروف الطبيعية، وهو ما من شأنه أن يدعم النظرية التي تشير إلى أن الفيروسات الجديدة تنشأ من خلال إعادة التركيب.

أ. البيانات التي تم الحصول عليها من الدراسات المختبرية

تم عزل الهجينة المستضدية (المأشوبة) للعديد من فيروسات الأنفلونزا A من الثدييات والطيور بعد الإصابة المختلطة لأجنة الدجاج أو مزارع الخلايا مع فيروسات الأنفلونزا A المختلفة (Tumova، Pereira، 1965؛ Kilbourne، Schulman، 1965؛ Kilbourne et al.، 1967؛ كيلبورن، 1968؛ عيد الفصح وآخرون، 1969). تم تلخيص هذه الدراسات في المراجعات التي أجراها كيلبورن وآخرون. (1967)، وبستر ولافير (1971). أصبح من الواضح الآن أن فيروسات الأنفلونزا A المؤتلفة ذات المستضدات السطحية المختلطة (Webster, 1970b) أو إمكانات النمو (Kilbourne, Murphy, 1960; Kilbourne et al., 1971) أو غيرها من الخصائص البيولوجية (McCahon, Schild, 1971) يمكن تصنيعها طلب.

ومن ثم، يمكن إنشاء فيروسات أنفلونزا "جديدة" في المختبر، ولكن لم يتم الحصول على دليل إلا مؤخرًا على أن إعادة التركيب واختيار الفيروسات "الجديدة" يمكن أن تحدث أيضًا في الجسم الحي في ظل الظروف الطبيعية (Webster et al., 1971).

ب. البيانات التي تم الحصول عليها من الدراسة في نظام الجسم الحي

1. مظاهرة إعادة التركيب في النظام

وأشار كيلبورن (1970) إلى أن إعادة التركيب بين سلالتين مختلفتين من فيروسات الأنفلونزا A لم يتم إثباتها بعد في الحيوانات السليمة، حتى في ظل الظروف التجريبية. من أجل معرفة ما إذا كان يمكن إعادة التركيب أن يحدث في الجسم الحي، تم استخدام نظامين، في الأول، تضاعف فيروس واحد فقط من الفيروسات الأبوية في الحيوان المضيف، وفي الثاني، تضاعف كلا الفيروسين الأبويين، وتم حقن الحيوانات بجرعات كبيرة من الفيروسات الأبوية وفي اليوم الثالث عندما تضاعف فيروس واحد على الأقل، تم قتل الحيوانات، وتم فحص معلقات الرئة مباشرة في أغشية السقاء بحثًا عن وجود فيروسات مؤتلفة (مستضد-هجين)، وتم قمع الفيروسات الأبوية باستخدام أمصال مضادة محددة (ويبستر، 1970ب).

في النظام الأول، تم حقن الخنازير بخليط من فيروس أنفلونزا الخنازير - HH"C (A/pig/Wisconsin/1/67) وفيروس حمى الطيور من النوع A - HPV (الدنمارك/27) (43). وهذا الأخير يفعل ذلك عدم إطلاق الفيروس المعدي بعد إعطائه للخنازير

في النظام الثاني، حيث تضاعف كلا الفيروسين، أصيبت الديوك الرومية بفيروس VChV وفيروس أنفلونزا الديك الرومي - VGI (A/I "ndyuk/Massachusetts/3740/65). كما (أشير إلى ذلك، في نظام الغشاء السقاء هجينة مستضدية مع تم عزل VGI (G) -VChP (N) (Hav6Neql) وVChP (N) -VGI(1Ch) (Havl-N2).

هناك نوعان من الاعتراضات المحتملة على فكرة أن إعادة التركيب الموصوفة تحدث في الجسم الحي. أولاً، قد تحدث إعادة التركيب في نظام زراعة الخلايا المستخدم لاختيار الفيروس؛ ثانيًا، من غير المعروف ما إذا كانت هذه المستضدات الهجينة مستقرة وراثيًا ولم تكن مجرد جزيئات مختلطة ظاهريًا.

يمكن تجاهل الاعتراض الأول، حيث إن اختيار الفيروسات الهجينة المستضدية تم إجراؤه مباشرة بتركيزات عالية جدًا من الأجسام المضادة، والتي ينبغي أن تحيد الفيروسات الأصلية. للحصول على أدلة أكثر صرامة على أن الفيروسات الهجينة المضادة لـ (HHH) لا تنشأ عن طريق العزلة من خارج مضيف مصاب، كان من الضروري الحصول على لويحات فيروسية مختلطة من معلق الجص، لعزل اللويحات الفردية، وتوصيف عينات الفيروس التي تم الحصول عليها من لويحات فردية: 25% من اللويحات المعزولة من تعليق رئتي الديوك الرومية الممزوجة بفيروس الورم الحليمي البشري + فيروس نقص المناعة البشرية كانت فيروسات مؤتلفة. ولم يتم عزل الفيروسات الهجينة من ثقافات المراقبة المصابة بمزيج اصطناعي من كلا الفيروسين الأبويين.

تم إثبات الاستقرار الجيني للفيروسات المؤتلفة من خلال "إدخال فيروسات هجينة المستضدات المستنسخة إلى الحيوانات المضيفة (ويبستر وآخرون، 1971). على سبيل المثال، مات الدجاج المصاب بفيروس هجين المستضد الذي يحمل فيروس الورم الحليمي البشري (H)-CVI(N)، (HavliN2)، نتيجة عدوى عابرة، وكان الفيروس، الذي تم عزله مرة أخرى من رئتي هذه الطيور بعد 3 أيام، عبارة عن عدوى عابرة. مزرعة نقية للفيروس، تمتلك B4n(H)-(Havl-N2). كما تم أيضًا عزل فيروسات مستضدات تيبريد أخرى حديثًا من الحيوانات وتبين أنها مستقرة وراثيًا.

2. انتقال الفيروس وانتخابه بشكل طبيعي

أظهرت الدراسات الموصوفة أن سلالتين مختلفتين من فيروس الأنفلونزا A يمكن أن تتحدا مرة أخرى في الجسم الحي إذا تم حقنهما في نفس الحيوان في وقت واحد.

ومع ذلك، فإن إعطاء جرعات كبيرة من فيروسين مختلفين من فيروسات الأنفلونزا A للحيوانات في وقت واحد هو نظام اصطناعي ربما لا يوجد في الطبيعة. للتحقيق في إمكانية حدوث إعادة التركيب في ظل ظروف أكثر طبيعية، تم السماح لفيروسين مختلفين من فيروسات الأنفلونزا A بالانتشار في وقت واحد في قطيع من الطيور المعرضة للإصابة على النحو التالي: اثنان من الديوك الرومية مصابان بفيروس نقص المناعة البشرية (A/i-ndkj/Vieconsin/66 (Hav6N2])، تم وضعها في قطيع مكون من 30 ديك رومي محمي حساس، وبعد يومين تم إدخال ديكين روميين آخرين مصابين بفيروس الورم الحليمي البشري إلى نفس القطيع، وتم ذبح اثنين من الديوك الرومية من القطيع يومياً وفحص عينات الرئة للتأكد من وجود كل من الوالدين والطفل. فيروسات هجينة المستضدات في أغشية السقاء، ومن خلال عزل البلاك وتحديد هوية الفيروس (ويبستر وآخرون، 1971). انتشر فيروس IPV بسرعة بين الطيور المحمية وتم اكتشافه بعد 3 أيام من إدخاله، ولم يتم اكتشاف فيروس AIV إلا بعد 9 أيام من إدخاله إلى الطيور. قطيع من الطيور المصابة (ويبستر وآخرون . تم إجراء تجارب من هذا النوع ثلاث مرات، وفي كل تجربة، تم عزل الهجين المستضدي في اليوم 9-10؛ تمتلك هذه الهجينة VChP (N) -VGI (N)، ولكن لم يتم عزل أي هجينة عكسية. ربما كان للفيروس المؤتلف المعزول ميزة نمو على الفيروسات الأصلية؛ وفي كل تجربة، تم عزل هذا الفيروس باعتباره سائدًا من طائر واحد أو أكثر. ولكي تظهر سلالة "جديدة" من فيروس الأنفلونزا في الطبيعة من خلال هذا النوع من إعادة التركيب وتصبح سلالة وبائية، يجب أن يتمتع الفيروس "الجديد" ببعض المزايا الانتقائية. قد تكون هذه الميزة الانتقائية هي امتلاك مستضدات لا يكون السكان محصنين ضدها بشكل عام، ولكن يجب أن يتمتع الفيروس أيضًا بالقدرة على الانتقال إلى مضيفين عرضة للإصابة. تمت دراسة كلا الاحتمالين في التجارب المقدمة. على سبيل المثال، في الوقت الذي كان فيه الفيروس المؤتلف موجودًا بالفعل، تم إدخال طيور طبيعية إلى القطيع، لكن الطيور المؤتلفة فشلت في أن تصبح السلالة السائدة، وماتت جميع الطيور الطبيعية الملامسة بسبب العدوى الناجمة عن فيروس الورم الحليمي البشري الأبوي.

3. اختيار ونقل فيروس الأنفلونزا "الجديد" في نظام داخل الجسم الحي

إذا افترضنا أن سلالات جديدة من فيروسات الأنفلونزا A قد تنشأ بشكل طبيعي من خلال إعادة التركيب، فمن المهم أن نبين كيف يمكن انتقاء هذه الفيروسات لتصبح سلالات وبائية سائدة أو جديدة. وقد تكون آلية الاختيار المحتملة هي أن تتم إعادة التركيب والانتقاء<в иммунных животных. Опыты Webster и Campbell (1974) показали, что рекомбинация и селекция «нового» штамма -вируса гриппа может происходить у индеек с низкими уровнями антител к НА одного родительского вируса и к NA другого родительского вируса (45).

تعرض الأتراك الذين لديهم مستويات منخفضة من الأجسام المضادة لـ NA CIV (A/indkj/Wisconsin/bb) وNA CIV لعدوى مختلطة مع CIV وCIV. بعد يوم أو يومين من الإصابة المختلطة، كان كل من فيروسات الوالدين وفيروس الأنفلونزا المؤتلف الذي يحمل فيروس الورم الحليمي البشري (H) -HIV (N) موجودين في القصبة الهوائية للديك الرومي. في اليوم السادس بعد الإصابة المختلطة، لم يكن هناك سوى فيروس B4n(H)iBrH(N) المؤتلف. في اليوم السابع "بعد عدوى مختلطة، ماتت الديوك الرومية، وتم عزل فيروسات الأنفلونزا المؤتلفة فقط مع فيروس الورم الحليمي البشري (H)-HIV (N). تم عزل جميع الفيروسات بتخفيفات شديدة من أغشية السقاء أو من الأجنة، ولم يتم عزل أي أجسام مضادة تستخدم لاختيار الفيروسات المؤتلفة. جميع الطيور غير المحصنة التي تم إدخالها إلى القطيع في اليوم الخامس ماتت بسبب عدوى عابرة ومن "تم عزلها فقط (فيروسات الأنفلونزا المؤتلفة).

بعد العدوى المختلطة للديوك الرومية غير المناعية أو مفرطة المناعة، لم يكن هناك عزل لفيروس الأنفلونزا المؤتلف. وبالتالي، فإن العدوى المختلطة للطيور التي لديها مستويات منخفضة من الأجسام المضادة للـ NA الخاص بأحد الفيروسات والـ NA لفيروس آخر توفر الظروف المثالية لانتقاء المواد المؤتلفة. بعد الإصابة، يتكاثر الفيروسان الأصليان إلى حد محدود، وبالتالي يحفزان الجهاز المناعي نفسه، الذي يقضي على الفيروسات الأم. بهذه الطريقة، يمكن اختيار المؤتلفات، وشريطة أن تكون لديها خصائص الفوعة اللازمة والقدرة على الانتقال إلى أفراد آخرين، يمكن لهذه المؤتلفات أن تسبب مرضًا وبائيًا.

تظهر هذه التجارب أنه في ظل الظروف الطبيعية نسبيًا، تحدث إعادة التركيب بين فيروسات الأنفلونزا A المختلفة، وأن الفيروسات الجديدة قد يكون لها ميزة انتقائية على كلتا السلالتين الأبويتين. ولا تثبت هذه التجارب أن جميع فيروسات الأنفلونزا الجديدة للثدييات الدنيا والطيور والبشر تنشأ بهذه الآلية، لكنها تثبت أن هذه الآلية هي إحدى الطرق "التي تظهر من خلالها فيروسات جديدة".

ب. بيانات عن إعادة تركيب فيروسات الأنفلونزا في الطبيعة

لا تترك التجارب المذكورة أعلاه أي مجال للشك في أنه يمكن "الحصول على سلالات جديدة من فيروس الأنفلونزا في المختبر وفي الجسم الحي، وتشير إلى أن عمليات مماثلة قد تحدث أيضًا في الطبيعة. ولكن هل هناك أي دليل على أن إعادة التركيب تحدث في الطبيعة؟ هذا الدليل هو غير مباشرة وتشمل: 1) المراسلات المستضدية بين فيروسات الأنفلونزا المعزولة من البشر ومن الثدييات والطيور الدنيا؛ 2) عدم وجود نطاق مضيف صارم لفيروسات الأنفلونزا.

1. العلاقات المستضدية بين فيروسات الأنفلونزا لدى البشر والثدييات السفلية والطيور

إن الأدلة التي تشير إلى إمكانية إعادة التركيب بين فيروسات الأنفلونزا البشرية والحيوانية في الطبيعة تأتي من اكتشاف أن بعض فيروسات الأنفلونزا من البشر والثدييات الدنيا والطيور لها مستضدات سطحية متشابهة، إن لم تكن متطابقة.

أ) العلاقات المستضدية بسبب NA. إن NA لبعض فيروسات أنفلونزا الطيور يشبه إلى حد كبير NA في فيروسات الأنفلونزا البشرية المبكرة. على سبيل المثال، يحتوي فيروس البط (A/uzha/Germany/1868/68) على NA مماثل للفيروسات البشرية HOS وH1N1 (شيلد ونيومان، 1969). تحمل فيروسات الأنفلونزا المعزولة من الخنازير أيضًا مستضد NA، المرتبط بمستضد NA الخاص بالفيروسات البشرية

H0N1 (ماير-إيويرت وآخرون، 1970).وبالمثل، فإن فيروس نقص المناعة البشرية (A/indkj/MA/65) له NA مماثل، إن لم يكن مطابقًا، لفيروسات الأنفلونزا البشرية H2N2 (بيريرا وآخرون، 1967؛ ويبستر وبيريرا، 1968؛ شيلد ونيومان، 1969).تحتوي فيروسات أنفلونزا الطيور الأخرى على مستضدات NA، ■ ترتبط ارتباطًا وثيقًا بـ NA الخاص بفيروسات أنفلونزا الخيول من النوع 1 و 2 (ويبستر وبيريرا، 1968؛ منظمة الصحة العالمية، 1971).وبالتالي، فإن NA لـ VChP (A/ VChP/ Holland/27) يشبه NA لفيروس أنفلونزا الخيول من النوع 1 (A/ losha, d/ براغ/1/57). وتُستخدم هذه العلاقات بين الأنواع في التسميات المنقحة لفيروسات الأنفلونزا (منظمة الصحة العالمية، 1971). هناك ثمانية أنواع فرعية مختلفة من فيروسات أنفلونزا الطيور وأربعة منها تحتوي على مستضدات NA المرتبطة بمستضدات NA الخاصة بفيروسات الأنفلونزا البشرية والخيول.

ب) التطابقات المستضدية التي يسببها المستضد HA. تم العثور على أمثلة مماثلة أقل مع فيروسات الأنفلونزا المعزولة من الثدييات والطيور الدنيا، والتي قد تحتوي على مستضدات HA مرتبطة بمستضدات HA للفيروسات البشرية. تمت مناقشة المراسلات بين السلطات الصحية في هونج كونج وفيروسات البط/أوكرانيا/63 وفيروسات الخيول/النوع 2 أعلاه. ومؤخرًا، تبين أن فيروسًا معزولًا من البط في ألمانيا (A/ut-ka/Germany/1225/74 ) لديه HA مشابه لفيروسات HA من عائلة الأنفلونزا الآسيوية. وبالتالي، مع عزل المزيد من الفيروسات، يزداد عدد التطابقات المكتشفة.

2. دائرة المضيفين

لا يتم دائمًا تعريف فيروسات الأنفلونزا A بشكل صارم

خصوصية عالية للمضيف (انظر عيد الفصح، توموفا، 1971؛

ويبستر، 1972). على سبيل المثال، كان فيروس أنفلونزا هونغ كونغ

معزولة عن الخنازير والكلاب والقطط والبابون والجيبون. فيروس

كما تم مؤخرًا عزل فيروسات الأنفلونزا A/Hong Kong (H3N2).

من الدجاج والعجول (ززمر، 1973). هذه الفيروسات تجريبية

ولكن تم نقلها إلى العجول والدجاج. في جميع الحالات

يتكرر الفيروس في المضيف الذي تم عزله منه

الكتان. وهكذا، تسبب فيروس أنفلونزا العجل في حدوث عدوى في الجهاز التنفسي

في العجول، وفيروس أنفلونزا الدجاج يتكاثر، لكن لا

ظهرت علامات المرض في الدجاج (Schild، Campbell، Web

لا يمكن لفيروس أنفلونزا هونج كونج أن يتكاثر في الدجاج.

وفي حالة فيروس أنفلونزا هونج كونج، فمن الواضح أن هذا الفيروس

وقد تكيفت لتسبب العدوى الطبيعية

من المالكين الآخرين، وبالتالي تم تهيئة الظروف

عندما تكون العدوى مزدوجة ووراثية

التفاعلات

د. ملخص البيانات الداعمة لنقطة ما

آراء حول ظهور سلالات جديدة

فيروس الانفلونزا عن طريق إعادة التركيب

1. تنجم أوبئة الأنفلونزا عند البشر عن الفيروسات فقط

مي الأنفلونزا من النوع A، وكانت فيروسات الأنفلونزا من هذا النوع فقط

معزولة عن الثدييات والطيور السفلية. فيروسات الانفلونزا

يتحد النوع B باستمرار في المختبر، لكن في الطبيعة يمكن ذلك

قد لا يحدث مثل هذا المزيج من المعلومات الجينية

ماشن [الذي من شأنه أن يسمح بظهور جائحة

سلالة فيروس الأنفلونزا من النوع B. إعادة التركيب بين الفيروسات

ولم يتم عرض أنواع الأنفلونزا A وB.

2. البيانات البيوكيميائية التي تم عرضها سابقاً كالتالي:

تشير إلى احتمال حدوثه غير محتمل

سلالات وبائية "جديدة" من فيروس الأنفلونزا

يعني طفرة من فيروسات الأنفلونزا السابقة

شخص.

3. فيروسات الأنفلونزا الجديدة التي يمكن أن تسبب وباءً

قد تنشأ من خلال إعادة التركيب والاختيار في ظل الظروف

في تجربة الجسم الحي.

4. بناءً على المراسلات المستضدية والكيميائية الحيوية

السابع بين التلصيق الدموي والنورامينيداز

تيجينات فيروسات الأنفلونزا البشرية، الثدييات السفلى

وتشير الطيور إلى وجود تبادلات جينية

وفي الطبيعة.

الأدلة المقدمة ظرفية. ويمكن الحصول على المزيد من الأدلة المباشرة إذا تبين أن سلالات الجائحة المستقبلية تحتوي على مستضدات مماثلة لتلك التي تم عزلها بالفعل من فيروسات الأنفلونزا المنزلية أو الحيوانية البرية (انظر أيضًا الفصل 15).

ثامنا. تغييرات المستضد المستقبلية

فيروسات الانفلونزا والفرص

توقعات التقلب

ومكافحة الأمراض

أ. التفسيرات المحتملة للطبيعة الدورية للوباء

بناءً على دراسة الأجسام المضادة في أمصال كبار السن، يمكن الافتراض أن فيروس أنفلونزا مشابه لفيروس تريب هونج كونج كان موجودًا بين الناس في أوقات سابقة وربما كان سبب وباء الأنفلونزا في أواخر القرن التاسع عشر ( انظر القسم الثاني). كبار السن - تم اكتشاف الأجسام المضادة لـ NA من فيروسات أنفلونزا الخيول من النوع 2 وآسيا أيضًا بعيارات منخفضة. الأجسام المضادة لـ NA من فيروسات الأنفلونزا. لم يتم اكتشاف هونج كونج أو آسيا في نفس ayatis-vortok، بينما لم يتم اكتشاف الأجسام المضادة لـ NA من فيروسات الأنفلونزا. NA من فيروس أنفلونزا الخيول

تم تحديد النوع 2. يشير هذا إلى أن الفيروسات التي تحتوي على وحدات فرعية متشابهة من HA ولكن وحدات فرعية مختلفة من NA هي المسؤولة عن الأوبئة السابقة والحالية. وقد أدت البيانات الوبائية إلى الاعتقاد بأن فيروسات الأنفلونزا البشرية الوبائية تظهر بشكل دوري. ونقص البيانات حول تماثل NA يجعل من غير المرجح أن نفس فيروسات الأنفلونزا البشرية تظهر بشكل دوري. ظهر فيروس أنفلونزا كونغ في نهاية القرن التاسع عشر ومرة ​​أخرى في عام 1968. ويبدو من الأرجح أن فيروس الأنفلونزا الذي كان موجودًا في نهاية القرن التاسع عشر كان يحتوي على وحدة فرعية من HA أظهرت بعض التشابه المستضدي مع فيروس أنفلونزا هونج كونج، ولكن يحمل مستضد NA مختلف تمامًا. بناءً على البيانات المصلية، يرتبط هذا NA مستضديًا بأنفلونزا الخيول NA النوع 2. قد تحدث دورة جديدة من فيروسات الأنفلونزا نتيجة لظهور فيروسات من بعض الخزانات الحيوانية، بمشاركة أو بدون مشاركة من إعادة التركيب، عندما لم تعد مناعة القطيع «تحمي السكان البشريين منها.

ومن الظواهر الأخرى المرتبطة بظهور سلالات الأنفلونزا الجديدة الاختفاء الواضح للسلالات السابقة. يمكن أن يكون ذلك ببساطة بسبب عدم الاهتمام بجمع عينات من فيروسات الأنفلونزا التي لم تعد تشكل خطرا على غالبية المجتمع (فينر، 1968)، ولكن هذا التفسير غير مرجح، حيث أثبتت التجربة أن فيروسات الأنفلونزا البشرية لا تتعايش في البشر. الطبيعة لأي فترة طويلة من الزمن. يمكن تفسير اختفاء السلالات التي ظهرت نتيجة الانجراف المستضدي بالاستئصال الذاتي؛ مصليا فيروس جديديزيد من مستوى الأجسام المضادة القديمة، وبالتالي يمنع انتشار الفيروس القديم. إن اختفاء السلالات الأقدم (Fazekas de St. Groth، 1970) من كل نوع فرعي بعد تحول مستضدي كبير هو أقل وضوحا وليس له تفسير مرض بعد.

ب. إمكانيات التحكم في التغيرات المستضدية في فيروس الأنفلونزا في المستقبل

لا توفر البيانات البيولوجية والكيميائية الحيوية والمناعية الواردة أعلاه سوى دليل غير مباشر على حدوث تحولات مستضدية كبيرة في فيروسات الأنفلونزا البشرية من خلال إعادة التركيب. سيتم الحصول على بيانات أكثر تحديداً إذا أمكن الكشف عن إعادة التصنيف بين فيروسات الأنفلونزا المختلفة في الطبيعة لإنتاج سلالة وبائية جديدة. وندرة مثل هذا الحدث تستبعد هذا الاحتمال بشكل فعال. وهناك نهج بديل لهذه المشكلة يتمثل في عزل فيروسات الأنفلونزا من المجموعات الحيوانية. قبل ظهور السلالة الوبائية التالية للبشر، أي.

إنشاء "بنك" لفيروسات الأنفلونزا. وبعد ظهور السلالة التالية التي تسبب وباءً بين الناس، يمكن مقارنة هذا الفيروس بالفيروسات الموجودة في «الدراجة»، وسيكون من الممكن الحصول على بيانات حول حدوثه. لقد تم تجاهل مجموعات الحياة البرية كمصادر لفيروسات الأنفلونزا الجديدة إلى حد كبير. تعيش مجموعات الطيور في جميع أنحاء العالم في مستعمرات عالية الكثافة لفترات أطول من الثدييات أو البشر. ومن المثير للاهتمام أنه تم بالفعل تحديد ثمانية أنواع فرعية مختلفة من فيروسات أنفلونزا الطيور، ستة منها - من الطيور الداجنة، ولذلك فمن المنطقي البدء بالبحث عن فيروسات الأنفلونزا في الطبيعة في مستعمرات الطيور الكبيرة، خاصة في نهاية موسم التعشيش، ومثل هذه الدراسات البيئية ستساعد في تحديد عدد الأنواع الفرعية المختلفة لفيروس الأنفلونزا الموجودة في الطبيعة و قد يكشف في نهاية المطاف كيفية ظهور سلالات جديدة. إذا لم يكن هناك سوى عدد محدود من فيروسات الأنفلونزا A، فإنه سيكون من الممكن في المستقبل التفكير في السيطرة على هذه الفيروسات، التي تمثل كارثة كبيرة على البشر.

الأدب

آدا G. L.، ليند P. E.، لافر W. G. J. gen. ميكروبيول.، 1963، ق. 32، ص. 225.

أندروز إس إن كاليفورنيا. ميد، 1956، ق. 84، ص. 375.

أندروز س ح.ن.إنجل. جيه ميد، 1957، ص. 242، ص. 197.

أندروز س.ن . في: وجهات نظر في علم الفيروسات (M. Pollard، ed.)؛نيويورك،

وايلي، 1959، ص. 184-196.

أرتشيتي آي. ، Horsfall F. L. J. exp. ميد، 1950، ق. 92، ص. 441. Becht H., Hammerling U., Rott R. علم الفيروسات، 1971، ضد. 46، ص. 337. العلامة التجاريةإس إم، سكيهيل جي جي نيتشر (لندن ). نيو بيول.، 1972، ق. 238، ص. 145. بوشر دي جي، كيلبورن إي دي جي فيرول، 1972، ضد. 10، ص. 60. بيرنت إف إم "مبادئ علم الفيروسات الحيوانية"، الطبعة الأولى.نيويورك ، 1955، ص. 380. بيرنت إف إم، كلارك إي. الأنفلونزا،ملبورن ، مؤسسة والتر وإليزا هول، 1942.

بيرنت إف إم، ليند بي إي أوست. ج. العلوم.، 1949، ضد. 22، ص. 109.

بيرنت إف إم، ليند بي إي جي جين. ميكروبيول.، 1951، ق. 5، ص. 67.

Burnet F. M.، White D. O. التاريخ الطبيعي للأمراض المعدية، الطبعة الرابعة.لندن - نيويورك، جامعة كامبريدج. الصحافة، 1972، ص. 202-212.

شاكرافيرتي بي بول. منظمة WLD Hlth، 1972أ، ضد. 45، ص. 755.

شاكرافيرتي بي بول. منظمة WLD Hlth، 1972ب، ضد. 46، ص. 473.

تشو سم. J. Hyg.، Epidemiol.، Microbiol.، Immunol.، 1958، v. 2، ص. 1.

كولمان إم.تي .، Dowdle W. R.، Pereira H. G.، Schitd G. C، Chang W. K- Lancet، 1968، v. 2، ص. 1384.

Compans R. W.، Klenk H. D.، Caliguiri L. A.، Chopin P. W. علم الفيروسات، 1970

الأنفلونزا A/H1N1 كعدوى ناشئة نموذجية: الخصائص العامة لفيروسات الأنفلونزا، والتباين، وظهور سلالات وبائية جديدة

تنتمي فيروسات الأنفلونزا - فيروسات الحمض النووي الريبوزي - إلى العائلة. Orthomyxoviridae وتنقسم إلى فيروسات A و B و C (الجدول 1).

الجدول 1.

الخصائص المقارنة لفيروسات الأنفلونزا

معايير	نوع أ	النوع ب	النوع ج
شدة المرض	++++	++	+
خزان طبيعي	يأكل	لا	لا
الأوبئة البشرية	المكالمات	لا يتصل	لا يتصل
الأوبئة البشرية	المكالمات	المكالمات	لا يسبب (فقط أمراض متفرقة)
التغيرات المستضدية	التحول، الانجراف	الانجراف	الانجراف
الجينوم المجزأ	نعم	نعم	نعم
حساسية للريمانتادين	حساس	غير حساس	غير حساس
حساسية للزاناميفير	حساس	حساس	-
البروتينات السكرية السطحية	2 (ها، غير متوفر)	2 (ها، غير متوفر)	1 (ها)

فيروس الأنفلونزا له شكل كروي وحجمه 80-120 نانومتر. النواة عبارة عن شريط سلبي مفرد من الحمض النووي الريبي (RNA)، يتكون من 8 أجزاء تشفر 11 بروتينًا فيروسيًا.

تنتشر فيروسات الأنفلونزا A على نطاق واسع في الطبيعة وتصيب البشر ومجموعة واسعة من الثدييات والطيور. تم عزل فيروسات الأنفلونزا من النوعين B وC من البشر فقط.

هناك نوعان فرعيان من فيروس الأنفلونزا A ذو أهمية وبائية - H3N2 وH1N1 وفيروس الأنفلونزا من النوع B (A.A. Sominova et al., 1997; O.M. Litvinova et al., 2001). وكانت نتيجة هذا الانتشار المشترك هي تطور أوبئة الأنفلونزا لأسباب مختلفة في بلدان مختلفة خلال نفس الموسم الوبائي. يزداد أيضًا عدم تجانس مجموعات الفيروسات الوبائية بسبب الطبيعة المتباينة لتنوع فيروسات الأنفلونزا، مما يؤدي إلى التداول المتزامن للفيروسات التي تنتمي إلى فروع تطورية مختلفة (O.M. Litvinova et al.، 2001). في ظل هذه الظروف، يتم إنشاء المتطلبات الأساسية لإصابة البشر في وقت واحد بمسببات الأمراض المختلفة، مما يؤدي إلى تكوين مجموعات سكانية مختلطة وإعادة التوزيع بين الفيروسات ذات الأنواع الفرعية المنتشرة وبين السلالات الموجودة ضمن نفس النوع الفرعي (O.I. Kiselev et al., 2000). ).

يعتمد تصنيف أنواع فيروسات الأنفلونزا على الاختلافات المستضدية بين اثنين من البروتينات السكرية السطحية - الهيماجلوتينين (HA) والنورامينيداز (NA). وفقًا لهذا التصنيف، تنقسم فيروسات الأنفلونزا إلى 3 أنواع - فيروسات الأنفلونزا من النوع A والنوع B والنوع C. وهناك 16 نوعًا فرعيًا من HA و9 أنواع فرعية من NA.

أرز. 1. تصنيف فيروسات الأنفلونزا أ وأنواع الحيوانات والطيور – العائل الوسيط والأخير في سلسلة انتقال العدوى إلى الإنسان.
تم اكتشاف النوع الفرعي 16 (H16) من الراصة الدموية مؤخرًا
ملاحظة: تم اكتشاف ∗ NA 7 و NA 7-NA8 أيضًا في الخيول

في التين. يُظهر الشكل 1 الأنواع الفرعية لفيروسات الأنفلونزا A ومضيفيها الوسيطين ومستودعاتهم الطبيعية (الطيور المهاجرة). تشمل العوائل الرئيسية لفيروسات الأنفلونزا A تلك الأنواع المرتبطة بالأنفلونزا.

في البشر، تم تحديد ثلاثة أنواع فرعية فقط من فيروسات الأنفلونزا A حتى الآن: HA1، وHA2، وHA3. علاوة على ذلك، تحتوي الفيروسات على نوعين فقط من النورامينيداز - NA1 وNA2 (الشكل 1). وقد ثبت تداولها المستقر على مدى القرن الماضي، بدءًا من جائحة عام 1918 (R.G. Webster et al., 1978; K.G. Nicholson et al., 2003).

تتمتع فيروسات الأنفلونزا A (وبدرجة أقل B) بالقدرة على تغيير بنية HA وNA. يتميز فيروس الأنفلونزا A بنوعين من التباين:

• الطفرات النقطية في الجينوم الفيروسي مع تغير مماثل في HA وNA (الانجراف المستضدي)؛
• الاستبدال الكامل لواحد أو كليهما من البروتينات السكرية السطحية (NA وNA) للفيروس من خلال إعادة التركيب/إعادة التركيب (التحول المستضدي)، ونتيجة لذلك يظهر متغير جديد تمامًا من الفيروس يمكن أن يسبب أوبئة الأنفلونزا.

بالنسبة لفيروس الأنفلونزا B، يكون التباين المستضدي محدودًا فقط بالانجراف، لأنه ويبدو أنه لا يوجد به مستودع طبيعي بين الطيور والحيوانات. يتميز فيروس الأنفلونزا C باستقرار أكبر للبنية المستضدية ولا يرتبط به سوى حالات تفشي محلية وحالات متفرقة من المرض.

من بعض الاهتمام ظهور سلالات جديدة من فيروس الأنفلونزافي السكان البشريين والأوبئة المرتبطة بها (الشكل 2). في التين. يعرض الشكل 2 التحولات المستضدية الرئيسية المرتبطة بحالات الأوبئة الشاملة في القرن العشرين والتي سببتها فيروسات الأنفلونزا A:

• وفي عام 1918، كان سبب الوباء فيروس H1N1؛
• وفي عام 1957 - سلالة H2N2 A/Singapore/1/57؛
• وفي عام 1968 - سلالة H3N2 A/Hong Kong/1/68؛
• في عام 1977 - سلالة H1N1 A/USSR/1/77 (لم يعتبر العديد من العلماء هذا وباءً، ولكن مع ظهور هذه السلالة، نشأ موقف مع الدوران المشترك المتزامن لسلالتين من فيروس الأنفلونزا A - H3N2 و H1N1).

في عام 1986، في الصين، تسبب فيروس A/Taiwan/1/86 في انتشار وباء الأنفلونزا A/H1N1 على نطاق واسع، والذي استمر حتى عام 1989. بقيت المتغيرات الانجرافية لهذا الفيروس حتى عام 1995، مما تسبب في تفشي المرض محليًا وحالات متفرقة من المرض. ووفقا لنتائج الدراسات البيولوجية الجزيئية، فقد ظهرت طفرات متعددة في جينوم فيروس A/H1N1 خلال هذه السنوات. في عام 1996، ظهر نوعان مستضديان من فيروس الأنفلونزا A/H1N1: A/Bern وA/Beijing، ولم تكن سمتهما مستضدية فحسب، بل كانت أيضًا الانقسام الجغرافي. وهكذا، في روسيا، لعب فيروس الأنفلونزا A/Bern دورًا نشطًا في وباء الأنفلونزا في الفترة 1997-1998. وخلال نفس الموسم، تم تسجيل تداول سلالات فيروس أ/بكين في شرق البلاد. وفي وقت لاحق، في 2000-2001. أصبح فيروس الأنفلونزا A/H1N1 العامل المسبب لوباء الأنفلونزا في روسيا. تتميز فيروسات الأنفلونزا الحديثة A/H1N1 بنشاط مناعي منخفض؛ وتتفاعل عزلات الفيروسات المعزولة حديثًا فقط مع كريات الدم الحمراء في الثدييات (المجموعة البشرية 0 والخنازير الغينية).

أرز. 2. ظهور سلالات جديدة من فيروس الأنفلونزا بين البشر والأوبئة المرتبطة بها

لقد شهدت فيروسات الأنفلونزا A تغيرات جينية كبيرة خلال القرن الماضي، مما أدى إلى انتشار أوبئة عالمية مع ارتفاع معدلات الوفيات بين البشر. أكبر جائحة للأنفلونزا (H1N1) كان في 1918-1919. ("الاسباني"). لقد شهد الفيروس، الذي ظهر عام 1918، انحرافًا واضحًا؛ حيث تعتبر متغيراته الأولية (Hsw1N1) والنهائية (H1N1) بمثابة تحول. تسبب الفيروس في وباء مدمر أودى بحياة 20 مليون شخص (نصف القتلى كانوا من الشباب الذين تتراوح أعمارهم بين 20 إلى 50 عامًا (M.T. Osterholm, 2005).

بحث أجراه ج.ك. أظهر تانبينبرجر وآخرون (2005) أن الفيروس الذي تسبب في وباء عام 1918 لم يكن مزيجًا بين فيروس أنفلونزا الطيور وفيروس الأنفلونزا البشرية - فقد كانت جميع الجينات الثمانية لفيروس H1N1 أكثر تشابهًا مع متغيرات فيروس الطيور منها إلى تلك الجينية. الإنسان (الشكل .3). لذلك، وفقًا لـ ر.ب. Belshe (2005) فيروس أنفلونزا الطيور يجب أن يصيب البشر (يتجاوز المضيف الوسيط)، وينتقل من شخص لآخر.

أرز. 3. آليات نشوء فيروسات الأنفلونزا الجائحة

« الانفلونزا الآسيوية(1957-1958)، الناجم عن فيروس A/H2N2، الذي تم تسجيله لأول مرة في وسط الصين، لم يكن مأساويًا بالنسبة للبشرية، لكن معدل الوفيات الإجمالي في العالم كان يتراوح بين مليون إلى مليوني شخص. علاوة على ذلك، لوحظ أعلى معدل للوفيات بين المرضى الذين تزيد أعمارهم عن 65 عامًا. جوائح عامي 1957 و1968 كانت ناجمة عن فيروسات جديدة ظهرت نتيجة إعادة التصنيف. في عام 1957، أدت العدوى المزدوجة، ربما لشخص أو خنزير، بفيروس H2N2 الطيور وفيروس H1N1 البشري إلى ظهور فيروس جديد يحتوي على جينات HA وNA والجين الذي يشفر أحد بروتينات البوليميراز (PB1) - من فيروس "الطيور" و5 شرائح وراثية من فيروس الأنفلونزا البشرية H1N1 1918. انتشر هذا الفيروس بين البشر حتى عام 1968، عندما تم استبداله بفيروس H3N2 الجديد (هونج كونج).

« انفلونزا هونج كونجتم عزل الفيروس، الناجم عن فيروس A/H3N2 (1968-1969)، لأول مرة في هونغ كونغ. وظهر نتيجة استبدال جين H2 والبوليميريز (PB1) لفيروس H2N2 بجينين جديدين من فيروس أنفلونزا الطيور H3 وPB1. أما الجينات الستة المتبقية لهذا الفيروس فهي بشرية (أي من الفيروس السابق عام 1957) وهي اليوم من سلالة هذا الفيروس، بحسب الشكل 1. 3ـ يستمر انتشاره بين الناس. تأتي جينات فيروس A/H3N2 من الفيروس الذي تسبب في الجائحة في عام 1918 (R.B. Belshe, 2005) (الشكل 3). لم يكن لأنفلونزا هونج كونج معدل وفيات مرتفع كما هو الحال في الأوبئة السابقة، حيث أن التغيرات المستضدية حدثت فقط في NA (التحول المستضدي)، وبقي NA للفيروس دون تغيير. إن وجود الأجسام المضادة لـ NA لا يمنع تطور المرض، ولكنه يمكن أن يقلل من شدة العدوى (W.P. Glesen، 1996). من المحتمل أن يكون انخفاض معدل الوفيات بين كبار السن مرتبطًا بسلالة فيروس الأنفلونزا H3 التي انتشرت في جميع أنحاء العالم في هذا القرن، وبالتالي كان لدى الأشخاص الذين تزيد أعمارهم عن 60 عامًا أجسام مضادة وقائية لهذا الفيروس (L. Simonsen et al., 2004).

وبعد توقف دام 20 عاما، بدأ تداوله مرة أخرى نوع جديد من فيروس الأنفلونزا A/H1N1، والتي في 1977-1978 تسبب في حدوث وباء معتدل للغاية، وبعد ذلك بدأت 3 أنواع مختلفة من العامل الممرض بالانتشار في وقت واحد في العالم: فيروسات الأنفلونزا A من الأنواع الفرعية H1N1 وH3N2 والنوع B.

ومن المهم الإشارة إلى أن فيروسات أنفلونزا الطيور "تشارك" في ظهور فيروسات أنفلونزا "بشرية" جديدة تتميز بإمراضية عالية وقدرة على التسبب في جوائح (E.G. Deeva, 2008). كان لهذه الفيروسات (H1N1 وH2N2 وH3N2) مجموعة مختلفة من الجينات الداخلية، والتي يشير أصلها إلى علاقتها التطورية مع فيروسات الطيور والخنازير.

ما هي آليات نشأة السلالات الوبائية وما هي الخصائص البيولوجية اللازمة لظهور فيروس شديد الإمراض مع إمكانية حدوث جائحة؟

تتميز فيروسات الأنفلونزا A بارتفاع وتيرة حدوث إعادة التصنيف نتيجة للعدوى المختلطة، والتي ترجع إلى تجزئة الجينوم الفيروسي. تعتبر هيمنة إعادة التصنيف لتركيبة جينية معينة نتيجة الاختيار، حيث يتم اختيار المجموعة الأكثر تكيفًا مع التكاثر في ظل ظروف معينة من مجموعة واسعة من إعادة التصنيف المختلفة (N.L. Varich et al., 2009). يمكن أن يكون للخصائص الخاصة بالسلالة للقطاعات الجينومية تأثير قوي على التركيب الجيني للمجموعات في ظل ظروف غير انتقائية. وبعبارة أخرى، فإن السمة المميزة لفيروسات الأنفلونزا هي حدوث طفرات متكررة وغير متوقعة في ثمانية من أجزاء الجينات، وخاصة جين HA. تلعب إعادة التصنيف دورًا مهمًا في ظهور متغيرات فيروسية جديدة، خاصة في أصل السلالات الوبائية. وفي بعض الأحيان لا يمكن استبعاد احتمال ظهور فيروس ذو فوعة أعلى أثناء الجائحة.

لقد أظهرت الأبحاث الحديثة أن البنية الجينية لفيروس A/H1N1 الجديد معقدة، وكما أشرنا في المقدمة، فإن تركيبها يشمل جينات أنفلونزا الخنازير التي تصيب الخنازير في أمريكا الشمالية؛ جينات أنفلونزا الخنازير التي تصيب الخنازير في أوروبا وآسيا؛ جينات أنفلونزا الطيور؛ جينات الانفلونزا البشرية في الأساس، تأتي جينات الفيروس الجديد من أربعة مصادر مختلفة. تظهر صورة مجهرية لفيروس الأنفلونزا A/H1N1 في الشكل. 4.

أرز. 4. صورة مجهرية لفيروس الأنفلونزا A/H1N1

نشرت منظمة الصحة العالمية "مبادئ توجيهية لمختبرات الأنفلونزا" وقدمت بيانات جديدة عن تسلسل الجينات الفيروسية وطولها لفيروس الأنفلونزا الجديد A/H1N1 المعاد تجميعه (العزلة A/California/04/2009): HA، NA، M، PB1، PB2، را، NP، NS. وتشير هذه البيانات إلى تشكيل متغير وبائي جديد للفيروس، مما يخلق قابلية عالمية للإصابة بالعدوى بسبب نقص المناعة. لقد أصبح من الواضح أن المتغيرات الجائحة لفيروس الأنفلونزا تنشأ من خلال آليتين على الأقل:

• إعادة التصنيف بين فيروسات الأنفلونزا الحيوانية/الطيور والأنفلونزا البشرية؛
• التكيف المباشر لفيروس الحيوان/الطيور مع البشر.

لفهم أصل فيروسات الأنفلونزا الجائحة، من المهم دراسة خصائص المستودع الطبيعي للعدوى والمسارات التطورية لهذه العائلة من الفيروسات عند تغيير المضيف. من المعروف جيدًا بالفعل، ويمكن القول بأن الطيور المائية هي مستودع طبيعي لفيروسات الأنفلونزا A (التي تكيفت مع هذه العوائل الوسيطة لعدة قرون)، كما يتضح من نقل جميع أنواع HA الستة عشر الفرعية لهذا الفيروس. ومن خلال براز الطيور، الذي يمكنه البقاء في الماء لأكثر من 400 يوم (إنفلونزا الطيور...، 2005)، يمكن أن تنتقل الفيروسات إلى أنواع حيوانية أخرى عند شرب الماء من الخزان. (كي جي نيكلسون وآخرون، 2003). تم تأكيد ذلك من خلال التحليل التطوري لتسلسل الحمض النووي لأنواع فرعية مختلفة من فيروسات الأنفلونزا A من مضيفين مختلفين ومن مناطق جغرافية مختلفة.

أظهر تحليل تسلسل جينات البروتين النووي أن فيروسات أنفلونزا الطيور تطورت مع ظهور 5 سلالات مضيفة محددة: فيروسات الخيول البرية والمنزلية، والنوارس، والخنازير، والبشر. علاوة على ذلك (!) تشكل فيروسات أنفلونزا البشر والخنازير ما يسمى بالمجموعة الشقيقة، مما يدل على علاقتها الوثيقة، وبطبيعة الحال، على أصل مشترك. يبدو أن سلف فيروسات الأنفلونزا البشرية وفيروس الخنازير الكلاسيكي كان من أصل الطيور. في بلدان آسيا الوسطى، ولأسباب معروفة، لا يحظى لحم الخنزير بشعبية كبيرة، وهذه الحيوانات غائبة عمليا عن تربية الماشية. وهذا يؤدي إلى حقيقة أنه (على عكس الصين، على سبيل المثال)، لا يوجد في هذه المنطقة المضيف الوسيط الرئيسي في الحيوانات الأليفة - الخنازير، وبالتالي فإن احتمال "ظهور" فيروسات وبائية في منطقة آسيا الوسطى أقل من احتمالية "ظهور" فيروسات وبائية في منطقة آسيا الوسطى. في الصين، والتي تتبع عمليا البيانات المتعلقة بتحليل أصلها (أنفلونزا الطيور، 2005). يوجد مصدر دائم لجينات فيروسات الأنفلونزا الجائحة (في حالة غير متغيرة ظاهريًا) في المستودع الطبيعي لفيروسات الطيور المائية والطيور المهاجرة (R.G. Welster, 1998). ويجب أن يؤخذ في الاعتبار أن أسلاف الفيروسات التي تسببت في وباء الأنفلونزا الإسبانية (1918)، وكذلك الفيروسات التي كانت مصدر جينوم السلالات الوبائية لآسيا/57 وهونج كونج/68، لا تزال تنتشر بين أعداد الطيور البرية مع تغيرات طفرية طفيفة (طيور الأنفلونزا..., 2005).

تعليقات

(مرئي فقط للمتخصصين الذين تم التحقق منهم من قبل فريق التحرير MEDI RU)

تمت الإشارة إلى أول ذكر للأنفلونزا منذ عدة قرون - في عام 412 قبل الميلاد

إعلان وقد وصف أبقراط وصف المرض الشبيه بالأنفلونزا. أيضًا

ولوحظت حالات تفشي شبيهة بالأنفلونزا في عام 1173. تم توثيقه لأول مرة

جائحة الانفلونزا الذي قتل الكثير

حياة ، حدث في عام 1580.

في 1889-1891، حدثت جائحة معتدلة، سببها فيروس من النوع H3N2.

حدثت "الأنفلونزا الإسبانية" سيئة السمعة الناجمة عن فيروس H1N1 في الفترة من 1918 إلى 1920.

هذا هو أسوأ جائحة معروف

أودى بحياة أكثر من 20 مليون شخص. من "الإنفلونزا الإسبانية"

تأثر 20-40٪ من سكان العالم بشكل خطير.كان الموت للغاية

سريع. يمكن لأي شخص أن يكون بصحة جيدة تماما في الصباح، ولكن بحلول الظهر سوف يمرض و

مات بحلول الليل. أولئك الذين لم يموتوا في الأيام الأولى غالبًا ما ماتوا بسبب المضاعفات،

الناجمة عن الأنفلونزا، مثل الالتهاب الرئوي. كانت السمة غير العادية لـ "الأنفلونزا الإسبانية".

أنه غالباً ما يصيب الشباب (عادةً الأنفلونزا في المقام الأول

الأطفال وكبار السن يعانون).

تم اكتشاف العامل المسبب للمرض، وهو فيروس الأنفلونزا، من قبل ريتشارد شوب في عام 1931.

تم التعرف على فيروس الأنفلونزا A لأول مرة من قبل علماء الفيروسات الإنجليز سميث،

أندروز وليدلاو (المعهد الوطني للأبحاث الطبية، لندن) في عام 1933

سنة. وبعد ثلاث سنوات، تمكن فرانسيس من عزل فيروس الأنفلونزا B.

في عام 1940، تم اكتشاف مهم - يمكن أن يكون فيروس الأنفلونزا

المزروعة على أجنة الدجاج. وبفضل هذا، جديد

فرص لدراسة فيروس الأنفلونزا.

تم عزل فيروس الأنفلونزا C لأول مرة بواسطة تايلور في عام 1947.

كان هناك جائحة في 1957-1958

والتي أُطلق عليها اسم "الإنفلونزا الآسيوية"، والتي يسببها فيروس H2N2. جائحة

بدأت في فبراير 1957 في الشرق الأقصى وبسرعة

تنتشر في جميع أنحاء العالم. وفي الولايات المتحدة وحدها، مات الناس خلال هذا الوباء.

أكثر من 70.000 شخص.

في الفترة 1968-1969، حدثت "أنفلونزا هونج كونج" الشديدة إلى حد ما، بسبب

فيروس H3N2. بدأ الوباء في هونغ كونغ في أوائل عام 1968. في أغلب الأحيان

ويصيب الفيروس كبار السن الذين تزيد أعمارهم عن 65 عاما. الرقم الإجمالي

وبلغ عدد القتلى من هذا الوباء 33800.

وفي الفترة 1977-1978، حدث جائحة خفيف نسبيا

تسمى بالأنفلونزا "الروسية". فيروس الأنفلونزا (H1N1) المسبب لهذا الوباء

لقد تسبب بالفعل في حدوث وباء في الخمسينيات.

ولذلك فإن المولودين بعد عام 1950 كانوا أول من عانى.

تنتمي مسببات أمراض الأنفلونزا إلى عائلة orthomyxovirus، والتي تشمل 3 أجناس من الفيروساتالأنفلونزا: A، B، C. تحتوي فيروسات الأنفلونزا على الحمض النووي الريبوزي (RNA)، وهو غلاف خارجي يوجد فيه مستضدان - الهيماجلوتينين والنورامينيداز، اللذان يمكن أن يغيرا خصائصهما، خاصة في فيروس النوع A. تؤدي التغييرات في الهيماجلوتينين والنورامينيداز إلى ظهور أنواع فرعية جديدة من الفيروس الذي عادة ما يسبب أمراضا أكثر خطورة وانتشارا.

وفقا للتسميات الدولية، فإن تسمية سلالات الفيروس تشمل المعلومات التالية: الجنس، مكان العزل، رقم العزلة، سنة العزل، نوع الهيماجلوتينين (H) والنورامينيداز (N). على سبيل المثال، يشير A/Singapore/l/57/H2N2 إلى جنس الفيروس A الذي تم عزله في عام 1957 في سنغافورة، والذي يحتوي على متغير مستضد H2N2.

ترتبط أوبئة الأنفلونزا بفيروسات النوع أ. لا تسبب فيروسات الأنفلونزا B أوبئة، ولكن "الموجات" المحلية من زيادة معدل الإصابة قد تؤثر على بلد واحد أو أكثر. تسبب فيروسات الأنفلونزا C حالات مرضية متفرقة. فيروسات الأنفلونزا مقاومة لدرجات الحرارة المنخفضة والتجمد، ولكنها تموت بسرعة عند تسخينها.

Orthomyxoviruses - فيروسات الأنفلونزا A، B، C

السمات الهيكلية.

فيروسات Orthomyxovirus هي فيروسات مغلفة (supercapsid، "مرتدية")، ويبلغ متوسط ​​​​حجم الفيروسات من 80 إلى 120 نانومتر. الفيروسات كروية الشكل. يتم تمثيل الجينوم بواسطة الحمض النووي الريبي السلبي (المجزأ) المفرد الذين تقطعت بهم السبل. يحتوي الفيريون على قفيصة فائقة تحتوي على اثنين من البروتينات السكرية البارزة فوق الغشاء على شكل نتوءات (مسامير) - الهيماجلوتينين (HA) والنورامينيداز (NA). تحتوي فيروسات الأنفلونزا A على 17 نوعًا مختلفًا من الناحية المستضدية من الراصة الدموية و10 أنواع من النورامينيداز.

تصنيف فيروسات الانفلونزا يعتمد على الاختلافات بين مستضدات البروتين النووي (التقسيم إلى فيروسات A وB وC) والبروتينات السطحية HA وNA. البروتين النووي (ويسمى أيضًا مستضد S) ثابت في بنيته ويحدد نوع الفيروس (A أو B أو C). على العكس من ذلك، فإن المستضدات السطحية (الهيماجلوتينين والنورامينيداز - المستضدات V) متغيرة وتحدد سلالات مختلفة من نفس نوع الفيروس. تتسبب التغيرات في الهيماجلوتينين والنورامينيداز في ظهور أنواع فرعية جديدة من الفيروس، والتي عادةً ما تسبب أمراضًا أكثر خطورة وأكثر انتشارًا

الوظائف الرئيسية للهيماجلوتينين:

يتعرف على المستقبل الخلوي - mucopeptide.

مسؤول عن اختراق الفيريون داخل الخلية، مما يضمن اندماج أغشية الفيريون والخلية؛ (يوفر الهيماجلوتينين قدرة الفيروس على الارتباط بالخلية.)

تتمتع مستضداتها بأكبر خصائص وقائية. تساهم التغيرات في خصائص المستضد (الانجراف المستضدي والتحول) في تطور الأوبئة التي تسببها الفيروسات الجديدة اي جي متغيرات الفيروس (التي لم يتم تطوير مناعة القطيع ضدها بشكل كافٍ).

النورامينيداز يستجيبلنشر الفيروسات، جنبا إلى جنب مع الهيماجلوتينين يحدد الخصائص الوبائية للفيروس.

النورامينيداز مسؤول، أولاً، عن قدرة الجسيم الفيروسي على اختراق الخلية المضيفة، وثانياً، عن قدرة الجسيمات الفيروسية على الخروج من الخلية بعد التكاثر.

تتكون القفيصة النووية من 8 شرائح vRNA وبروتينات القفيصة التي تشكل حبلا حلزونيًا.

دورة حياة الفيروس.

يتم تكاثر فيروسات orthomyxovirus في المقام الأول في السيتوبلازم في الخلية المصابة، ويحدث تخليق الحمض النووي الريبي الفيروسي في النواة. في النواة، يتم تصنيع ثلاثة أنواع من الحمض النووي الريبي (RNA) الخاص بالفيروس على vRNA: mRNAs ذات القالب الإيجابي (قالب لتخليق البروتينات الفيروسية)، وcRNA التكميلي كامل الطول (قالب لتخليق RNAs الفيريون السلبي الجديد) والفيريون السلبي. vRNAs (الجينوم للفيروسات المركبة حديثًا).

يتم تصنيع البروتينات الفيروسية على polyribosomes. بعد ذلك، ترتبط البروتينات الفيروسية الموجودة في النواة بالـ vRNA، لتشكل القفيصة النووية. يتم التحكم في المرحلة النهائية من التشكل بواسطة بروتين M. تتم تغطية القفيصة النووية، التي تمر عبر غشاء الخلية، أولاً ببروتين M، ثم بطبقة الدهون الخلوية والبروتينات السكرية فائقة القفيصة HA وNA. تستمر دورة التكاثر من 6 إلى 8 ساعات وتنتهي بتبرعم الفيروسات المركبة حديثًا.

التقلب المستضدي.

(التباين المستضدي لفيروسات الأنفلونزا. تباين فيروس الأنفلونزا معروف جيدًا. هذا التباين في الخصائص المستضدية والبيولوجية هو سمة أساسية لفيروسات الأنفلونزا من النوعين A و B. تحدث التغييرات في المستضدات السطحية للفيروس - الهيماجلوتينين والنورامينيداز. على الأرجح هذه آلية تطورية لتكيف الفيروس لضمان البقاء.سلالات الفيروس الجديدة، على عكس أسلافها، ليست مرتبطة بأجسام مضادة محددة تتراكم في السكان.هناك آليتان للتقلب المستضدي: تغييرات صغيرة نسبيا (الانحراف المستضدي) و تغييرات قوية (التحول المستضدي).

يرتبط التقسيم الحديث لفيروسات orthomyxoviruses إلى أجناس (أو الأنواع A وB وC) بالخصائص المستضدية لبروتينات القفيصة النووية الرئيسية (بروتين القفيصة النووية - البروتين الفوسفوري NP) ومصفوفة الغلاف الفيروسي (بروتين M). بالإضافة إلى الاختلافات في بروتينات NP وM، تتميز فيروسات orthomyxovirus بأعلى تباين مستضدي بسبب تباين البروتينات السطحية HA وNA. هناك نوعان رئيسيان من التغييرات - الانجراف المستضدي والتحول المستضدي.

الانجراف المستضدييحدث بسبب طفرات نقطية تغير بنية هذه البروتينات. المنظم الرئيسي للعملية الوبائية أثناء الأنفلونزا هو مناعة السكان (الجماعية). ونتيجة لتكوينها، يتم اختيار سلالات ذات بنية مستضدية متغيرة (الهيماجلوتينين في المقام الأول)، والتي تكون الأجسام المضادة أقل فعالية ضدها. يحافظ الانجراف المستضدي على استمرارية العملية الوبائية.

(الانجراف المستضدي - يحدث بين الأوبئة في جميع أنواع الفيروسات (A وB وC). وهي تغييرات طفيفة في بنية المستضدات السطحية (الهيماجلوتينين والنورامينيداز) ناجمة عن طفرات نقطية في الجينات التي تشفرها. عادة، مثل هذه التغييرات تحدث كل عام، ونتيجة لذلك تحدث الأوبئة، حيث تبقى الحماية من المخالطين السابقين للفيروس، رغم أنها غير كافية.)

ومع ذلك، تم اكتشاف شكل آخر من أشكال التباين المستضدي في فيروسات الأنفلونزا A - التحول المستضدي(التحول) المرتبط بالتغيير من نوع واحد من الراصة الدموية (أو النيورامينيداز) إلى نوع آخر، أي. على ظهور متغير مستضدي جديد للفيروس. ونادرا ما يتم ملاحظة ذلك ويرتبط بتطور الأوبئة. على مدار تاريخ الأنفلونزا المعروف بأكمله، تم تحديد عدد قليل فقط من الأنماط الظاهرية المستضدية التي تسبب أوبئة الأنفلونزا لدى البشر: HoN1، H1N1، H2N2، H3N2، أي. ثلاثة أنواع فقط من الراصة الدموية (HA1-3) واثنين من النورامينيداز (NA 1 و 2). تسبب فيروسات الأنفلونزا من النوع B وC المرض عند البشر فقط، بينما تسبب فيروسات الأنفلونزا A المرض عند البشر والثدييات والطيور. إن فيروسات الأنفلونزا A الأكثر تغيراً لها الدور الوبائي الأكبر. وتفتقر فيروسات الأنفلونزا C إلى النيورامينيداز؛ وعادة ما تسبب هذه الفيروسات صورة سريرية أكثر اعتدالاً.

هناك رأي مفاده أن التحول المستضدي هو نتيجة التبادل الجيني (إعادة التركيب) بين فيروسات الأنفلونزا البشرية والحيوانية. لم يتم بعد تحديد بشكل قاطع، خلال فترة ما بين الأوبئة - خارج التجمعات البشرية (في الطيور أو الثدييات) أو بين التجمعات البشرية (بسبب استمرارها على المدى الطويل، والتداول المحلي) - الفيروسات التي استنفدت مؤقتًا قدراتها الوبائية يتم الحفاظ عليها.

تعتبر الطيور المضيف الأساسي والرئيسي لفيروسات الأنفلونزا A، والتي، على عكس البشر، تشيع فيها الفيروسات التي تحتوي على جميع أنواع HA السبعة عشر وأنواع NA العشرة. البط البري هو العائل الطبيعي لفيروسات الأنفلونزا A، حيث يوجد العامل الممرض في الجهاز الهضمي ولا يسبب ضررًا ملحوظًا للعوائل. تظهر الفيروسات خصائصها المسببة للأمراض عندما تنتقل إلى الطيور والثدييات الأخرى. ومن بين الثدييات، تعلق الأهمية الكبرى على الخنازير، التي تعتبر مضيفا وسيطا وتشبه "وعاء الخلط".

(فيروسات الأنفلونزا البشرية الحديثة تنتقل بشكل ضعيف إلى الحيوانات. بدأت جميع أوبئة الأنفلونزا A منذ عام 1930 في الصين، والبوابة الرئيسية للانتشار هي سيبيريا (الهجرات الجماعية للطيور).

Н1N1- 1930 تم التعرف عليه عند البشر والخنازير والحيتان (1972) والطيور الداجنة والبرية. ويرتبط بها جائحة "الإنفلونزا الإسبانية" الشهير. وقد عاد هذا النوع إلى الانتشار مرة أخرى منذ عام 1977.

تم اكتشاف فيروس H2N2 منذ عام 1957. في البشر والطيور. وكانت الأوبئة المرتبطة بهذه الفيروسات تأتي بشكل دوري. الآن يتم تحديد كلا النوعين بالتوازي.

تم التعرف على فيروس H3N2 في عام 1963. (هونج كونج).

يحتوي الفيروس A/Singapore/1/57 (H2N2) على ثلاثة جينات من فيروسات أنفلونزا الطيور الأوراسية، ويحتوي الفيروس A/Hong Kong/1/68 (H3N2) على 6 جينات من فيروس “سنغافورة” واثنين من الطيور. وتؤكد هذه البيانات أن البشرية تستقبل أنواعا وبائية جديدة من فيروسات الأنفلونزا A من الطيور، المضيف الأساسي. التوقعات المباشرة هي إمكانية ظهور متغيرات وبائية جديدة لفيروس الأنفلونزا A التي تحتوي على الراصة الدموية HA5 أو 7 (يكفي استبدال واحد أو اثنين من الأحماض الأمينية في بنيتها).

تشمل عائلة فيروسات orthomyxoviruses (اليونانية orthos - صحيح، tukha - mucus) فيروسات الأنفلونزا من الأنواع A، B، C، والتي، مثل الفيروسات المخاطانية، لها صلة بالموسين. تصيب فيروسات الأنفلونزا A البشر وبعض أنواع الحيوانات (الخيول والخنازير وغيرها) والطيور. فيروسات الأنفلونزا من النوعين B وC مسببة للأمراض للبشر فقط. تم عزل أول فيروس أنفلونزا بشري من البشر في عام 1933 بواسطة دبليو. سميث، وسي. أندروز، وبي. لادو (سلالة WS) عن طريق إصابة القوارض البيضاء. في وقت لاحق، تم تصنيف هذا الفيروس على أنه النوع A. في عام 1940، اكتشف T. Francis وT. Megill فيروس الأنفلونزا من النوع B، وفي عام 1949، اكتشف R. Taylor فيروس الأنفلونزا من النوع C. عند تصنيف فيروسات الأنفلونزا، كان هناك دائمًا بعض الصعوبات المرتبطة بتقلبها المستضدي. تنقسم فيروسات الأنفلونزا إلى ثلاثة أنواع A وB وC. ويتضمن النوع A عدة أنواع فرعية تختلف عن بعضها البعض في مستضداتها - الهيماجلوتينين والنورامينيداز. وفقا لتصنيف منظمة الصحة العالمية (1980)، تنقسم فيروسات الأنفلونزا البشرية والحيوانية من النوع A إلى 13 نوعا فرعيا مستضديا على أساس الراصة الدموية (H1-H13) و 10 على أساس النورامينيداز (N1-N10). من بين هذه الفيروسات، تشتمل فيروسات الأنفلونزا البشرية من النوع A على ثلاثة هيماجلوتينين (HI وH2 وNZ) واثنين من النورامينيداز (N1 وN2).بالنسبة للفيروس من النوع A، يُشار إلى النوع الفرعي من الراصة الدموية والنورامينيداز بين قوسين. على سبيل المثال، فيروس الأنفلونزا A: خاباروفسك/90/77 (H1N1).

الهيكل والتركيب الكيميائي

فيروس الأنفلونزا له شكل كروي، يبلغ قطره 80-120 نانومتر. الأشكال الشبيهة بالخيط أقل شيوعًا. القفيصة النووية ذات التناظر الحلزوني عبارة عن حبلا من البروتين النووي الريبي (RNP) مرتبة في حلزون مزدوج يشكل قلب الفيريون. ويرتبط به بوليميريز الحمض النووي الريبي (RNA) والنوكلياز الداخلية (P1 وP3). النواة محاطة بغشاء يتكون من بروتين M، الذي يربط RNP بطبقة دهنية ثنائية من الغلاف الخارجي وعمليات إبري تتكون من الهيماجلوتينين والنورامينيداز.تحتوي الفيروسات على حوالي 1% RNA، 70% بروتين، 24% دهون و5 % كربوهيدرات. الدهون والكربوهيدرات هي جزء من البروتينات الدهنية والبروتينات السكرية الموجودة في الغلاف الخارجي وهي ذات أصل خلوي. يتم تمثيل جينوم الفيروس بواسطة جزيء الحمض النووي الريبي (RNA) المجزأ. تحتوي فيروسات الأنفلونزا من النوع A وB على 8 أجزاء من الحمض النووي الريبوزي، 5 منها تشفر بروتينًا واحدًا، وآخر 3 تشفر بروتينين لكل منها.

المستضدات

تختلف فيروسات الأنفلونزا A وB وC عن بعضها البعض في المستضد الخاص بالنوع المرتبط بـ RNP (بروتين NP) وبروتين M-matrix، الذي يعمل على تثبيت بنية الفيريون، ويتم اكتشاف هذه المستضدات في RSC. يتم تحديد الخصوصية الأضيق للفيروس من النوع A بواسطة مستضدين سطحيين آخرين - الراصة الدموية H والنورامينيداز N، المعينين بأرقام تسلسلية. الهيماجلوتينين هو بروتين سكري معقد له خصائص وقائية. إنه يحفز في الجسم تكوين أجسام مضادة تحييد الفيروس - مضادات الهيماجلوتينين، المكتشفة في RTGA. يحدد تباين الراصة الدموية (مستضد H) الانجراف المستضدي وتحول فيروس الأنفلونزا. يشير الانجراف المستضدي إلى تغييرات طفيفة في المستضد H الناجم عن طفرات نقطية في الجين الذي يتحكم في تكوينه. يمكن أن تتراكم مثل هذه التغييرات في النسل تحت تأثير عوامل انتقائية مثل الأجسام المضادة. يؤدي هذا في النهاية إلى تحول كمي، يتم التعبير عنه في تغيير في الخصائص المستضدية للهيماجلوتينين. مع التحول المستضدي، يحدث استبدال كامل للجين، والذي قد يعتمد على إعادة التركيب بين فيروسين. يؤدي هذا إلى تغيير في النوع الفرعي من الراصة الدموية أو النيورامينيداز، وفي بعض الأحيان كلا المستضدين، وظهور متغيرات مستضدية جديدة بشكل أساسي للفيروس، مما يسبب أوبئة وجائحات كبرى، كما أن الهيماجلوتينين هو أيضًا مستقبل يتم من خلاله امتصاص الفيروس على الخلايا الحساسة. بما في ذلك كريات الدم الحمراء، مما يجعلها تلتصق ببعضها البعض، وتشارك في انحلال خلايا الدم الحمراء. النورامينيداز الفيروسي هو إنزيم يحفز انقسام حمض السياليك من الركيزة. له خصائص مستضدية وفي نفس الوقت يشارك في إطلاق الفيروسات من الخلية المضيفة. يتغير النورامينيداز، مثل الهيماجلوتينين، نتيجة للانجراف المستضدي والتحول.

الزراعة والتكاثر

تتم زراعة فيروسات الأنفلونزا في أجنة الدجاج وفي مزارع الخلايا. إن البيئة المثالية هي أجنة الدجاج، في التجاويف السلوية والسقاء حيث يتكاثر الفيروس خلال 36-48 ساعة. والأكثر حساسية لفيروس الأنفلونزا هي المزارع الأولية لخلايا الكلى الجنينية البشرية وبعض الحيوانات. يصاحب تكاثر الفيروس في هذه الثقافات ظهور CPE خفيف، يذكرنا بانحطاط الخلايا التلقائي. يتم امتصاص فيروسات الأنفلونزا على مستقبلات البروتين السكري في الخلايا الظهارية، والتي تخترقها من خلال الالتقام الخلوي للمستقبل. يحدث النسخ والتكرار للجينوم الفيروسي في نواة الخلية. في هذه الحالة، تتم ترجمة أجزاء الحمض النووي الريبي (RNA) الفردية المقروءة على شكل m-RNA إلى ريبوسومات، حيث يحدث تخليق البروتينات الخاصة بالفيروس. بعد تكرار الجينوم الفيروسي، يتم تشكيل مجموعة من الحمض النووي الريبي الفيروسي، والذي يستخدم في تجميع القفيصات النووية الجديدة.

طريقة تطور المرض

يحدث التكاثر الأولي للفيروس في الخلايا الظهارية في الجهاز التنفسي. من خلال السطح المتآكل للغشاء المخاطي، يدخل الفيروس إلى الدم، مما يسبب تفير الدم. ويصاحب دوران الفيروس في الدم تلف الخلايا البطانية للشعيرات الدموية، مما يؤدي إلى زيادة نفاذيتها. وفي الحالات الشديدة يلاحظ نزيف في الرئتين وعضلة القلب والأعضاء الداخلية الأخرى. فيروسات الأنفلونزا، التي تدخل الغدد الليمفاوية، تلحق الضرر بالخلايا الليمفاوية، مما يؤدي إلى نقص المناعة المكتسب، مما يساهم في حدوث الالتهابات البكتيرية الثانوية، وفي حالة الأنفلونزا يحدث تسمم الجسم بدرجات متفاوتة الخطورة.

حصانة

ترتبط آلية المناعة ضد الأنفلونزا بالعوامل الطبيعية للحماية غير النوعية المضادة للفيروسات، وبشكل رئيسي مع إنتاج الإنترفيرون والخلايا القاتلة الطبيعية، ويتم توفير مناعة محددة عن طريق عوامل الاستجابة الخلوية والخلطية. يتم تمثيل الأول بواسطة البلاعم والقتلة T. والثاني هو الغلوبولين المناعي، في المقام الأول مضادات الهيماجلوتينين والأجسام المضادة لمضادات اليورومينيداز، التي لها خصائص تحييد الفيروس. هذا الأخير، على عكس مضادات الهيماجلوتينين، يعمل على تحييد فيروس الأنفلونزا جزئيًا فقط، مما يمنع انتشاره. لا تتمتع الأجسام المضادة المثبتة للبروتين النووي الفيروسي بخصائص وقائية حتى بعد مرور 1.5 شهر. تختفي الأجسام المضادة من دماء الناقهين، ويتم اكتشاف الأجسام المضادة في مصل الدم بعد 3-4 أيام من ظهور المرض وتصل إلى الحد الأقصى من التتر بعد 2-3 أسابيع. وتقاس مدة المناعة النوعية المكتسبة بعد الإصابة بالأنفلونزا، خلافا للاعتقادات السابقة، بعدة عقود. تم التوصل إلى هذا الاستنتاج بناءً على دراسة التركيب العمري لحالات الإصابة بالأنفلونزا الناجمة عن فيروس A (H1N1) عام 1977. وتبين أن هذا الفيروس، الذي غاب منذ عام 1957، يصيب فقط الأشخاص الذين تقل أعمارهم عن 20 عامًا في عام 1977. وهكذا، بعد الإصابة بعدوى الأنفلونزا الناجمة عن فيروس الأنفلونزا من النوع A، تتشكل مناعة شديدة، محددة بدقة للنوع الفرعي للفيروس (بواسطة مستضدات H و N) التي تسببت في تكوينه. بالإضافة إلى ذلك، يكون لدى الأطفال حديثي الولادة المناعة السلبية بسبب الأجسام المضادة IgG للنوع الفرعي للفيروس A. تستمر المناعة لمدة 6-8 أشهر.

علم الأوبئة

مصدر العدوى هو المرضى وحاملي الفيروس. يحدث انتقال العامل الممرض عن طريق الرذاذ المحمول جوا. الأنفلونزا هي عدوى وبائية تحدث في كثير من الأحيان في أشهر الشتاء والشتاء والربيع. كل عشر سنوات تقريبًا، تتحول أوبئة الأنفلونزا إلى أوبئة تؤثر على سكان مختلف القارات. يتم تفسير ذلك من خلال التغير في مستضدات H و N للفيروس من النوع A المرتبط بانجراف المستضد والتحول. على سبيل المثال، تسبب فيروس الأنفلونزا A مع الراصة الدموية NSW1 في جائحة الأنفلونزا الإسبانية في عام 1918، والذي أودى بحياة 20 مليون إنسان. وفي عام 1957، تسبب فيروس الأنفلونزا "الآسيوي" (H2N2) في حدوث جائحة أصاب أكثر من ملياري شخص. في عام 1968، ظهر نوع جديد من الجائحة، وهو فيروس الأنفلونزا A (H3N2)، الذي يُسمى فيروس هونج كونج، والذي يستمر في الانتشار حتى يومنا هذا. وفي عام 1977، انضم إليه الفيروس من النوع A (H1N1). وكان هذا غير متوقع، حيث كان فيروس مماثل قد انتشر بالفعل في الفترة 1947-1957، ثم تم استبداله بالكامل بالنوع الفرعي "الآسيوي". وفي هذا الصدد، نشأت فرضية مفادها أن المتغيرات التحولية للفيروس ليست جديدة تاريخيا. إن توقف انتشار فيروس الأنفلونزا، الذي تسبب في الوباء التالي، يرجع إلى المناعة الجماعية للسكان التي تطورت إلى هذا المتغير المستضدي لمسببات المرض. على هذه الخلفية، هناك مجموعة مختارة من المتغيرات المستضدية الجديدة، التي لم تتشكل مناعة جماعية ضدها بعد. وليس من الواضح بعد أين تحول المتغيرات المستضدية (الأنواع المصلية) لفيروس الأنفلونزا A الذي خرج من الدورة النشطة في واحد أو يتم الحفاظ على فترة تاريخية أخرى لفترة طويلة. ومن الممكن أن يكون مستودع استمرار مثل هذه الفيروسات هو الحيوانات البرية والمنزلية، وخاصة الطيور، المصابة بالمتغيرات البشرية لفيروسات الأنفلونزا من النوع A وتحافظ على دورانها لفترة طويلة. وفي الوقت نفسه، تحدث عمليات إعادة التركيب الجيني بين فيروسات الطيور والفيروسات البشرية في أجسام الطيور، الأمر الذي يؤدي إلى تكوين متغيرات مستضدية جديدة. ووفقاً لفرضية أخرى، فإن فيروسات الأنفلونزا من كل الأنواع الفرعية المعروفة تنتشر بشكل مستمر بين السكان، ولكنها تصبح ذات صلة وبائية. فقط مع انخفاض في المناعة الجماعية، وتتميز فيروسات الأنفلونزا من النوعين B وC بثبات مستضدي أعلى. تسبب فيروسات الأنفلونزا B أوبئة وتفشيات محلية أقل حدة. يسبب فيروس الأنفلونزا من النوع C أمراضًا متفرقة، حيث يتم تدمير فيروس الأنفلونزا بسرعة بدرجات حرارة أعلى من 56 درجة مئوية، والأشعة فوق البنفسجية، والمطهرات، والمنظفات. ويظل قابلاً للحياة لمدة يوم واحد. في درجة حرارة الغرفة، على الأسطح المعدنية والبلاستيكية الملساء - لمدة تصل إلى يومين. تعيش فيروسات الأنفلونزا في درجات حرارة منخفضة (-70 درجة مئوية).

الوقاية المحددة

للوقاية من الأنفلونزا، يتم استخدام الريمانتادين، الذي يمنع تكاثر فيروس الأنفلونزا من النوع A. للوقاية السلبية، يتم استخدام الغلوبولين المناعي البشري المضاد للأنفلونزا، الذي يتم الحصول عليه من مصل الدم للمتبرعين المحصنين بلقاح الأنفلونزا. إن إنترفيرون الكريات البيض البشرية له تأثير معين، وتستخدم اللقاحات الحية والمعطلة للوقاية من اللقاحات. عندما يتم إعطاء اللقاحات الحية، تتشكل المناعة العامة والمحلية. وبالإضافة إلى ذلك، لوحظ تحريض الإنترفيرون. وحاليا، تم الحصول على لقاحات معطلة من أنواع مختلفة: الفيروس، والوحدة الفرعية، والانقسام، والمختلط. يتم إنتاج لقاحات الفيروس عن طريق تنقية عالية الجودة للفيروسات المزروعة في أجنة الدجاج. لقاحات الوحدة الفرعية عبارة عن مستضدات سطحية منقاة لفيروس الأنفلونزا - الهيماجلوتينين والنورامينيداز. تتميز مستحضرات اللقاح هذه بانخفاض التفاعل وارتفاع المناعة. يتم تحضير اللقاحات المشقوقة أو المتفككة من معلق فيروسي منقى عن طريق المعالجة بالمنظفات. ومع ذلك، لا يوجد حتى الآن إجماع على تفوق أي من هذه اللقاحات. تحفز اللقاحات المعطلة استجابة مناعية في نظام المناعة الخلطية العامة والمحلية، ولكنها تحفز تخليق الإنترفيرون بدرجة أقل مقارنة باللقاحات الحية. تشير سنوات عديدة من الخبرة في استخدام اللقاحات الحية والمعطلة إلى عدم تطابق المستضدات في سلالات اللقاح مع إن الأمراض الوبائية هي السبب الرئيسي، ولكن ليس الوحيد، في انخفاض فعالية الوقاية من لقاح الأنفلونزا. في السنوات الأخيرة، جرت محاولات لإنشاء لقاحات الأنفلونزا المهندسة وراثيا والاصطناعية.

أنفلونزا

الأنفلونزا مرض تنفسي حاد يصيب الإنسان ويميل إلى الانتشار بشكل وبائي. ويتميز بالتهاب نزفي في الجهاز التنفسي العلوي والحمى والتسمم العام الشديد. غالبا ما تكون الأنفلونزا مصحوبة بمضاعفات شديدة - الالتهاب الرئوي الجرثومي الثانوي، وتفاقم أمراض الرئة المزمنة. تنتمي مسببات أمراض الأنفلونزا إلى عائلة Orthomyxoviridae. ويشمل ثلاثة أنواع من الفيروسات - A، B، C. فيروس الأنفلونزا له شكل كروي، حجمه 80-120 نانومتر. في بعض الأحيان تتشكل الفيروسات الخيطية. يتكون الجينوم من RNA ناقص الجديلة، والذي يتكون من ثمانية أجزاء، ومحاط بقفيصة بروتينية. يرتبط الحمض النووي الريبي (RNA) بأربعة بروتينات داخلية: البروتينات النووية (NP) والبروتينات ذات الوزن الجزيئي العالي PI، P2، R3، المشاركة في نسخ الجينوم وتكاثر الفيروس. للقفيصة النووية نوع حلزوني من التماثل. توجد فوق غلاف القفيصة طبقة من بروتين المصفوفة (بروتين M). على الغلاف الخارجي فائق القفيصة، يوجد الهيماجلوتينين (H) والنورامينيداز (N) على شكل أشواك. كل من البروتينات السكرية (N وH) لها خصائص مستضدية واضحة. في فيروسات الأنفلونزا، تم العثور على 13 نوعًا مختلفًا من مستضدات الهيماجلوتينين (NI-13) و10 أنواع مختلفة من النيورامينيداز (N1-10). بناءً على مستضد البروتين النووي الداخلي، تم التمييز بين ثلاثة أنواع من فيروسات الأنفلونزا - A، B، C، والتي يمكن تحديدها في RSC. فيروسات النوع A التي تصيب البشر تحتوي على ثلاثة أنواع من الراصة الدموية (HI، H2، H3) واثنين من النورامينيداز (N1، N2). اعتمادًا على مجموعاتها، يتم تمييز أنواع مختلفة من فيروسات الأنفلونزا A - H1N1، H2N2، H3N2. يتم تحديدها في تفاعل تثبيط التراص الدموي مع الأمصال المناسبة.يمكن زراعة فيروسات الأنفلونزا بسهولة في أجنة الدجاج ومزارع الخلايا المختلفة. الحد الأقصى لتراكم الفيروسات يحدث بعد 2-3 أيام. في البيئة الخارجية، يفقد الفيروس قدرته على العدوى بسرعة من خلال الجفاف. في درجات حرارة منخفضة في الثلاجة، يتم تخزينه لمدة أسبوع، عند -70 درجة مئوية - لفترة أطول بكثير. يؤدي التسخين إلى تعطيله بعد بضع دقائق. تحت تأثير الأثير، الفينول، الفورمالديهايد، يتم تدميره بسرعة.

طريقة التشخيص الفيروسي

مادة البحث هي مسحات من البلعوم الأنفي، وإفرازات الأنف، والتي تؤخذ بمسحات قطنية معقمة جافة أو مبللة في الأيام الأولى من المرض، والبلغم. يمكن العثور على الفيروسات في الدم والسائل النخاعي. في الحالات القاتلة يتم إزالة قطع من الأنسجة المصابة من الجهاز التنفسي العلوي والسفلي والدماغ وغيرها، ويتم أخذ مسحة من البلعوم الأنفي على معدة فارغة. يجب على المريض أن يتغرغر ثلاث مرات بمحلول ملحي معقم من كلوريد الصوديوم (10-15 مل) يتم جمعه في برطمان معقم واسع العنق. بعد ذلك، قم بمسح الجدار الخلفي للبلعوم والممرات الأنفية بقطعة من القطن المعقم، ثم اغمسها في مرطبان مع المضمضة، ويمكنك أخذ المادة بمسحة معقمة مبللة بمحلول كلوريد الصوديوم، والتي تستخدم في امسح الجدار الخلفي للبلعوم جيدًا. بعد جمع المادة، يتم غمر المسحة في أنبوب اختبار بمحلول فسيولوجي يضاف إليه 5% من مصل الحيوان المعطل. في المختبر، يتم شطف المسحات في السائل، وضغطها على جانب الأنبوب، وإزالتها. يُحفظ الصرف في الثلاجة حتى يستقر، ثم يُجمع الجزء الأوسط من السائل في أنابيب معقمة. تضاف المضادات الحيوية البنسلين (200-1000 وحدة دولية/مل)، والستربتوميسين (200-500 ميكروغرام/مل)، والنيستاتين (100-1000 وحدة دولية/مل) إلى المادة لتدمير البكتيريا المصاحبة، ويتم الاحتفاظ بها لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة وتستخدم لتدمير البكتيريا. عزل الفيروسات بعد فحصها مسبقا للعقم طريقة حساسة لعزل الفيروسات التي تصيب أجنة الدجاج بعمر 10-11 يوما. يتم حقن مادة بحجم 0.1-0.2 مل في التجويف الأمنيوسي أو السقاء. وكقاعدة عامة، يصاب 3-5 أجنة. يتم تحضين الأجنة عند درجة حرارة مثالية تتراوح بين 33-34 درجة مئوية لمدة 72 ساعة. ومن أجل زيادة عدد الفيروسات في مادة الاختبار، يتم تركيزها مسبقًا. وللقيام بذلك، يستخدمون طرق امتصاص الفيروسات على خلايا الدم الحمراء للدجاج، أو العلاج بمحلول التربسين 0.2٪ من أجل تعزيز الخصائص المعدية للفيروسات، أو ترسيبها باستخدام طرق خاصة. بعد الحضانة، يتم تبريد أجنة الدجاج في درجة حرارة منخفضة. درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة 2-4 ساعات، ثم يتم امتصاصها باستخدام ماصات معقمة أو حقنة أو السائل السقاء أو السائل الأمنيوسي. في هذه الحالة، يتم تحديد وجود فيروس معدي باستخدام RGA. للقيام بذلك، قم بخلط كميات متساوية (0.2 مل) من مادة مقاومة للفيروسات و1% معلق من خلايا الدم الحمراء للدجاج. تتم الإشارة إلى التفاعل الإيجابي (وجود فيروس في المادة) من خلال ترسيب كريات الدم الحمراء على شكل مظلة.إذا كان هناك فيروس في المادة له خصائص التصاق دموي، تتم معايرته باستخدام RGA الموسع، وتحديد عيار النشاط الدموي. باستخدام هذا التفاعل، يتم تحديد عيار فيروس التراص الدموي - وهو أعلى تخفيف للمادة التي لا تزال تنتج تفاعل التراص الدموي. يتم أخذ هذه الكمية من الفيروس كوحدة دموية واحدة (HAU).

التعرف على فيروسات الأنفلونزا باستخدام RTGA

للقيام بذلك، قم أولاً بإعداد التخفيف العملي للمادة الفيروسية، التي تحتوي على 4 غاو من الفيروس في حجم معين، ويؤخذ التفاعل في الاعتبار بعد تكوين رواسب كريات الدم الحمراء في آبار التحكم. يتم الإشارة إلى رد الفعل الإيجابي من خلال تأخير التراص الدموي في آبار الاختبار.يمكن عزل فيروسات الأنفلونزا باستخدام خطوط زراعة الخلايا المختلفة - الجنين البشري، وكلية القرد، وخط خلايا الكلى المستمر للكلاب (MDCK) وغيرها. في مزارع الخلايا، يتجلى تأثير الفيروسات الخلوي (ظهور خلايا ذات حواف صدفية، فجوات، وتكوين شوائب داخل النواة والسيتوبلازم)، والذي ينتهي بانحطاط الطبقة الأحادية للخلية.للتعرف على الفيروسات المعزولة، يتم استخدام RTGA (شريطة أن يكون عيار الهيماجلوتينين في سائل الاستزراع 1:8 على الأقل). بالإضافة إلى هذا التفاعل، يمكنك استخدام RGGads، ومع ذلك، فهو أقل حساسية ويتطلب عيار مصل مناعي لا يقل عن 1:160 بالإضافة إلى RSK، RN، REMA، إلخ.

دراسة مصلية

يستخدم الاختبار المصلي لتأكيد تشخيص الأنفلونزا. يعتمد على تحديد زيادة بمقدار أربعة أضعاف في عيار الأجسام المضادة في مصل المريض، يتم الحصول على المصل الأول عند بداية المرض في الفترة الحادة (2-5-1 أيام من المرض)، والثاني - بعد 10- اليوم الرابع عشر من المرض. نظرًا لأنه يمكن خلط الأمصال في نفس الوقت، يتم تخزين أولها في الثلاجة عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. في أغلب الأحيان، يتم استخدام RTGA، RSK، RNGA. يتم تنفيذ هذه التفاعلات باستخدام مجموعات خاصة من التشخيصات الفيروسية القياسية (السلالات المرجعية لفيروس الأنفلونزا من مختلف الأنواع المصلية). نظرًا لأن أمصال المريض قد تحتوي على مثبطات التراص الدموي غير المحددة، يتم تسخينها أولاً عند درجة حرارة 56 درجة مئوية ويتم معالجتها أيضًا بإنزيم خاص (على سبيل المثال، النيورامينيداز) أو محاليل بريودات البوتاسيوم، والريفانول، وكلوريد المنغنيز، ومعلق الإطارات البيضاء، وما إلى ذلك. وفق مخططات خاصة. و

رد فعل تثبيط التراص الدموي

يمكن إجراء تفاعل تثبيط التراص الدموي في أنابيب اختبار (ماكرومش تود) أو في ألواح خاصة للدراسات المناعية، ويعتبر التفاعل إيجابيًا عند تكوين رواسب كثيفة ومتماسكة من خلايا الدم الحمراء ذات حواف ناعمة.

التشخيص السريع

تعتمد الطريقة على تحديد مستضدات فيروسية محددة في مادة الاختبار باستخدام التألق المناعي في RIF المباشر أو غير المباشر. يتم الحصول على المخاط من الممرات الأنفية أو الجدار الخلفي للبلعوم، ويتم تحضيره بالطرد المركزي، ويتم تحضير المسحات على شرائح زجاجية من رواسب الخلايا الظهارية العمودية للغشاء المخاطي. يتم علاجهم بأمصال الفلورسنت المناعي المقترنة بالفلوروكروم، على سبيل المثال، FITC (إيزوثيوسيانات الفلورسين). عند دراسة الأدوية باستخدام مجهر الفلورسنت، لوحظ توهج مميز باللون الأخضر والأصفر لفيروسات الأنفلونزا، والتي يتم توطينها في بداية المرض في نوى الخلايا الظهارية، ومؤخرًا، تم اقتراح استخدام ELISA وRZNGA وPCR للإشارة إلى مستضدات فيروسية محددة.