Deriva del virus influenzale. Struttura antigenica. Gli antigeni tipici dei virus influenzali di tipo A sono l'emoagglutinina e la neuraminidasi; la combinazione di queste proteine è la base per la classificazione dei virus influenzali. Genetica molecolare del virus dell'influenza
Tipico Ag dei virus influenzali di tipo A - ; la combinazione di queste proteine è la base per la classificazione dei virus influenzali. In particolare, il 13 Ag viene isolato dal virus dell'influenza A vari tipi emoagglutinina e 10 tipi di neuraminidasi. Le differenze antigeniche tra i virus di tipo A, B e C determinano differenze nelle strutture delle proteine NP e M. Tutti i ceppi di virus di tipo A hanno gruppo (S-) Ag rilevato in RTGA. Ag specifico per tipo - emoagglutinina e neuraminidasi; la variazione nella loro struttura porta all’emergere di nuove varianti sierologiche, spesso nella dinamica di un’epidemia (Fig. 26 –2 ). I cambiamenti nella struttura antigenica possono verificarsi in due modi:
Disposizione Y, disegno 26-02.
Riso. 26 –2 . Schema dei meccanismi, causando lo spostamento antigenico e la deriva antigenica dei virus influenzali. Spiegazioni nel testo.
Deriva antigenica. Provoca lievi cambiamenti nella struttura dell'Ag causato da mutazioni puntiformi. In misura maggiore, c'è un cambiamento nella struttura dell'emoagglutinina. La deriva si sviluppa nella dinamica del processo epidemico e riduce la specificità delle reazioni immunitarie che si sono sviluppate nella popolazione a seguito della precedente circolazione dell'agente patogeno.
Spostamento antigenico. Provoca l'emergere di una nuova variante antigenica del virus, non correlati o lontanamente correlati antigenicamente alle varianti precedentemente circolanti. Presumibilmente, lo spostamento antigenico avviene come risultato della ricombinazione genetica tra ceppi virali umani e animali o della circolazione latente in una popolazione virale che ha esaurito il suo potenziale epidemico. Ogni 10-20 anni, la popolazione umana viene aggiornata, ma lo “strato” immunitario scompare, il che porta alla formazione di pandemie.
R. G. WEBSTER e W. G. LEIVER i(R.G. WEBSTER e W.G. LAYER)
I. INTRODUZIONE
Il virus dell'influenza di tipo A1 è unico tra gli "agenti causali delle malattie infettive umane grazie alla sua capacità di modificare la propria struttura antigenica in modo così forte che l'immunità specifica acquisita in risposta" all'infezione con un ceppo fornisce pochissima o nessuna protezione contro il successivo virus emergente La variabilità del virus influenzale continua ad essere una delle principali malattie umane epidemiche.
Nei virus influenzali sono stati riscontrati due tipi di variazione antigenica: deriva antigenica (Burnet, 1955) e spostamento antigenico significativo. La deriva antigenica è caratterizzata da cambiamenti relativamente piccoli che si verificano principalmente all'interno di una famiglia di ceppi, ciascuno dei quali può essere facilmente correlato con tutti gli altri ceppi di questa famiglia in relazione agli antigeni sia interni che di superficie. Tra i ceppi del virus dell’influenza A che infettano l’uomo, ogni variante successiva sostituisce quella precedente. Ciò è probabilmente dovuto al vantaggio selettivo che le nuove varianti antigeniche hanno nel superare le barriere immunologiche dell’ospite. La deriva antigenica è caratteristica dei virus influenzali non solo A, YAO e B.
Il secondo tipo di variabilità antigenica, che è stata descritta solo per il virus A, comporta cambiamenti più inaspettati e drammatici. Sono chiamati spostamenti antigenici significativi2. Questi cambiamenti avvengono a intervalli di 10-15 anni (vedi capitolo 15) e sono contrassegnati dall’emergere di “nuovi” virus antigenicamente verso i quali la popolazione non ha immunità, e sono proprio questi “virus che causano significative pandemie influenzali”.
Questi “nuovi” virus hanno subunità HA1 e NA completamente diverse da quelle circolanti nell’uomo prima della comparsa del nuovo virus. Può verificarsi uno spostamento significativo in uno o entrambi gli antigeni di superficie; sono state descritte due pandemie influenzali, causate da virus appartenenti a ciascuna di queste due categorie (vedi Capitolo 15).
L'influenza è anche un'infezione naturale di alcuni animali e uccelli. Virus esclusivamente di tipo A sono stati isolati da maiali, cavalli e una varietà di uccelli, inclusi polli, anatre, tacchini, quaglie, fagiani e sterne (McQueen et al., 1968; Pereira, 1969; Organizzazione Mondiale della Sanità, 1972) . In precedenza, si credeva che la superficie di una particella del virus dell'influenza fosse costituita da un mosaico di antigeni che fanno parte di tutti i ceppi. di questo tipo, e che la variabilità antigenica è il risultato del movimento di questi antigeni da una posizione prominente a una posizione latente e viceversa. Successivamente è stato proposto un altro meccanismo di deriva antigenica. Attualmente, si ritiene che si verifichino costantemente cambiamenti negli amminoacidi che costituiscono i determinanti antigenici delle subunità HA e NA. Sono il risultato della selezione di mutanti che presentano cambiamenti nella sequenza aminoacidica delle subunità polieltidiche, a loro volta causati dalla mutazione dell'RNA virale. Le subunità emoagglutinanti e neuraminidasi di questi "nuovi" virus sono antigenicamente completamente diverse dalle subunità dei virus che circolavano tra gli esseri umani prima della comparsa di nuovi ceppi. Pensiamo che il “nuovo” virus non sia il risultato di una mutazione di un precedente virus influenzale umano, ma derivi dalla ricombinazione genetica tra un virus umano e uno dei tanti ceppi del virus dell’influenza A i cui ospiti naturali sono animali o uccelli. Essendo sorto, il "nuovo" virus sostituisce quello "vecchio", che scompare completamente dalla popolazione umana.
Non sono stati ancora identificati cambiamenti antigenici significativi nei virus dell’influenza B. Pereira (1969) ha suggerito che la mancanza di cambiamenti antigenici significativi nei virus dell’influenza B potrebbe essere dovuta all’assenza di tali virus influenzali tra gli animali inferiori e gli uccelli.
La variabilità antigenica include solo le subunità HA e NA; le proteine interne del virus (antigene nucleotiroideo e proteina M della matrice o della membrana) sono in gran parte costanti. Dei due antigeni di superficie, l’HA è il più importante, poiché gli anticorpi contro questo antigene neutralizzano l’infettività del virus.
II. L'INFLUENZA SOTTO L'ASPETTO STORICO (vedi anche cap. 15)
A. PROVA DI CAMBIAMENTI ANTIGENICI
Malattie simil-influenzali sono state segnalate frequentemente nei secoli passati (Hirsch, 1883); la malattia o è emersa sotto forma di pandemie, coprendo una parte molto ampia della popolazione e diffondendosi quasi in tutto il mondo, oppure ha rappresentato focolai locali. Fino al 1933, quando fu isolato per la prima volta il virus influenzale (dall’uomo, ndr) 1, non era possibile affermare con certezza se una determinata pandemia fosse effettivamente causata da un virus influenzale. Tuttavia, le caratteristiche delle epidemie descritte nei documenti storici indicano che queste epidemie potrebbero essere state causate da virus influenzali. Anche se altre malattie infettive possono presentare sintomi caratteristici dell’influenza, solo l’influenza causa epidemie improvvise che durano diverse settimane e scompaiono altrettanto improvvisamente (Burnet, White, 1972). tempi lontani (Mulder, Mazurel, 1958).
La prima epidemia di influenza conosciuta fu registrata in Germania nel 1170 (Hirsch, 1883), e da altre fonti storiche si può compilare un elenco abbastanza completo delle epidemie in Europa a partire dal 1500. Qui verranno menzionate solo le epidemie più gravi. Maggiori dettagli possono essere trovati in Hirsch (1883), Creighton (1891, 1894), Burnet e Clarke (1942) e Burnet e White (1972).
Epidemia del 1781-1782 iniziò in Asia nel 1781 e poi all'inizio del 1782 si diffuse attraverso la Russia fino all'Europa. Questa epidemia causò relativamente pochi decessi, ma la sua particolarità era che la malattia colpiva più spesso le persone di mezza età rispetto ai bambini e agli anziani. Epidemie piuttosto gravi si verificarono anche nel 1803, 1833, 1837 e 1847. Epidemia del 1847-1848 iniziò nella Russia orientale nel marzo 1-847 e raggiunse l'Europa e l'Inghilterra nell'inverno 1847-1848. Questa epidemia ha causato molti decessi, soprattutto tra gli anziani.
La pandemia del 1889 arrivò in Europa anche dalla Russia, raggiungendo l’Inghilterra e l’America all’inizio del 1890. La malattia si diffuse alla velocità dei viaggiatori. Dopo la comparsa del virus nel 1889, in ciascuno degli anni successivi si verificarono altre quattro ondate infettive. La seconda e la terza epidemia hanno causato molti decessi, soprattutto tra bambini e anziani. Studi sierologici (Mulder e Mazurel, 1958) e altri studi (Pereira, 1969) suggeriscono che a quel tempo erano presenti virus correlati ai virus dell'influenza asiatica, di Hong Kong e del sierotipo 2 equino.
La pandemia influenzale più grave si verificò nel 1918-1919. L’origine di questa pandemia non è esattamente nota, ma Burnet e Clarke (1942) ritengono che il virus potrebbe essersi sviluppato indipendentemente in Asia e in Europa, o potrebbe essere stato introdotto in Europa (da lavoratori cinesi). La pandemia arrivò a ondate e uccise un media tra 20 e 50 milioni di persone). "di vite umane, per lo più giovani. La pandemia del 1918-1919 fu probabilmente causata da un ceppo di virus dell'influenza A correlato al virus dell'influenza suina. Ciò fu suggerito per la prima volta da Laidlaw (1935) e Shope (1936), ma è possibile che questo virus sia stato trasferito da studi intensivi sul declino con l'età degli anticorpi contro il virus dell'influenza suina nei sieri umani condotti da Davenport et al (1953-1964), Hennessy et al (1965) suggeriscono che il virus causando l'epidemia del 1918-1919 1pg., sierologicamente correlata al virus dell'influenza suina.
L’elevato numero di decessi portò Burnet e Clarke (1942) a suggerire che questo virus potesse avere una virulenza insolita. Secondo altri ricercatori (Zhdanov et al., 1958; Kilbourne, 1960), le condizioni di guerra e l’assenza di antibiotici potrebbero essere causa di elevata mortalità per infezioni batteriche secondarie, sembra però probabile che alcuni virus mutanti avessero un’elevata virulenza, perché il virus pandemico “g.” del 1781, che colpì anche i giovani, non causò un tasso di mortalità così elevato.
B. CAMBIAMENTI ANTIGENICI NEL VIRUS NEL PERIODO DOPO IL 1933
Dopo l’identificazione del primo virus influenzale, designato come H0N1 (Organizzazione Mondiale della Sanità, 1971), si sono verificati spostamenti antigenici nel 1947, quando è apparso il virus H1N1 (ad esempio, A/FM/1/47), nel 1957, quando Virus H2N2 (ad esempio A/Singapore/1/57) e nel 1968 quando apparve il virus di Hong Kong (A/Hong Kong/1/68). Lo spostamento antigenico nel 1947 consistette in un cambiamento dell'antigene emoagglutinante (da H0N1 a H1N1"); nel 1957, sia HA che NA differivano antigenicamente completamente dagli antigeni dei virus degli anni precedenti (da H1N1 a H2N2), e nel 1968 il la variante Hong Kong ha mostrato una differenza antigenica significativa nell'HA (da H2N2 a H3N2).
Il ceppo asiatico del virus influenzale (H2N2), apparso per la prima volta in una delle province della Cina nel 1957, conteneva subunità HA e NA che erano antigenicamente completamente diverse dalle subunità H0N1 e H1N1 dei virus influenzali precedentemente circolanti tra gli esseri umani. Questo ceppo del virus dell’influenza causò una pandemia senza precedenti nella storia (Burnet, White, 1972), ma il numero di decessi fu esiguo. La successiva e finora ultima pandemia influenzale è stata causata dal virus A/Hong Kong/68, in cui le subunità NA erano simili a quelle del "vecchio" virus asiatico A2, e le subunità HA erano completamente antigenicamente diverse da quelle del virus "vecchio" ceppo asiatico (Coleman et al., 1968; Schulman e Kilbourne, 1969; Webster e Laver, 1972).
B. CARATTERISTICHE GENERALI DELLE PRECEDENTI PANDEMIE
La natura pandemica dell’influenza nell’uomo indica che, a intervalli irregolari, l’umanità è colpita da virus con nuovi determinanti antigenici. Le informazioni di cui sopra indicano che queste pandemie spesso hanno origine nel sud-est asiatico e si diffondono alla velocità dei viaggiatori. La maggior parte delle pandemie ha causato un aumento della mortalità tra i bambini e gli anziani, ma almeno due pandemie (1781 e 1918) hanno causato un aumento della mortalità tra i giovani.
III. PROPRIETÀ DEL GENOMA DEL VIRUS DELL'INFLUENZA
Il virus dell'influenza ha un genoma frammentato, costituito da almeno sette frammenti di RNA a filamento singolo. Tale frammentazione consente al genoma di "riorganizzarsi ("ricombinarsi") durante infezioni miste con ceppi diversi (vedere Capitolo 7) e può essere fondamentale per la variabilità antigenica. I virus ricombinanti dell'influenza A si formano ad alta frequenza dopo l'infezione mista di cellule con due diversi virus dell'influenza A. , Gotlieb, 1953, 1955; Simpson e Hirst, 1961; Simpson, 1964; Sugiura e Kilbourne, 1966) È stato scoperto che il la frequenza di ricombinazione può raggiungere il 97%.
L'elevata frequenza di ricombinazioni tra virus influenzali consente la formazione di virus ibridi antigene durante l'infezione mista sia negli esperimenti in vitro che in vivo. Per la prima volta, la conferma biochimica di ciò fu data da Laver e Kilbourne (1966), i quali scoprirono che un virus X7 ricombinante geneticamente stabile isolato da cellule miste infettate con ceppi NW-S (H0N1) e RI / 5+ (H2N2) di il virus dell'influenza ha subunità HA del virus H0N1, ma possiede subunità NA del virus H2N2. Successivamente sono stati isolati molti altri virus dell'influenza A ricombinanti e di fatto possono essere creati "nell'ordine giusto" (Webster, 1970) (vedi anche 39). La formazione di nuovi ceppi influenzali mediante ricombinazione tra virus animali (o aviari) e umani è discussa nella Sezione VII. È stato dimostrato che i ceppi virali che causano pandemie influenzali possono presentarsi in natura in questo modo. È anche possibile la ricombinazione tra i virus dell’influenza B (Perry e Burner, 1953; Perry et al., 1954; Ledinko, 1955; Tobita e Kilbourne, 1974), ma la ricombinazione tra i virus dell’influenza A e B non è mai stata trovata.
IV. SUBUNITÀ DELL'EMAGLUTININA
E LE NEURAMINIDASI COME ALTAMENTE VARIABILI
ANTIGENI
Le attività di emoagglutinazione e neuraminidasi del virus dell'influenza sono associate a varie subunità (Laver e Valentine, 1969; Laver, 1973), che formano uno strato di punte sulla superficie delle particelle virali (32).
L’emoagglutinina è il principale antigene di superficie. È responsabile dell'interazione del virus con la superficie cellulare e dell'induzione di anticorpi neutralizzanti. La variabilità dell'antigene emoagglutinante contribuisce alla comparsa di nuove epidemie influenzali.
L'enzima NA è il secondo antigene di superficie virus-specifico della particella del virus dell'influenza. Dal punto di vista antigenico, NA è completamente diverso da HA (Seto, Rott, 1966; Webster, Laver, 1967). Gli anticorpi NA non neutralizzano l'infettività del virus ( tranne che a concentrazioni molto elevate), ma rallentano notevolmente il rilascio del virus dalle cellule infette (Seto e Rott, 1966; Webster e Laver, 1967; Kilbourne et al., 1968; Becht et al., 1971; Dowdle et al ., 1974), e questi anticorpi potrebbero svolgere un ruolo importante nel ridurre la replicazione virale in vivo e nel prevenire la diffusione
infezioni (Schulman et al., 1968). La consueta variabilità è inerente anche alla NA, le variazioni di questo antigene sono forse meno significative per l'epidemiologia dell'influenza.
Le subunità emoagglutinanti sono strutture glicoproteiche a forma di bastoncino di sezione trasversale triangolare con un peso molecolare relativo di circa 215.000 (33). Sono "monovalenti" e (interagiscono con
recettori cellulari ad una sola estremità (Laver e Valentine, 1969). Le subunità isolate sono altamente immunogeniche quando somministrate agli animali in presenza di un adiuvante. Ciascuna particella virale contiene circa 400 subunità HA (Tiffany Blough, 1970; Schulze, 1973; Layer, 1973).
Le subunità HA sono costituite da due polilettidi con un peso molecolare relativo di circa 25.000 e 55.000 (Compans et al., 1970; Schulze, 1970; Laver, 1971; Skehel e Schild, 1971; Stanley e Haslam, 1971; 1972; Klenk et al. , 1972). Sono designati come scolipeptidi pesanti e leggeri HA1 e HA2. Oi6e, queste catene sono sintetizzate come un singolo precursore Nick del tulle-peltide con un peso molecolare di circa 80.000, che viene scisso in un numero di cellule in polipeptidi leggeri e pesanti (Lazarowitz et al., 1971, 1973; Skechel, 1972; Klenk et al., 1972). Nelle subunità intatte, le catene pesanti e leggere sono collegate da legami disolfuro, formando un dimero, e ciascuna subunità HA è costituita da due o tre dimeri di questo tipo (Laver, 1971).
Le subunità HA hanno mietitori idrofobici e idrofili (34). L'estremità idrofila è responsabile dell'attività biologica della subunità, mentre l'estremità idrofoba si lega ai lipidi dell'involucro virale. Le proprietà idrofobiche della subunità sono apparentemente associate al C-terminale della catena polipeptidica della muffa (HA2) (Skehel e Waterfield, 1975) (OM. Cap. 3).
La subunità neuraminidasi è una struttura glicoproteica con peso molecolare relativo di circa 240.000, costituita da teste quadrate, scatolari, di 8-8-4 alveoli, IK al centro delle quali è attaccato un filo con coda diffusa o con piccola testa all'estremità (, 35) (Laver e Valentine, 1969; Wrigley et al., 1973). Le subunità isolate hanno piena attività enzimatica e sono altamente immunogeniche quando somministrate ad animali con un adiuvante. Ciascuna particella virale contiene circa 80 subunità NA (Schulze, 1973; Laver, 1973). Tuttavia, il numero di subunità NA in una particella virale può variare a seconda del ceppo (Webster et al., 1968; Webster e Laver, 1972; Palese e Schulman, 1974), nonché del tipo di cellula ospite su cui si trova la particella virale. il virus è cresciuto.
Le subunità NA sono costituite da quattro lolipeptidi tlicosilati con peso molecolare relativo di circa 60.000 legati tra loro da ponti disolfuro localizzati nel filamento o nella sua coda (vedi anche Capitolo 4). Nella maggior parte dei ceppi, questi 4 polipeptidi sembrano essere identici. Tuttavia, in alcuni ceppi, NA, (probabilmente consiste di due tipi di polipeptidi che differiscono leggermente in dimensioni (Webster, 1970a; Skechel, Schield, 1971; Bucher, Kilbourne, 1972; Laver e Baker, 1972; Lazdins et al., 1972; Downie e Laver, 1973; Wrigley et al., 1973).
Il sito attivo dell'enzima e i determinanti antigenici sono localizzati in diverse regioni della testa della subunità NA (Ada et al., 1963; Fazekas de St. Groth, 1963), e queste teste hanno proprietà idrofile. La "coda" della NA è idrofobica e serve a fissare la subunità all'involucro lipidico del virus (Laver e Valentine, 1969) (vedi "29").
A. ISOLAMENTO E SEPARAZIONE DELLE SUBUNITÀ SU E NA
Per alcuni ceppi di virus influenzali, le subunità HA e NA pure e intatte possono essere ottenute mediante elettroforesi su strisce di acetato di cellulosa dopo la distruzione delle particelle virali con SDS (Laver, 1964, 1971; Laver e Valentine, 1969; Downie, 1973). Il successo dell'isolamento di una qualsiasi di queste subunità utilizzando questa tecnica dipende dalla loro resistenza alla denaturazione dell'SDS a temperatura ambiente. Secondo questo criterio i virus influenzali possono essere suddivisi in quattro gruppi.
1. Virus con subunità HA resistenti all'alcol denaturato
Scheda di sicurezza. Quando i virus di questo tipo vengono distrutti, SDS ed electro
troforesi su strisce di acetato di cellulosa tutte le proteine virali,
“a parte le subunità HA, migrano come anioni. Emoaggluti-
il nin che migra come catione può essere isolato puro
forma con il pieno ripristino dell'attività biologica
in condizioni che non distruggono i legami covalenti [ad esempio
misure: A/Bel/42 (H0N1)].
2. Virus con subunità NA resistenti ai denaturati
Scheda di sicurezza. Possono essere subunità NA pure e attive
separati da questi virus con il metodo sopra descritto (ad es
misure: B/LEE/40).
3. Virus in cui né HA né NA sono resistenti al dena
Tour SDS. In questo caso, tutte le proteine virali migrano
come possono farlo gli anioni e nessuna delle subunità superficiali
può essere isolato con i metodi descritti [ad esempio:
A/NWS/33(H0N1)].
4. Virus con subunità HA e NA
resistente alla denaturazione dell'SDS. Per questi virus, sia sub
unità durante l'elettroforesi - migrano come cationi
e non può essere suddiviso in questo modo [ad esempio:
A/Singapore? 1/57 (H2N2)].
Le subunità HA e NA di quest'ultimo gruppo di virus possono essere isolate come mostrato in 36. È stato isolato un virus dell'influenza aviaria (A/petrel/Australia/1/72(Hau6May5) che è stabile a SDSHAHNA (Downie e Laver, 1973 Durante l'elettroforesi dell'acetato di cellulosa, si muovevano insieme come cationi (vedi 31, in alto) e non potevano essere separati in questo modo. Pertanto, i due tipi di queste subunità furono separati geneticamente mediante ricombinazione (Webster, 1970b). con subunità HA o NA sensibili alla denaturazione con SDS Le subunità del virus aviario HA e NA stabili alla SDS sono state quindi isolate dalle particelle virali ricombinanti disgregate con SDS mediante elettroforesi su strisce di acetato di cellulosa (e. 31, IB al centro e in basso). e preparazione di antisieri "monospecifici".
Le subunità HA e NA possono anche essere isolate da alcuni ceppi del virus dell'influenza trattando le particelle virali con enzimi schroteolitici (Noll et al., 1962; Seto et al., 1966; Compans et al., 1970; Brand, Skehel, 1972; Wrigley et al., 1973. Con questo metodo, la separazione delle subunità superficiali dalle particelle virali avviene, apparentemente, come risultato della digestione degli elementi idrofobici (estremità della catena polipentidica, che sono responsabili dell'attaccamento delle subunità allo strato lipidico dell'involucro virale, ma dovrebbe verificarsi una digestione parziale anche in altre aree della subunità HA, con conseguente compromissione dell'attività emoagglutinante e perdita di alcuni determinanti antigenici.
B. SEPARAZIONE DEI POLIPEPTIDI DELL'EMOGLUTININA (HA1 E HA2)
Le catene leggere e pesanti delle subunità emoagglutinanti possono essere separate mediante elettroforesi del corpo SDS-poliacrilammide. Tuttavia, per scopi preparativi, la migliore separazione si ottiene mediante centrifugazione su gradiente di densità della guanidina cloridrato-ditiotrietolo (Laver, 1971), effettuata in condizioni di rottura del legame disolfuro, o mediante tel-filtrazione in una soluzione di guanidina cloridrato-ditiotrietolo (Webster, 1970a). Questa separazione sembra essere basata sulla significativa idrofobicità della catena polipeptidica leggera. Nel processo di centrifugazione in una soluzione concentrata di guanidina cloridrato - ditiotrietolo, questo polipeptide leggero lo degrada "più velocemente della catena pesante, e durante la filtrazione del gel, la catena leggera esce per prima, apparentemente a causa del fatto che anche in una soluzione così forte mezzo dissociante, la catena leggera non esiste iB come monomero.
Queste osservazioni si applicano solo alle "subunità HA derivate da un virus cresciuto su cellule in cui avviene la completa scissione proteolitica prima della
Polipeptide HA in NAL e HA2. Inoltre, i polipeptidi pesanti e leggeri (HA1 e HA2) delle subunità HA prodotti dalla digestione proteolitica non possono essere separati in questo modo, probabilmente perché le "regioni idrofobiche della catena leggera" vengono distrutte durante la digestione (Skehel, Laver, dati non pubblicati) . ).
B. PROPRIETÀ DI HA1 E HA2
Le catene polipeptidiche leggere e pesanti del virus dell'influenza A, ceppo BEL (H0N1), avevano una composizione polipeptidica simile, tranne per il fatto che il polipeptide pesante conteneva significativamente più prolina rispetto alla catena leggera (Laver e Raker, 1972). Tuttavia, le mappe peptidiche dei prodotti della scissione triptica di queste due catene erano completamente diverse, indicando una diversa sequenza di amminoacidi in queste catene (Laver, 1971). Entrambe le catene polipeptidiche contengono carboidrati, ma l'analisi della glucosamina suggerisce che il polipeptide pesante contiene molti più carboidrati della catena leggera. Si è scoperto che la catena pesante conteneva il 9,4% di N-acetilglucosamina e zuccheri neutri; quindi, probabilmente contiene circa il 20% di carboidrati.
D. NUMERO DI DIVERSI VIRUS SPECIFICI
DETERMINANTI ANTIGENICI IN SUPERFICIE
SUBUNITÀ ATTIVE
Numero di diversi antigenici specifici del virus
determinante sulle subunità emalglutinanti del virus
l'influenza è sconosciuta (sulla superficie dell'emoagglutinazione
subunità, ci sono anche determinanti specifici
alla cellula ospite). Recenti esperimenti hanno dimostrato
tuttavia, che le subunità emoagglutinanti del ceppo Gon
cong (H3N2) del virus dell'influenza umana hanno almeno
almeno due, e forse più, diversi virus-specifici
determinanti antigenici cal (Laver et al., 1974).
Ciò è stato dimostrato come segue: hemagglu
le subunità coloranti sono state ottenute dal virus dell'influenza
Hong Kong (A/Hong Kong/68, H3N2) e la sua variante antigenica
A / Memphis / 102/72, sorto come risultato dell'antigenico
deriva. I test di immunodiffusione hanno dimostrato che la subunità
Gli host del virus Hong Kong/68 ne hanno almeno due
vari tipi determinanti antigenici, mentre
La variante del 1972 apparentemente reca almeno tre volte
determinanti personali (37).
Le subunità emoagglutinanti dei virus A/Hong Kong/68 e A/Memphis/102/72 avevano un determinante comune. Gli anticorpi contro questo determinante "hanno reagito in modo crociato con entrambi i virus nei test di immunodiffusione, inibizione dell'agglutinazione dell'eme e neutralizzazione. Gli anticorpi contro gli altri determinanti non hanno mostrato alcuna reattività crociata sierologica significativa tra i virus Hong Kong/68 e Memphis/72. Pertanto , è chiaro che nel processo di anti-
A causa della deriva genetica, il virus dell’influenza di Hong Kong ha subito cambiamenti significativi in uno dei suoi determinanti “specifici”. Dati provenienti da Laver et al. (1974) (suggeriscono che diversi determinanti antigenici siano localizzati nella stessa subunità HA e che le particelle virali non possiedano una miscela di subunità antigenicamente distinte.
E. LOCALIZZAZIONE DELL'ANTIGENE DELLA CELLULA OSPITE
Sebbene le prime descrizioni dell'antigene della cellula ospite nel virus dell'influenza "(Knight, 1944, 1946)" siano state accolte con un certo scetticismo, la loro esistenza è ormai saldamente stabilita1. La presenza di tali antigeni è stata rilevata mediante numerosi metodi sierologici, comprese reazioni di precipitazione (Knight, 1944), immunodiffusione (Howe et al., 1967), fissazione del complemento (Smith et al., 1955), inibizione dell'emoglutinazione (Knight, 1944; Harboe et al., 1961; Harboe, 1963a) e il metodo per bloccare l'inibizione dell'emoagglutinazione (Harboe, 1963b; Laver e Webster, 1966). L'antigene della cellula ospite è costituito principalmente da carboidrati ed è legato in modo jovalente agli iolipeptidi delle subunità HA e NA. Non sono stati trovati i legami dell'antigene ospite (e dei carboidrati) con le proteine interne della particella virale.
Una delle caratteristiche misteriose dell'antigene ospite dei virus influenzali è che viene rilevato nei virus cresciuti nella cavità allantoidea di embrioni di pollo o tacchino (Harboe, 1963a), ma non nei virus cresciuti, ad esempio, nella cavità allantoidea di anatra embrioni, nei polmoni di topi o in varie colture cellulari. I virus cresciuti su queste cellule non sono stati affatto inibiti nella reazione di inibizione della teagglutinazione da parte degli antisieri ottenuti contro estratti di cellule ospiti non infette. Ciò è probabilmente dovuto al fatto che il virus è cresciuto in queste cellule "contengono carboidrati" della cellula ospite, ma per qualche motivo "non hanno proprietà antigeniche, oppure gli anticorpi diretti contro di loro non inibiscono l'agglutinazione dell'eme".
E. RUOLO DELL'ANTIGENE DELLA CELLULA OSPITE
La componente dei carboidrati può svolgere un ruolo molto importante nell'assemblaggio dell'involucro virale. Le subunità isolate NA ■ e HA si aggregano in assenza di SDS. Ciò suggerisce che queste subunità hanno sia estremità idrofobiche che idrofile (Laver e Valentine, 1969) e, possibilmente, la componente carboidratica della cellula ospite e determina l'idrofobicità di un'estremità delle eunità HA e NA.
G. VARIABILITÀ ANTIGENICA DELLE SUBUNITÀ
RILEVATI EMAGLUTININA E NEURAMINIDASI
ANTISIERO MONOSPECIFICO
Fino a "recentemente si credeva che l'antigene V, o l'involucro delle particelle del virus dell'influenza," fosse qualcosa di indivisibile, ma non è così. È ormai noto che l'antigene V è composto da HA, NA e dall'antigene virale della cellula ospite. In nessuno dei lavori pubblicati in precedenza, ma le relazioni antigeniche tra i virus dell'influenza lo sono<не принималось во внимание, <в результате чего уровни реакций перекреста ■между данными вирусами зависели от используемых тестов. Так, широко используемая штаммоспецифическая реакция связывания комплемента выявляла перекрестные реакции окзк между нейраминидазными, так и между гемагглютипи-рующими антигенами, :в то время как реакция перекреста между нейраминидазным"и антигенами может выявляться также и в РТГА. Это происходит потому, что в интактном вирусе может возникать «стерическая нейтрализация» нейр-аминидазной активности антителами к гемагглютинину и наоборот (Laver, Kilbourne, 1966; Schulman, Kilbourne, 1969; Easterday et al., 1969; Webster, Darlington, 1969).
La deriva antigenica dei singoli antigeni del virus influenzale può essere studiata separando questi antigeni dalla particella virale (Webster e Darlington, 1969) o "separando geneticamente questi antigeni" (Kilbourne et al., 1967). antigeni "è possibile condurre studi sierologici dettagliati sulla deriva antigenica dei singoli antigeni del virus dell'influenza.
V. MECCANISMO DELLA DERIVA ANTIGENICA
(ANTIGENICO MINORE
MODIFICA)
A. INTRODUZIONE
Le due distinte manifestazioni di variazione antigenica osservate tra i virus dell'influenza A, vale a dire l'improvvisa comparsa di nuovi sottotipi antigenici e la graduale deriva all'interno di un sottotipo, probabilmente non sono correlate tra loro.
È generalmente accettato che la deriva - "la sostituzione successiva dei virus dell'influenza A con ceppi antigenicamente nuovi - sia il risultato di
stato dell'interazione tra variabilità mutazionale del virus e selezione immunologica
L'importanza di questo meccanismo di selezione è confermata dalla produzione sperimentale di varianti antigeniche propagando virus influenzali in presenza di piccole quantità di antisazorotai (Burnet e Lind, 1949; Archetti e Horsfall, 1950; Isaacs e Edney, 1950; Edney, 1957; Laver e Webster, 1968) o in animali parzialmente immuni (Gerber et al.,
1955, 1956; Magill, 1955; Hamre et al., 1958). epidemiologico
Queste osservazioni sono anche coerenti con tale meccanismo, che
che offre una spiegazione ragionevole per la scomparsa della bocca
ceppi in decomposizione della popolazione umana.
Sono state avanzate diverse ipotesi per spiegare il meccanismo della deriva antigenica. Uno di questi (Francis, 1952, 1955, 1960; Jensen et al., 1956; Jensen, 1957) suggerisce che la superficie del virus influenzale sia costituita da un mosaico di antigeni appartenenti a tutti i ceppi di un dato tipo, ma presenti nei singoli ceppi antigenici in proporzioni diverse o in luoghi diversi. La variabilità antigenica deve essere dovuta allo spostamento di questi antigeni sull'involucro virale dalla posizione sporgente alla "posizione latente".Secondo un'altra ipotesi (Hilleman, 1952; Magil, Jotz, 1952; Andrewes,
1956, 1957; Takatsy, Furesz, 1957), antigeni gradualmente
muoversi nel corso del cambiamento. Entrambe queste ipotesi richiedono
l’esistenza di un numero relativamente elevato di antigeni
ma diverse molecole proteiche sulla superficie del
Jensen et al. (1956) scoprirono che in ciascuno dei numerosi ceppi della vasta collezione di virus dell'influenza A disponibili per la ricerca nel 1953, il numero di antigeni presenti in diverse (quantità e (o) luoghi) raggiungeva 18. Estendendo questi dati a molte nuove varianti scoperto da allora dovrebbe presumibilmente portare a "suggerire un numero ancora maggiore di antigeni in ciascun virus, soprattutto se accettato, e presumibilmente
mu, è logico che i ceppi isolati da esseri umani, maiali, cavalli e uccelli facciano parte dello stesso complesso.
L’esistenza di un “numero così elevato di singole molecole proteiche nei virus dell’influenza non può essere collegata alla capacità di codifica dell’RNA virale (Laver, 1964). Fazekas de St. Groth, Webster, 1963, 1964) e biochimica (Laver, 1964). i dati sono più coerenti con la presenza di un numero molto limitato di molecole proteiche antigenicamente distinte sull'involucro virale.
Sulla base di recenti esperimenti, si suggerisce che la deriva antigenica sia il risultato della selezione di una popolazione immune di particelle virali mutanti con “determinanti antigenici alterati, e quindi con vantaggi di crescita in presenza di anticorpi (Tabella 26). “ha dimostrato che ci sono cambiamenti nella sequenza degli aminoacidi nei polipeptidi delle unità emoagglutinanti di mutanti antigenici isolati mediante selezione di anticorpi nel sistema in vitro (Laver, Webster, 1968) (Fig. 38).
Le mappe peptidiche hanno rivelato che durante la deriva antigenica naturale si verificano anche cambiamenti nella sequenza aminoacidica sia delle catene polipeptidiche leggere che di quelle pesanti (39).
Questi risultati suggeriscono che la variazione antigenica tra i virus influenzali è dovuta ad alterazioni nella sequenza aminoacidica delle loro proteine antigeniche. Sebbene alcuni cambiamenti nella sequenza possano essere casuali, con effetti scarsi o nulli sui determinanti antigenici, è probabile che alcuni di questi cambiamenti influenzino i determinanti antigenici.
subunità HA, rendendole meno capaci di "adattarsi" strettamente alle corrispondenti molecole anticorpali. Tuttavia, l’esperimento non dimostra se questi cambiamenti esistano proprio nei determinanti antigenici delle proteine virali o in altre regioni della molecola.
I virus dell'influenza mostrano reazioni incrociate asimmetriche in RTGA. Fazekas de St.-Groth (1970) denominò i virus,
che si comportano in modo simile, i ceppi "senior" e "junior". Inoltre, egli "suggerì (Fazekas de St. Groth, 1970) che nel processo di deriva antigenica naturale, i virus influenzali "più vecchi" sostituissero i ceppi "più giovani". Quest'ultima ipotesi è "confermata solo da pochissimi dati".
B. È POSSIBILE PREVEDERE LA DIREZIONE DELLA DERIVA?
La capacità del virus dell’influenza di subire cambiamenti antigenici rimane un grosso problema. Ogni nuova variante deve essere isolata e identificata prima che possa iniziare la produzione del vaccino, quindi ogni nuova variante ha il potenziale di infettare un gran numero di persone prima di poter essere controllata dai vaccini.
A questo proposito, sono stati fatti tentativi per prevedere la deriva antigenica in laboratorio, ma non del tutto riusciti. Hannoun e Fazekas de St. Groth presso l'Istituto Pasteur di Parigi ha trasmesso il ceppo A/Hong Kong/68 (H3N2) in presenza di piccole concentrazioni di antisiero. , come suggerito dagli autori, rappresentava il punto finale dell'evoluzione all'interno del sierotipo H3, ed era quindi un virus di (che poteva essere prevista dopo il 1970. Questa ipotesi fu supportata dalla scoperta che la variante londinese del virus influenzale, isolata per la prima volta, nel 1972 (A/England/42/72), antigenicamente molto simile al primo mutante che Hannoun e Fazekas de St. Groth avevano ottenuto nel loro laboratorio un anno prima (Fazekas de St. Groth, Hannoun, 1973).
Si sperava che i vaccini derivati dalla variante finale "più vecchia" fornissero protezione contro tutte le varianti H3 che potevano comparire negli esseri umani. Tuttavia, i virus (influenza A, successivamente isolati nel 1973 e 1974 (ad esempio, A/Port Chalmers/1 /73), che erano antigenicamente distinti dal ceppo A/England/42/72, erano anche significativamente diversi dalla variante prodotta artificialmente, suggerendo che in condizioni naturali la deriva non procedeva nella direzione prevista.
In ogni caso, la variante generata in laboratorio dai passaggi in presenza di antisieri è andata alla deriva solo in HA, mentre le varianti native sono andate alla deriva sia in HA che in NA. Pertanto, questo tentativo di preparare un vaccino “futuro”, lo-tidymoma, non ha avuto successo.
C. POSSIBILITÀ DI CAMBIAMENTI SIGNIFICATIVI IN ALCUNI DETERMINANTI ANTIGENICI DURANTE LA DERIVA ANTIGENICA
Nella Sezione IV è stato dimostrato che le subunità HA del virus dell'influenza di Hong Kong possiedono almeno due tipi di determinanti antigenici e che nel processo di evoluzione, per deriva antigenica dell'influenza di Hong Kong, si è formato un virus (A/Memphis /102/72) in cui uno di questi determinanti antigenici
thermianant ha subito un cambiamento antigenico significativo (paragonabile in grandezza a uno spostamento antigenico), mentre l'altro "è andato alla deriva" (om. 37). Per questi due virus abbiamo chiamato il primo di questi determinanti "specifico" e il secondo "generale".<(Laver et al., 1974).
Gli anticorpi contro il determinante "specifico" non rivelano alcuna reazione crociata tra questi due virus nei test di immunodiffusione, RTGA o neutralizzazione dell'infettività. Gli altri determinanti erano comuni a entrambi i virus (sebbene vi fosse una certa deriva antigenica in questo determinante) e sono state riscontrate reazioni crociate tra i virus Hong Kong/68 e Memphis/72 dovute agli stessi anticorpi contro questo virus "comune" determinante(i).
Vari animali IB di vario grado rispondono a determinati determinanti quando immunizzati con la stessa preparazione di subunità HA isolate. Queste variazioni nella risposta immunologica possono spiegare la variabilità nelle reazioni crossover talvolta osservate tra due virus quando testati con sieri diversi.
Nonostante un significativo cambiamento antigenico in IB ONE
da determinanti, mappe peptidiche di poli pesanti e leggeri
peptidi (HA1 e HA2) delle subunità HA dei virus Hong Kong/68
■ e Memphis/72 erano in gran parte simili (vedi
39), in base al quale si presuppone che nel processo
Evoluzione ed educazione del virus di Hong Kong. meme variante
fis/72 nella sequenza aminoacidica di questi polipeptidi
si verificano solo cambiamenti relativamente piccoli. tradimento
i cambiamenti si verificano nelle mappe peptidiche pesanti (HA1),
e catene polipeptidiche leggere (HA2); alcuni di quelli
possono essere cambiamenti casuali, altri sono selezionati
sotto la pressione degli anticorpi.
D. CAMBIAMENTI ANTIGENICI NELLA NEURAMINIDASI
È stata osservata una deriva antigenica nell’antigene della neuraminidasi
virus non influenzali sia di tipo A che di tipo B (Paniker, 1968;
Schulman e Kilbourne 1969; Schild et al., 1973; Curry et al.
1974). Probabilmente avviene per selezione (sotto pressione).
anticorpi) mutanti che hanno una sequenza alterata
valore degli aminoacidi nei polipeptidi della subunità NA
(Kendal e Kiley, 1973). Finora non è stato possibile realizzarlo
deriva genetica in laboratorio. Gli anticorpi anti-NA non sono neutri
infettività del virus zuyut; quindi è probabile che
la variabilità di questo antigene è meno importante per la sopravvivenza
virus rispetto alla variabilità dell'HA (Seto e Rott, 1966; Dowdle et al.,
E. VARIABILITÀ ANTIGENICA DEI VIRUS INFLUENZALI DI TIPO B
La deriva antigenica si verifica tra i virus dell'influenza di tipo B all'incirca nella stessa misura che tra i virus dell'influenza di tipo A, ma i cambiamenti antigenici significativi osservati in essi non sono stati riscontrati tra i ceppi dell'influenza di tipo B. Deriva antigenica (include cambiamenti in entrambi gli antigeni - HA e NA (Chakraverty, 1972a, b; Curry et al., 1974) Il meccanismo della variabilità antigenica nei ceppi B è probabilmente simile a quello dei virus influenzali di tipo A, ma “non sono stati condotti studi biochimici.
E. CAMBIAMENTI ANTIGENICI NEI VIRUS DELL'INFLUENZA AVIARIA E ANIMALE
I cambiamenti antigenici tra i virus influenzali che infettano i mammiferi inferiori e gli uccelli non sono stati sufficientemente studiati e su di essi sono disponibili poche informazioni. Sulla base di alcuni risultati si può tuttavia supporre che la deriva antigenica si verifichi anche nei ceppi (influenza dei mammiferi e aviaria), ma in misura minore rispetto ai virus influenzali che infettano l’uomo.
La deriva antigenica è stata osservata nei virus dell'influenza suina ed equina (eroetipo 2) (Meier-Ewert et al., 1970; Pereira et al., 1972), ma non esistono dati sulla deriva antigenica nei virus dell'influenza aviaria. Forse la ragione di ciò è che gli uccelli, soprattutto quelli domestici, vivono meno di una persona o di un cavallo. Nell'uomo, ogni versione successiva del virus dell'influenza A sostituisce rapidamente e completamente la precedente, ma tra gli animali e gli uccelli spesso circolano contemporaneamente virus diversi tra loro.
VI. MECCANISMO DEGLI SPOSTAMENTI ANTIGENICI (CAMBIAMENTI ANTIGENICI SIGNIFICATIVI)
Nel corso di cambiamenti antigenici di altro tipo, le subunità superficiali del virus subiscono significativi cambiamenti antigenici. Con questi cambiamenti significativi si verificano cambiamenti improvvisi e completi in uno o entrambi gli antigeni di superficie, così che nascono "nuovi" virus verso i quali non esiste immunità nella popolazione: sono i virus che causano le pandemie influenzali.
I virus H2N2 dell’influenza umana rappresentano un sistema naturale per studiare gli aspetti molecolari di significativi spostamenti antigenici. I virus comparsi nell’uomo nel 1957 possedevano subunità HA e NA, che erano completamente diverse dal punto di vista antigenico da quelle dei ceppi H1N1. Virus H2N2
subì una deriva antigenica fino al 1968, quando apparve un “nuovo” ceppo pandemico a Hong Kong. I virus .A2 (H2N2) e il ceppo di Hong Kong (H3N2) sono originari della Cina. Il virus di Hong Kong aveva la stessa NA dei precedenti virus A2, ma HA antigenicamente diverso (Coleman et al., 1968; Schulman e Kilbourne, 1969). Ciò è stato chiaramente dimostrato utilizzando antisieri specifici per subunità HA isolate di rappresentanti di virus dell'influenza A2 (cresciuti in embrioni di pollo. Questi sieri monospecifici sono stati utilizzati in RTGA con virus cresciuti in embrioni di anatra (Webster, Laver, 1972), eliminando i problemi di stericicità soppressione dell'emoagglutinazione da parte degli anticorpi anti-NA e dell'antigene della cellula ospite, che può verificarsi quando si utilizzano sieri per virus interi.
I risultati di questi test (Tabella 27) hanno evidenziato che la corrispondenza sierologica tra gli antigeni dell'emoagglutinina dei “vecchi” ceppi A2/Asia isolati tra il 1957 ed il
1968 e non c’era il virus di Hong Kong (1968). Tra i tre ceppi di Hong Kong isolati durante i primi 3 anni della pandemia influenzale, vi è stata una variazione minima o nulla (Webster e Laver, 1972). Da dove provenivano allora le “nuove” subunità HA del virus dell’influenza di Hong Kong? Sembrano esserci due possibili ragioni per la formazione di "nuove" subunità emaglutinanti: o sono mutate da un virus influenzale umano preesistente, oppure provengono da qualche altra fonte, come virus dell'influenza animale o aviaria.
Una singola mutazione del "vecchio" virus dell'influenza A2/Asia potrebbe far piegare le catene polipeptidiche delle subunità HA in modo tale da formarne di completamente nuove.
determinanti antigenici. Se le subunità HA del virus dell'influenza di Hong Kong fossero state ottenute mediante una tale mutazione da precedenti virus A2, allora la sequenza di aminoacidi nei polipeptidi delle subunità "vecchie" e "nuove" dovrebbe essere vicina. In precedenza, è stato descritto uno spostamento completo in uno dei determinanti antigenici delle subunità HA, che si è verificato nel processo di deriva antigenica, e questo "spostamento" in uno dei determinanti non è accompagnato da alcun "cambiamento generale significativo" dopo "N ” Aminoacidi Osti nei polipeptidi HA. Se però le "nuove" subunità non nascono attraverso mutazione e selezione, ma provengono dal virus dell'influenza animale, allora le loro catene polipeptidiche possono differire significativamente nella sequenza aminoacidica dalle catene lolipaptidiche dei "vecchi" virus A2/Asia.
Le subunità HA sono state isolate da tre ceppi influenzali A2/Asia ottenuti nel 1968 prima dell'inizio della pandemia influenzale di Hong Kong e da tre ceppi del virus influenzale di Hong Kong isolati in varie parti del mondo nel 1968, 1970 e 1971. A causa della deriva antigenica, i tre virus isolati alla fine del periodo A2/Asia mostrano differenze antigeniche significative. D’altra parte, i tre ceppi di Hong Kong isolati durante i primi 3 anni della nuova pandemia non mostrano quasi alcuna variabilità antigenica.
Le subunità HA isolate da ciascuno di questi sei ceppi virali sono state dissociate mediante trattamento con guanidina cloridrato e ditiotreitolo e i loro bersagli leggeri e pesanti sono stati separati mediante centrifugazione (Laver, 1971). Ciascuno dei bersagli polipeptidici isolati è stato trypsinizzato e i peptidi triltici sono stati mappati. Le mappe hanno mostrato che le catene polipeptidiche delle subunità emoagglutinanti dei "vecchi" virus A2 isolati nel 1968 differivano significativamente nella composizione aminoacidica dalle catene lolileptidiche dei "nuovi" ceppi di Hong Kong! (40 e 41). Allo stesso tempo, si è ipotizzato che i "nuovi" polipeptidi non siano (ottenuti per mutazione da quelli "vecchi" (Laver, Webster, 1972).,
Una spiegazione per questo risultato è l'ipotesi di una mutazione frameshift che risulta in polipeptidi con sequenze di aminoacidi completamente diverse. Tuttavia, sembra improbabile che una tale mutazione, se si verificasse, darebbe come risultato polipeptidi in grado di formare un'unità emoagglutinante funzionale. In secondo luogo, possono verificarsi mutazioni che colpiscono principalmente gli amminoacidi basici, così che le mappe dei peptidi trischici potrebbero differire significativamente senza alcun cambiamento significativo nella sequenza amminoacidica complessiva nei lolileltidi.
Sono state ora ottenute prove che indicano alcuni virus influenzali animali come possibili precursori del ceppo Hong Kong del virus influenzale umano: due ceppi influenzali, A/horse/Miami/1/63 (Heq2Neq2) e A/duck/Ukraine /1/63. (Hav7Neq2) isolati da cavalli e anatre nel 1963, cioè 5 anni prima della comparsa dell'influenza di Hong Kong negli esseri umani, hanno dimostrato di essere antigenicamente vicini al ceppo di Hong Kong (Coleman et al., 1968; Masurel, 1968; Kaplan, 1969 ; Zakstelskaja et al., 1969; Tumova e Easterday, 1969; Kasel et al., 1969).
Le subunità HA dei virus del cavallo e dell'anatra hanno subito una reazione crociata con le subunità del ceppo Hong Kong del virus dell'influenza umana A/Hong Kong/1/68 (H3N2) in RTGA e nel test di immunodiffusione. Inoltre, le mappe peptidiche delle catene olipeptidiche leggere delle subunità tempapplutinanti dei virus equini, utk e umani erano quasi identiche, suggerendo che le catene leggere di questi tre ceppi avevano sequenze di amminoacidi quasi identiche (Laver e Webster, 1973) . Ciò è chiaramente visibile da 42, dove le mappe peptidiche delle catene leggere lolipeptidiche delle subunità HA del virus dell'influenza di Hong Kong e dei ceppi anatra//Ucraina e cavallo/Miami (2° sierotipo) sono quasi identiche e differiscono significativamente dal lolipaptide leggero mappa della catena del "vecchio" virus Asia/68.
Questi risultati suggeriscono che i virus equini e aviari e il virus umano di Hong Kong potrebbero essersi originati dalla ricombinazione genetica di un antenato comune e suggeriscono un meccanismo alternativo per spiegare l’origine del virus dell’influenza di Hong Kong rispetto alla mutazione.
Studi recenti hanno dimostrato che i sieri degli uccelli selvatici contengono anticorpi diretti contro gli antigeni presenti nei virus influenzali che infettano gli esseri umani (Organizzazione Mondiale della Sanità, 1972). Inoltre, virus influenzali sono stati recentemente isolati da uccelli selvatici lontani dalle colonie umane, suggerendo che l'influenza è stata un'infezione naturale degli uccelli per molte migliaia di anni (Downie e Laver, 1973).
Rasmussen (1964) fu il primo a suggerire che i virus influenzali pandemici derivassero da virus animali come risultato di un processo di ricombinazione. Successivamente, Tumova e Pereira (1965), Kilbourne (1968) e Easterday et al. (1969) ricevettero un ibrido antigenico virus mediante ricombinazione genetica in vitro tra virus dell'influenza umana e ceppi di virus dell'influenza animale e aviaria Recentemente, Webster et al (1971, 1973) hanno simulato l'emergenza di un nuovo ceppo pandemico di virus dell'influenza in esperimenti in vivo (questi saranno descritti più avanti).
VII. ULTERIORI PROVE,
CONFERMARE IL RUOLO DEL PROCESSO
RICOMBINAZIONI ALL'ORIGINE DEL NUOVO
VIRUS INFLUENZALI PANDEMICI
I dati biochimici presentati non supportano la teoria secondo cui l’antigene HA del virus di Hong Kong fosse dovuto a una singola mutazione di precedenti ceppi asiatici. Ci si può quindi chiedere se esistano dati ottenuti da studi di laboratorio in vitro o in vivo, o soprattutto da osservazioni.
in vivo, il che sosterrebbe la teoria secondo cui i nuovi virus nascono dalla ricombinazione.
A. DATI IN VITRO
Ibridi antigenici (ricombinanti) di molti virus dell'influenza A di mammiferi e uccelli sono stati isolati dopo infezione mista di embrioni di pollo o colture cellulari con vari virus dell'influenza A (Tumova, Pereira, 1965; Kilbourne, Schulman, 1965; Kilbourne et al., 1967 ; Kilbourne, 1968; Easterday et al., 1969). Questi studi sono riassunti nelle revisioni di Kilbourne et al. (1967) e Webster e Laver (1971). È ora evidente che i virus dell’influenza A ricombinanti con antigeni di superficie misti (Webster, 1970b) o potenze di crescita (Kilbourne e Murphy, 1960; Kilbourne et al., 1971) o altre caratteristiche biologiche (McCahon e Schild, 1971) possono essere trasformati in ordine.
In questo modo è possibile creare "nuovi" virus influenzali in laboratorio, ma solo recentemente è stata ottenuta la prova che la ricombinazione e la selezione di "nuovi" virus possono avvenire anche in vivo in condizioni vicine alla natura (Webster et al., 1971). .
B. DATI IN VIVO
1. Dimostrazione della ricombinazione nel sistema interno
Kilbourne (1970) notò che la ricombinazione tra due diversi ceppi di virus influenzali di tipo A non è stata ancora dimostrata in animali intatti, nemmeno in condizioni sperimentali. Per verificare se può verificarsi una ricombinazione in vivo, sono stati utilizzati due sistemi: nel primo, solo uno dei virus parentali si è moltiplicato nell'animale ospite, mentre nel secondo, entrambi i virus parentali si sono moltiplicati quando almeno uno dei virus è stato propagato, gli animali sono stati macellati. Le sospensioni polmonari sono state esaminate direttamente nelle membrane dell'allantoide per la presenza di virus ricombinanti (ibridi antigenici);
Nel primo sistema, ai suini è stata iniettata una miscela di virus dell'influenza suina - VG"C (A / maiale / Wisconsin / 1/67) e virus del cimurro aviario di tipo A - HPV (Danimarca / 27) (43). non dare origine a un virus infettivo dopo l'iniezione nei suini Le sospensioni polmonari raccolte attraverso
Nel secondo sistema, in cui entrambi i virus si replicavano, i tacchini erano infettati dall'HPV e dal virus dell'influenza del tacchino - CHI (A / I "ndyuk / Massachusetts / 3740/65). Come (è stato indicato, gli ibridi antigenici con CHI (G) erano isolato nel sistema di membrane allantoioniche -VChP (N) (Hav6Neql) e VChP (N)-VGI(1H) (Havl-N2).
Ci sono due possibili obiezioni al fatto che la ricombinazione descritta avviene in vivo. Innanzitutto, la ricombinazione può avvenire nel sistema di coltura cellulare utilizzato per la selezione del virus; in secondo luogo, non è noto se questi ibridi antigenici fossero geneticamente stabili e non fossero semplicemente particelle fenotipicamente miste.
La prima obiezione può essere ignorata, poiché la selezione dei virus antigenicamente ibridi è stata effettuata direttamente a concentrazioni molto elevate di anticorpi, che dovrebbero neutralizzare i virus parentali. Per ottenere prove più rigorose che i virus ibridi anti-gestazionali non insorgono durante l'isolamento al di fuori di un ospite infetto, è stato necessario ottenere placche di virus a raccolta mista da una sospensione di virus aggregati al fine di isolare le singole placche e caratterizzare i campioni di virus ottenuti da singole placche 25% Le placche isolate dalla sospensione polmonare di tacchini infettati mista con HPV+HIV erano virus ricombinanti.Nessun virus ibrido è stato isolato da colture di controllo infettate con una miscela artificiale di entrambi i virus parentali.
La stabilità genetica dei virus ricombinanti è stata stabilita "somministrando virus ibridi aiatigenici clonati ad animali ospiti" (Webster et al., 1971). Così, ad esempio, i polli infettati da un virus ibrido antigenico portatore di HPV(N)-HIV(N), (HavliN2), sono morti a causa di un'infezione transitoria e il virus, nuovamente isolato dai polmoni di questi uccelli dopo 3 giorni, è stato una coltura pura del virus, che possiede B4n(H)-(Havl-N2). Anche altri virus antigene-tibridi sono stati reisolati da animali e si sono rivelati geneticamente stabili.
2. Trasmissione naturale del virus e selezione
Gli studi descritti hanno dimostrato che due diversi ceppi del virus dell'influenza A possono ricombinarsi in vivo se vengono somministrati contemporaneamente allo stesso animale.
La somministrazione simultanea di grandi dosi di due diversi virus dell'influenza A agli animali, tuttavia, è un sistema artificiale che probabilmente non esiste in natura. Per esplorare se la ricombinazione potesse avvenire in condizioni più naturali, è stato permesso a due diversi virus dell'influenza A di diffondersi simultaneamente in uno stormo di uccelli sensibili al virus come segue: , sono stati alloggiati con uno stormo di 30 tacchini sensibili custoditi. 2 giorni dopo, altri due tacchini infetti da HPV sono stati introdotti nello stesso gregge. 2 tacchini per gregge sono stati macellati ogni giorno e i campioni polmonari sono stati esaminati per la presenza di ciascuno dei virus ibridi parentali e ayatigeni nelle guaine dell'allantoide, e isolando le placche e identificando i virus (Webster et al., 1971) L'HPV si diffuse rapidamente tra gli uccelli protetti e fu rilevato 3 giorni dopo l'introduzione; , 1973. I virus ibridi antigenici portatori di HPV(H)-CHI(N) furono rilevati il 10° giorno dopo l'esposizione iniziale e costituirono il parte principale della popolazione virale nella sospensione di uccelli modellati di uno degli uccelli studiati. Esperimenti di questo tipo furono effettuati tre volte, e in ciascun esperimento furono isolati ibridi antigenici al 9-10° giorno; questi ibridi possedevano HSP(H)-VHI(N), ma non sono stati isolati β-ibridi inversi. Il virus ricombinante 1 isolato probabilmente aveva un vantaggio di crescita rispetto ai virus parentali; in ogni esperimento, questo virus è stato isolato come dominante da uno o più uccelli. Affinché un "nuovo" ceppo di virus influenzale possa apparire in natura attraverso questo tipo di ricombinazione e diventare un ceppo epidemico, il "nuovo" virus deve avere qualche vantaggio selettivo. Questo vantaggio selettivo può derivare dal possesso di antigeni verso i quali la maggior parte della popolazione non è immune, ma il virus deve anche essere in grado di passare agli ospiti sensibili. Entrambe le possibilità sono state esplorate negli esperimenti presentati. Così, ad esempio, quando il virus ricombinante era presente, nel gregge venivano introdotti uccelli normali, “ma i ricombinanti non riuscivano a diventare il ceppo dominante e tutti gli uccelli normali in contatto morivano a causa dell’infezione con l’HPV parentale.
3. Selezione e trasmissione del "nuovo" virus influenzale nel sistema in vivo
Se assumiamo che nuovi ceppi di virus influenzali di tipo A possano formarsi nei generi mediante ricombinazione, è importante mostrare come questi virus possono essere selezionati e diventare ceppi dominanti o nuovi epidemici. Un possibile meccanismo di selezione potrebbe essere che avvengano ricombinazione e selezione<в иммунных животных. Опыты Webster и Campbell (1974) показали, что рекомбинация и селекция «нового» штамма -вируса гриппа может происходить у индеек с низкими уровнями антител к НА одного родительского вируса и к NA другого родительского вируса (45).
I tacchini con bassi livelli di anticorpi contro HAI HA (A/incj/Wisconsin/bb) e contro NA NA sono stati sottoposti ad un'infezione mista di TMH e CHI. Sia i virus parentali che il virus influenzale ricombinante che trasportava HPV(H)-HIV(N) erano presenti nella trachea dei tacchini 1-2 giorni dopo l'infezione mista. Il sesto giorno dopo l'infezione mista era presente solo il virus ricombinante B4n(H)iBrH(N). Il 7° giorno, "dopo un'infezione mista, i tacchini morirono e furono isolati solo virus influenzali ricombinanti con HPV (H)-HI (N). Tutti i virus furono isolati alle diluizioni massime dalle membrane dell'allantoide o dagli embrioni, e nessun anticorpo sono stati utilizzati per la selezione dei virus ricombinanti. Tutti gli uccelli non immuni introdotti nello stormo il 5° giorno sono morti a causa di un'infezione transitoria e sono stati isolati solo da essi (virus influenzali ricombinanti.
Dopo un'infezione mista di tacchini non immuni o iperimmuni, il virus dell'influenza ricombinante non si è stabilizzato. Pertanto, l’infezione mista di uccelli che hanno bassi livelli di anticorpi contro l’HA di un virus e l’NA dell’altro fornisce le condizioni ideali per la selezione dei ricombinanti. Dopo l'infezione, entrambi i virus parentali si replicano in misura limitata, stimolando così il sistema immunitario stesso, che elimina i virus parentali. In questo modo è possibile selezionare i ricombinanti e, purché abbiano le necessarie proprietà di virulenza e la capacità di trasmettersi ad altri individui, questi ricombinanti possono causare malattie epidemiche.
Questi esperimenti mostrano che in condizioni relativamente naturali avviene la ricombinazione tra diversi virus dell'influenza A e che i nuovi virus possono avere un vantaggio selettivo su entrambi i ceppi parentali. Questi esperimenti non dimostrano che tutti i nuovi virus influenzali dei mammiferi inferiori, degli uccelli e degli esseri umani si originano attraverso un tale meccanismo, ma stabiliscono che questo meccanismo è uno dei modi "attraverso il quale compaiono nuovi" virus.
B. DATI SULLA RICOMBINAZIONE DEI VIRUS DELL'INFLUENZA IN NATURA
Questi esperimenti non lasciano dubbi sul fatto che nuovi ceppi del virus dell'influenza possano essere ottenuti in vitro e in vivo e suggeriscono che processi simili possano avvenire in natura. Esiste, tuttavia, qualche prova che la ricombinazione in? Questa prova è circostanziale e include: 1) corrispondenze antigeniche tra virus influenzali isolati dall'uomo e da mammiferi inferiori e uccelli; 2) l'assenza di una gamma ospite ristretta di virus influenzali.
1. Relazioni antigeniche tra virus dell'influenza umana, mammiferi inferiori e uccelli
La prova che suggerisce che la ricombinazione tra virus influenzali umani e animali è possibile in natura è la prova che alcuni virus influenzali umani, dei mammiferi inferiori e aviari hanno antigeni di superficie simili, se non uguali.
a) Relazioni antigeniche mediate da NA. La NA di alcuni virus dell'influenza aviaria è antigenicamente molto vicina a quella dei primi virus dell'influenza umana. Ad esempio, il virus dell’anatra (A/snake/Germany/1868/68) ha una NA simile a quella dei virus umani NOSH e H1N1 (Schild e Newman, 1969). I virus dell'influenza isolati dai suini trasportano anche l'antigene NA, che è correlato all'antigene NA dei virus umani.
H0N1 (Meier-Ewert et al., 1970). Allo stesso modo, l’HGI (A/incj/MA/65) ha una NA simile, se non identica, a quella dei virus dell’influenza umana. H2N2 (Pereira et al., 1967; Webster e Pereira, 1968; Schild e Newman, 1969). Altri virus dell'influenza aviaria hanno antigeni NA ■ strettamente correlati all'NA dei virus dell'influenza equina di tipo 1 e 2 (Webster e Pereira, 1968; Organizzazione Mondiale della Sanità, 1971). Pertanto, la NA del VChP (A/ VChP/ Holland/27) è simile alla NA del virus dell'influenza equina di tipo 1 (A/ losha, d/ Prague/1/57). Queste relazioni interspecie sono utilizzate nella nomenclatura rivista dei virus dell'influenza (Organizzazione Mondiale della Sanità, 1971). Esistono otto diversi sottotipi di virus dell'influenza aviaria e quattro di questi hanno antigeni NA correlati agli antigeni NA dei virus dell'influenza umana ed equina.
b) Corrispondenze antigeniche dovute all'antigene HA. Sono stati trovati meno esempi di questo tipo con virus influenzali isolati da mammiferi inferiori e uccelli che avrebbero antigeni HA correlati agli antigeni HA dei virus umani. La corrispondenza tra i virus HA di Hong Kong, anatra/Ucraina/63 e cavallo/tipo 2 è stata discussa in precedenza nella famiglia influenzale asiatica. Pertanto, con l'isolamento di più virus, il numero di corrispondenze rilevate aumenta.
2. Circolo degli ospiti
I virus dell'influenza A non hanno sempre una natura strettamente definita
specificità dell'ospite (vedi Easterday e Tumova, 1971;
Webster, 1972). Ad esempio, il virus dell’influenza di Hong Kong lo è stato
isolato da maiali, cani, gatti, babbuini e gibboni. Virus
Recentemente sono stati isolati anche i virus dell’influenza A/Hong Kong (H3N2).
da polli e vitelli (Zhezmer, 1973). Questi virus sono sperimentali
ma furono trasferiti a vitelli e polli; in tutti i casi
il virus si è replicato nell'ospite da cui è stato isolato
biancheria. Quindi, il virus dell'influenza del vitello ha causato un'infezione respiratoria
vitelli e il virus dell’influenza dei polli si è replicato, ma non lo ha fatto
hanno mostrato segni di malattia nei polli (Schild, Campbell, Web
L'influenza Rus di Hong Kong non è riuscita a replicarsi nei polli.
Nel caso del virus dell’influenza di Hong Kong, è chiaro che questo virus
adattato a causare infezioni naturali
zione da altri proprietari, e così si crearono le condizioni,
quando doppia infezione e genetica
interazioni
D. GENERALIZZAZIONE DEI DATI CONFERMANTI IL PUNTO
OPINIONI SULL'ASPETTO DI NUOVI CEPPI
VIRUS DELL'INFLUENZA PER RICOMBINAZIONE
1. Le pandemie influenzali nell’uomo sono causate solo da un virus.
mi dell'influenza di tipo A, e solo i virus influenzali di questo tipo sono stati
isolato da mammiferi inferiori e uccelli. Virus dell'influenza
il tipo B si ricombina costantemente in vitro, ma in natura può farlo
potrebbe non esserci una tale combinazione di informazioni genetiche
zione, [che consentirebbe “l’insorgere di una pandemia
ceppo del virus dell'influenza di tipo B. Ricombinazione tra il virus
Non sono stati mostrati i tipi di influenza A e B.
2. I dati biochimici presentati in precedenza lo sono
indicano l’improbabile possibilità di
"nuovi" ceppi pandemici del virus dell'influenza no
mezzi di mutazione di precedenti virus influenzali
persona.
3. Nuovi virus influenzali in grado di provocare una pandemia
può sorgere attraverso la ricombinazione e la selezione in determinate condizioni
sperimentare in vivo.
4. Basato sulla corrispondenza antigenica e biochimica
vii tra emalglutinazione e neuraminidasi an
tigeni dei virus influenzali umani, mammiferi inferiori
e gli uccelli suggeriscono che esistano scambi genetici
e nella natura.
Le prove presentate sono circostanziali; prove più dirette potrebbero essere ottenute se si scoprisse che futuri ceppi pandemici hanno antigeni identici agli antigeni già isolati associati ai virus influenzali negli animali domestici o selvatici (vedi anche Capitolo 15).
VIII. FUTURI CAMBIAMENTI ANTIGENICI
VIRUS INFLUENZALI E OPPORTUNITÀ
PREVISIONI DI VARIABILITÀ
E CONTROLLO DELLE MALATTIE
A. POSSIBILI SPIEGAZIONI ALLA NATURA CICLICA DELLA PANDEMIA
Sulla base dello studio degli anticorpi nei sieri delle persone anziane, si può presumere che un virus influenzale simile al virus della trippa di Hong Kong esistesse già in passato tra gli esseri umani e potrebbe aver causato la "pandemia influenzale della fine del 19° secolo ( vedere sezione II).Nei sieri degli anziani sono stati rilevati a basso titolo anche anticorpi contro i virus HA dell'influenza equina di tipo 2 e dell'Asia.
sono stati identificati i tipi 2. Ciò suggerisce che i virus con subunità HA simili ma subunità NA diverse sono responsabili di epidemie passate e attuali. L'evidenza epidemiologica suggerisce che i virus dell'influenza umana pandemica emergono ciclicamente. La mancanza di dati sull'omologia NA rende improbabile che lo stesso "virus dell'influenza di Hong Kong" esiste alla fine del 19° secolo e di nuovo nel 1968. Sembra più probabile che il virus dell'influenza esistente alla fine del 19° secolo possedesse una subunità HA che mostrava qualche somiglianza antigenica con il virus dell'influenza di Hong Kong, ma trasportava un antigene NA completamente diverso. Sul piano sierologico, questo NA è antigenicamente correlato all'influenza equina di tipo 2. Un nuovo ciclo di virus influenzali può verificarsi come risultato dell'emergenza di virus da qualche serbatoio associato agli animali, con o senza ricombinazione, quando l’immunità di gregge “non protegge più da essa la popolazione umana.
Un altro fenomeno associato alla comparsa di nuovi ceppi influenzali è l'apparente scomparsa dei ceppi precedenti. Potrebbe essere dovuto semplicemente alla mancanza di interesse nel raccogliere campioni di virus influenzali che non sono più pericolosi per la maggior parte della società (Fenner, 1968), ma questa spiegazione è improbabile, poiché la pratica ha dimostrato che i virus influenzali umani non coesistono in natura per un certo periodo di tempo. È possibile spiegare la scomparsa di ceppi apparsi come risultato della deriva antigenica per autodistruzione; sierologicamente nuovo virus aumenta il livello degli anticorpi più vecchi, prevenendo così la diffusione del vecchio virus. La scomparsa dei ceppi più vecchi (Fazekas de St. Groth, 1970) di ciascun sottotipo dopo un significativo spostamento antigenico è meno chiara e non ha ancora una spiegazione soddisfacente.
B. OPPORTUNITÀ PER IL FUTURO CONTROLLO DEI CAMBIAMENTI ANTIGENICI NEL VIRUS DELL'INFLUENZA
I dati biologici, biochimici e immunologici presentati sopra forniscono solo prove circostanziali del fatto che cambiamenti antigenici significativi nei virus dell’influenza umana avvengono mediante ricombinazione. Dati più precisi si otterranno se in natura sarà possibile individuare la ricombinazione tra diversi virus influenzali che porti alla comparsa di un nuovo ceppo pandemico. La rarità di un simile evento esclude virtualmente questa possibilità. Un approccio alternativo a questo problema è quello di isolare i virus influenzali dalle popolazioni animali prima del prossimo ceppo pandemico umano, vale a dire
creazione di una "banca" di virus influenzali. Quando apparirà il prossimo ceppo pandemico umano 1ma, questo virus potrà essere confrontato con i virus della "bicicletta" e si potranno ottenere dati sulla sua comparsa. Le popolazioni selvatiche come "fonte di nuovi virus influenzali sono state ampiamente ignorate. Le popolazioni di uccelli del mondo vivono in colonie ad alta densità per periodi più lunghi rispetto ai mammiferi o agli esseri umani. È interessante notare che sono già stati isolati otto diversi sottotipi di virus dell'influenza aviaria, sei dei quali - dal pollame. Pertanto, è logico iniziare la ricerca dei virus dell'influenza in natura nelle grandi colonie di uccelli, soprattutto alla fine della stagione di nidificazione. Tali studi ecologici aiuteranno a stabilire il numero di diversi sottotipi di virus dell'influenza che esistono in natura e potrebbe eventualmente mostrare come stanno emergendo nuovi ceppi. Se esiste solo un numero limitato di virus dell'influenza A, in futuro sarà possibile pensare al controllo di questi virus, che rappresentano un enorme flagello per l'uomo.
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L'influenza A/H1N1 come tipica infezione emergente: caratteristiche generali dei virus influenzali, variabilità, comparsa di nuovi ceppi pandemici
I virus dell'influenza - virus contenenti RNA - appartengono alla famiglia. Orthomyxoviridae e sono suddivisi in virus A, B e C (Tabella 1).
Tabella 1.
Caratteristiche comparative dei virus influenzali
| Criteri | Digitare un | Tipo B | Tipo C |
| Gravità della malattia | ++++ | ++ | + |
| serbatoio naturale | Mangiare | NO | NO |
| pandemie umane | chiamate | Non causa | Non causa |
| Epidemie umane | chiamate | chiamate | Non causa (solo malattie sporadiche) |
| Cambiamenti antigenici | Spostamento, deriva | Alla deriva | Alla deriva |
| Genoma segmentato | SÌ | SÌ | SÌ |
| Sensibilità alla rimantadina | sensibile | Non sensibile | Non sensibile |
| Sensibilità allo zanamivir | sensibile | sensibile | - |
| Glicoproteine di superficie | 2 (HA, NA) | 2 (HA, NA) | 1(HA) |
Il virus dell'influenza ha una forma sferica e una dimensione di 80-120 nm. Il nucleo è rappresentato da una catena di RNA negativo a filamento singolo, costituita da 8 frammenti che codificano per 11 proteine virali.
I virus dell’influenza A sono ampiamente distribuiti in natura e colpiscono sia gli esseri umani che un’ampia gamma di mammiferi e uccelli. I virus dell’influenza di tipo B e C sono stati isolati solo dall’uomo.
Epidemiologicamente significativi sono 2 sottotipi del virus dell'influenza A - H3N2 e H1N1 e del virus dell'influenza di tipo B (A.A. Sominova et al., 1997; O.M. Litvinova et al., 2001). Il risultato di tale cocircolazione è stato lo sviluppo di epidemie influenzali di varia eziologia nella stessa stagione epidemiologica in diversi paesi. L'eterogeneità della popolazione dei virus epidemici aumenta anche a causa della natura divergente della variabilità dei virus influenzali, che porta alla circolazione simultanea di virus appartenenti a diversi rami evolutivi (O.M. Litvinova et al., 2001). In queste condizioni si creano i prerequisiti per l'infezione umana simultanea con diversi agenti patogeni, che porta alla formazione di popolazioni miste e al riassortimento sia tra virus di sottotipi cocircolanti che tra ceppi all'interno dello stesso sottotipo (O.I. Kiselev et al., 2000).
La classificazione dei tipi di virus influenzali si basa sulle differenze antigeniche tra due glicoproteine di superficie: emoagglutinina (HA) e neuraminidasi (NA). Secondo questa classificazione, i virus dell'influenza sono divisi in 3 tipi: virus dell'influenza di tipo A, tipo B e tipo C. Esistono 16 sottotipi di HA e 9 sottotipi di NA.
Riso. 1. Classificazione dei virus dell'influenza A e delle specie di animali e uccelli - ospiti intermedi e finali nella catena di trasmissione dell'infezione all'uomo.
Sottotipo 16 (H16) dell'emoagglutinina scoperto di recente
Nota: ∗ HA 7 e NA 7-NA8 sono stati trovati anche nei cavalli
Nella fig. 1 mostra i sottotipi dei virus dell'influenza A e i loro ospiti intermedi e serbatoi naturali (uccelli migratori). I principali ospiti dei virus dell'influenza A sono quelle specie sensibili all'influenza.
Nella popolazione umana sono stati finora identificati solo tre sottotipi di virus dell’influenza A con HA1, HA2 e HA3. Allo stesso tempo, i virus contengono solo due tipi di neuraminidasi: NA1 e NA2 (Fig. 1). La loro circolazione stabile è stata dimostrata nel secolo scorso a partire dalla pandemia del 1918 (R.G. Webster et al., 1978; K.G. Nicholson et al., 2003).
I virus dell'influenza A (in misura minore B) hanno la capacità di modificare la struttura di HA e NA. Il virus dell’influenza A è caratterizzato da due tipi di variabilità:
- mutazioni puntiformi nel genoma virale con corrispondente variazione di HA e NA (deriva antigenica);
- sostituzione completa di una o entrambe le glicoproteine di superficie (HA e NA) del virus mediante riassortimento/ricombinazione (spostamento antigenico), che si traduce in una versione fondamentalmente nuova del virus che può causare pandemie influenzali.
Per il virus dell'influenza B, la variabilità antigenica è limitata solo dalla deriva, tk. non sembra avere un serbatoio naturale tra uccelli e animali. Il virus dell'influenza C è caratterizzato da un'elevata stabilità della struttura antigenica e ad esso sono associati solo focolai locali e casi sporadici della malattia.
Di un certo interesse comparsa di nuovi ceppi del virus dell’influenza nella popolazione umana e pandemie associate (Fig. 2). Nella fig. La tabella 2 mostra i principali spostamenti antigenici associati alle pandemie del 20° secolo causate dai virus dell’influenza A:
- nel 1918 la pandemia fu causata dal virus H1N1;
- nel 1957 - ceppo H2N2 A/Singapore/1/57;
- nel 1968 - ceppo H3N2 A/Hong Kong/1/68;
- nel 1977 - ceppo H1N1 A / URSS / 1/77 (molti scienziati non lo consideravano una pandemia, ma con l'avvento di questo ceppo si creò una situazione con la co-circolazione simultanea di 2 ceppi del virus dell'influenza A - H3N2 e H1N1).
Nel 1986, il virus A/Taiwan/1/86 provocò in Cina una massiccia epidemia di influenza A/H1N1 che durò fino al 1989. Le varianti drift di questo virus sono sopravvissute fino al 1995, causando epidemie localizzate e casi sporadici. Secondo i risultati degli studi di biologia molecolare, in questi anni si sono verificate molteplici mutazioni nel genoma del virus A/H1N1. Nel 1996 sono apparse due varianti antigeniche del virus influenzale A/H1N1: A/Berna e A/Pechino, la cui caratteristica non era solo antigenica, ma anche la disunità geografica. Così, in Russia, il virus dell'influenza A/Bern ha preso parte attiva all'epidemia influenzale del 1997-98. Nella stessa stagione, è stata registrata la circolazione dei ceppi virali A/Pechino nell'est del Paese. Più tardi nel 2000-2001. Il virus dell'influenza A/H1N1 è diventato l'agente eziologico dell'epidemia di influenza in Russia. I moderni virus influenzali A/H1N1 hanno una bassa attività immunogenica; gli isolati virali appena isolati interagiscono solo negli eritrociti dei mammiferi (gruppo 0 umano e porcellino d'India).
Riso. 2. Emersione di nuovi ceppi di virus influenzali nella popolazione umana e pandemie associate
Nel secolo scorso, i virus dell’influenza A hanno subito cambiamenti genetici significativi, provocando pandemie globali con elevata mortalità umana. La più grande pandemia influenzale (H1N1) si verificò nel 1918-1919. ("Spagnolo"). Il virus, apparso nel 1918, ha effettuato una deriva pronunciata, le sue varianti iniziale (Hsw1N1) e finale (H1N1) sono considerate spostamento. Il virus ha causato un’epidemia devastante che ha causato 20 milioni di vittime (la metà dei morti erano giovani di età compresa tra 20 e 50 anni (M.T. Osterholm, 2005).
Ricerca J.K. Tanbenberger et al., (2005) hanno dimostrato che il virus che causò la pandemia del 1918 non era un riassortimento tra il virus dell'influenza aviaria e il virus dell'influenza umana: tutti gli 8 geni del virus H1N1 erano più simili alle varianti del virus "aviario" che a quello umano (Fig. .3). Pertanto, secondo R.B. Belshe (2005), un virus dell'influenza aviaria, dovrebbe infettare (bypassando l'ospite intermedio) l'uomo, trasmettendosi da persona a persona.
È importante notare che i virus dell'influenza aviaria "partecipano" all'emergere di nuovi virus influenzali "umani", caratterizzati da un'elevata patogenicità e dalla capacità di causare pandemie (EG Deeva, 2008). Questi virus (H1N1, H2N2 e H3N2) avevano un diverso insieme di geni interni, la cui origine indica la loro relazione filogenetica con i virus aviari e suini.
Quali sono i meccanismi di origine dei ceppi pandemici e quali caratteristiche biologiche sono necessarie per l’emergenza di un virus altamente patogeno con potenziale pandemico?
I virus dell'influenza A sono caratterizzati da un'elevata incidenza di riassortimenti a seguito di un'infezione mista, dovuta alla segmentazione del genoma virale. La predominanza di un riassortinte di una determinata composizione genetica è considerato il risultato della selezione, in cui quello più adatto alla riproduzione in determinate condizioni viene selezionato da un ampio insieme di diversi riassortimenti (N.L. Varich et al., 2009). Le proprietà ceppo-specifiche dei segmenti genomici possono avere una forte influenza sulla composizione genetica dei riassortimenti in condizioni non selettive. In altre parole, la caratteristica dei virus influenzali è che otto segmenti genetici, in particolare il gene HA, mutano frequentemente e in modo imprevedibile. Il riassortimento svolge un ruolo importante nell’emergere di nuove varianti virali, in particolare nell’origine dei ceppi pandemici. E a volte non si può escludere la possibilità che durante una pandemia si manifesti un virus con maggiore virulenza.
Studi moderni hanno dimostrato che la struttura genetica del nuovo virus A/H1N1 è complessa e, come abbiamo notato nell'introduzione, include i geni dell'influenza suina che infetta i maiali del Nord America; geni dell'influenza suina che colpiscono i maiali in Europa e Asia; geni dell'influenza aviaria; geni dell’influenza umana. Essenzialmente, i geni del nuovo virus provengono da quattro fonti diverse. Una micrografia del virus dell'influenza A/H1N1 è mostrata in fig. 4.
Riso. 4. Micrografia del virus dell'influenza A/H1N1
L'OMS ha pubblicato le "Linee guida per i laboratori sull'influenza" e ha presentato nuovi dati sulla sequenza dei geni virali e sulla loro lunghezza del nuovo virus influenzale A/H1N1 riassortito (isolato - A/California/04/2009): HA, NA, M, PB1 , PB2, PA, NP, NS. Questi dati indicano la formazione di una nuova variante pandemica del virus, creando una vulnerabilità generale alle infezioni a causa della mancanza di difese immunitarie. Diventa chiaro che le varianti pandemiche del virus influenzale si verificano attraverso almeno due meccanismi:
- riassortimento tra virus influenzali animali/aviari e umani;
- adattamento diretto del virus animale/uccello all'uomo.
Per comprendere l’origine dei virus dell’influenza pandemica, è importante studiare le proprietà del serbatoio naturale dell’infezione e i percorsi evolutivi di questa famiglia di virus durante il cambiamento dell’ospite. È già ben noto e discutibile che gli uccelli acquatici sono il serbatoio naturale dei virus dell’influenza A (adattati a questi ospiti intermedi nel corso di molti secoli), come evidenziato dalla presenza di tutti i 16 sottotipi HA di questo virus. Attraverso le feci degli uccelli, che possono rimanere nell'acqua per più di 400 giorni (Influenza aviaria..., 2005), i virus possono essere trasmessi ad altre specie animali quando bevono l'acqua da un serbatoio. (KG Nicholson et al., 2003). Ciò è supportato dall’analisi filogenetica delle sequenze di acido nucleico di diversi sottotipi di virus dell’influenza A provenienti da diversi ospiti e da diverse regioni geografiche.
L'analisi delle sequenze geniche nucleoproteiche ha mostrato che i virus dell'influenza aviaria si sono evoluti con l'avvento di 5 linee ospiti specifiche: virus di cavalli selvatici e domestici, gabbiani, maiali e esseri umani. Inoltre (!) i virus dell'influenza umana e suina costituiscono il cosiddetto gruppo fratello, il che indica la loro stretta parentela e, ovviamente, un'origine comune. Il precursore dei virus dell'influenza umana e del classico virus suino sembra essere stato interamente di origine "aviaria". Nei paesi dell'Asia centrale, per ovvi motivi, la carne di maiale non è apprezzata e questi animali sono praticamente assenti nella zootecnia. Ciò porta al fatto che (a differenza della Cina, ad esempio), questa regione non ha il principale ospite intermedio nella popolazione di animali domestici: i maiali, quindi la probabilità di "nascita" di virus pandemici nella regione dell'Asia centrale è inferiore a in Cina, che deriva praticamente dai dati sull'analisi della loro origine (influenza aviaria, 2005). Esiste una fonte permanente di geni del virus dell’influenza pandemica (in uno stato fenotipicamente immutato) nel serbatoio naturale dei virus degli uccelli acquatici e degli uccelli migratori (R.G. Welster, 1998). Va tenuto presente che i precursori dei virus che causarono la pandemia di influenza spagnola (1918), così come i virus che furono all’origine del genoma dei ceppi pandemici Asia / 57 e Hong Kong / 68, sono ancora in circolazione tra la popolazione di uccelli selvatici con lievi cambiamenti mutazionali (Influenza Birds..., 2005).
Commenti
(visibile solo agli specialisti verificati dalla redazione di MEDI RU)
La prima menzione dell'influenza fu notata molti secoli fa, nel 412 a.C.
ANNO DOMINI una descrizione di una malattia simile all'influenza fu fatta da Ippocrate. Anche
epidemie simil-influenzali furono notate nel 1173. Prima documentato
pandemia influenzale che ci ha messo parecchio
vite, avvenuto nel 1580.
Nel 1889-1891 si verificò una pandemia moderatamente grave, causata da un virus del tipo H3N2.
La famigerata "influenza spagnola" causata dal virus H1N1 si verificò nel 1918-1920.
Questa è la pandemia più grave conosciuta.
Ha causato più di 20 milioni di vittime. Da "spagnolo"
Il 20-40% della popolazione mondiale è stata gravemente colpita. La morte è arrivata molto
veloce. Una persona potrebbe essere ancora assolutamente sana al mattino, a mezzogiorno si ammalerebbe e
morì al calar della notte. Coloro che non morivano nei primi giorni spesso morivano per complicazioni,
causati dall’influenza, come la polmonite. Una caratteristica insolita dello "spagnolo" era
che spesso colpiva i giovani (di solito a causa dell’influenza in primo luogo).
soffrono i bambini e gli anziani).
L'agente eziologico, il virus dell'influenza, fu scoperto da Richard Shope nel 1931.
Il virus dell’influenza A fu identificato per la prima volta dai virologi britannici Smith,
Andrews e Laidlaw (Istituto Nazionale per la Ricerca Medica, Londra) nel 1933
anno. Tre anni dopo, Francis isolò l’influenza B.
Nel 1940 fu fatta un'importante scoperta: il virus dell'influenza può esserlo
coltivato in embrioni di pulcino. Di conseguenza, nuovo
opportunità per studiare il virus dell’influenza.
Taylor isolò per la prima volta il virus dell’influenza C nel 1947.
Nel 1957-1958 ci fu una pandemia
Che si chiama "influenza asiatica", causata dal virus H2N2. Pandemia
iniziò nel febbraio 1957 in Estremo Oriente e rapidamente
diffuso in tutto il mondo. Solo negli Stati Uniti durante questa pandemia è morto
più di 70.000 persone.
Nel 1968-1969 si verificò una "influenza di Hong Kong" di media gravità causata da
il virus H3N2. La pandemia iniziò a Hong Kong all’inizio del 1968. Più spesso
il virus ha colpito gli anziani di età superiore ai 65 anni. Numero totale
33.800 persone sono morte a causa di questa pandemia.
Nel 1977-1978 si verificò una pandemia relativamente lieve.
Chiamata l'influenza "russa". Virus dell’influenza (H1N1) che ha causato questa pandemia
causò già un’epidemia negli anni ’50.
Pertanto, i nati dopo il 1950 furono i primi a soffrire.
Gli agenti patogeni dell'influenza appartengono alla famiglia degli orthomyxovirus, che comprende 3 generi di virus influenza: A, B, C. I virus dell'influenza contengono RNA, il guscio esterno, che contiene 2 antigeni: emoagglutinina e neuraminidasi, che possono modificare le loro proprietà, specialmente nel virus di tipo A. I cambiamenti nell'emoagglutinina e nella neuraminidasi causano l'emergere di nuovi sottotipi di virus che di solito sono malattie più gravi e più diffuse.
Secondo la nomenclatura internazionale, la designazione dei ceppi virali comprende le seguenti informazioni: genere, luogo di isolamento, numero di isolati, anno di isolamento, tipo di emoagglutinina (H) e neuraminidasi (N). Ad esempio, A/Singapore/l/57/H2N2 si riferisce a un virus del genere A, isolato nel 1957 a Singapore, avente una varietà di antigeni H2N2.
Le pandemie influenzali sono associate ai virus del genere A. I virus dell'influenza B non causano pandemie, ma le "ondate" locali di aumento dell'incidenza possono catturare uno o più paesi. I virus dell’influenza C causano casi sporadici della malattia. I virus dell'influenza sono resistenti alle basse temperature e al gelo, ma muoiono rapidamente se riscaldati.
Orthomyxovirus: virus dell'influenza A, B, C
Caratteristiche strutturali.
Gli orthomyxovirus sono virus avvolti (supercapside, "vestiti"), la dimensione media dei virioni va da 80 a 120 nm. I virioni hanno forma sferica. Il genoma è rappresentato da un RNA negativo segmentato (frammentato) a filamento singolo. Il virione ha un supercapside contenente due glicoproteine che sporgono sopra la membrana sotto forma di sporgenze (spine): emoagglutinina (HA) e neuraminidasi (NA). I virus dell’influenza A hanno 17 tipi antigenicamente distinti di emoagglutinina e 10 tipi di neuraminidasi.
Classificazione dei virus influenzali si basa sulle differenze negli antigeni nucleoproteici (divisi in virus A, B e C) e nelle proteine di superficie HA e NA. La nucleoproteina (chiamata anche antigene S) è strutturalmente costante e determina il tipo di virus (A, B o C). Gli antigeni di superficie (emoagglutinina e neuraminidasi - antigeni V), invece, sono variabili e determinano diversi ceppi dello stesso tipo di virus. I cambiamenti nell’emoagglutinina e nella neuraminidasi causano la comparsa di nuovi sottotipi di virus, che di solito causano malattie più gravi e più diffuse.
Le principali funzioni dell'emoagglutinina:
Riconosce il recettore cellulare - mucopeptide;
Responsabile della penetrazione del virione nella cellula, garantendo la fusione delle membrane del virione e della cellula; (L’emoagglutinina fornisce la capacità del virus di attaccarsi alla cellula.)
I suoi antigeni hanno le maggiori proprietà protettive. I cambiamenti nelle proprietà antigeniche (deriva e spostamento antigenico) contribuiscono allo sviluppo di epidemie causate da nuove Ag varianti del virus (contro il quale non si è formata sufficientemente l’immunità di gregge).
La neuraminidasi risponde per la diffusione dei virioni, insieme all'emoagglutinina determina le proprietà epidemiche del virus.
La neuraminidasi è responsabile, in primo luogo, della capacità di una particella virale di penetrare nella cellula ospite e, in secondo luogo, della capacità delle particelle virali di lasciare la cellula dopo la riproduzione.
Il nucleocapside è costituito da 8 segmenti di vRNA e proteine del capside che formano un filamento elicoidale.
Il ciclo vitale di un virus.
La replicazione degli orthomixovirus avviene principalmente nel citoplasma della cellula infetta, la sintesi dell'RNA virale viene effettuata nel nucleo. Tre tipi di RNA virus-specifici sono sintetizzati nel nucleo sul vRNA: mRNA messaggero positivo (un modello per la sintesi delle proteine virali), cRNA complementare a lunghezza intera (un modello per la sintesi di nuovi RNA virionici negativi) e vRNA virionici negativi (il genoma dei virioni appena sintetizzati).
Le proteine virali sono sintetizzate sui poliribosomi. Inoltre, le proteine virali nel nucleo si legano al vRNA, formando un nucleocapside. Lo stadio finale della morfogenesi è controllato dalla proteina M. Il nucleocapside, passando attraverso la membrana cellulare, viene ricoperto prima dalla proteina M, poi dallo strato lipidico cellulare e dalle glicoproteine supercapside HA e NA. Il ciclo riproduttivo dura 6-8 ore e termina con la gemmazione dei virioni appena sintetizzati.
Variabilità antigenica.
(Variabilità antigenica dei virus dell'influenza. La variabilità del virus dell'influenza è ben nota. Questa variabilità delle proprietà antigeniche e biologiche è una caratteristica fondamentale dei virus dell'influenza A e B. I cambiamenti si verificano negli antigeni di superficie del virus: emoagglutinina e neuraminidasi. La maggior parte probabilmente questo è un meccanismo evolutivo per l'adattabilità del virus per garantire la sopravvivenza. I nuovi ceppi di virus, a differenza dei loro predecessori, non si legano ad anticorpi specifici che si accumulano nella popolazione. Esistono due meccanismi di variabilità antigenica: cambiamenti relativamente piccoli (deriva antigenica ) e grandi cambiamenti (spostamento antigenico).)
La moderna divisione degli ortomixovirus in generi (o tipi A, B e C) è associata alle proprietà antigeniche delle principali proteine del nucleocapside (proteina nucleocapside - fosfoproteina NP) e della matrice dell'involucro virale (proteina M). Oltre alle differenze nelle proteine NP e M, gli ortomixovirus si distinguono per la più alta variabilità antigenica dovuta alla variabilità delle proteine di superficie HA e NA. Esistono due tipi principali di cambiamenti: deriva antigenica e spostamento antigenico.
Deriva antigenica a causa di mutazioni puntiformi che modificano la struttura di queste proteine. Il principale regolatore del processo epidemico nell'influenza è l'immunità della popolazione (collettiva). Come risultato della sua formazione, si verifica la selezione di ceppi con una struttura antigenica alterata (principalmente emoagglutinina), contro i quali gli anticorpi sono meno efficaci. La deriva antigenica mantiene la continuità del processo epidemico.
(Deriva antigenica - si verifica tra pandemie in tutti i tipi di virus (A, B e C). Si tratta di cambiamenti minori nella struttura degli antigeni di superficie (emoagglutinina e neuraminidasi) causati da mutazioni puntiformi nei geni che li codificano. Di norma, tali cambiamenti si verificano ad ogni risultato di Epidemie, poiché la protezione dalla precedente esposizione al virus viene mantenuta, sebbene sia insufficiente.)
Tuttavia, nei virus dell’influenza A è stata riscontrata anche un’altra forma di variabilità antigenica, lo spostamento antigenico.(shift) associato al cambiamento di un tipo di emoagglutinina (o neuraminidasi) in un altro, cioè sulla comparsa di una nuova variante antigenica del virus. Questo è raro ed è associato allo sviluppo di pandemie. Nell’intera storia conosciuta dell’influenza sono stati identificati solo pochi fenotipi antigenici che causano epidemie influenzali nell’uomo: HoN1, H1N1, H2N2, H3N2, cioè solo tre tipi di emoagglutinina (HA1-3) e due - neuraminidasi (NA 1 e 2). I virus dell'influenza di tipo B e C causano malattie solo nell'uomo, i virus dell'influenza A nell'uomo, nei mammiferi e negli uccelli. Il ruolo epidemico maggiore è svolto dai virus dell'influenza A più variabili, mentre i virus dell'influenza C sono privi di neuraminidasi e di solito causano un quadro clinico più lieve.
Si ritiene che lo spostamento antigenico sia il risultato dello scambio genetico (ricombinazione) tra virus influenzali umani e animali. Fino ad ora, non è stato definitivamente stabilito dove nel periodo interepidemico - al di fuori della popolazione umana (negli uccelli o nei mammiferi) o nella popolazione umana (a causa della persistenza a lungo termine, della circolazione locale) siano immagazzinati i virus che hanno esaurito la loro possibilità di epidemia per un po’.
Gli uccelli sono considerati gli ospiti primari e principali dei virus dell'influenza A che, a differenza degli esseri umani, hanno virus con tutti i 17 tipi di HA e 10 tipi di NA. Le anatre selvatiche sono ospiti naturali dei virus dell'influenza A, in cui l'agente patogeno si trova nel tratto gastrointestinale e non causa danni significativi ai proprietari. I virus mostrano le loro proprietà patogene quando passano ad altri uccelli e mammiferi. Tra i mammiferi l'importanza maggiore è attribuita ai maiali, che sono considerati un ospite intermedio e paragonati a un “vaso di miscelazione”.
(I moderni virus dell’influenza umana vengono trasferiti debolmente agli animali. Tutte le pandemie di influenza A dal 1930 sono iniziate in Cina, la principale porta di distribuzione è la Siberia (migrazione di massa degli uccelli).
H1N1-1930 Identificato in esseri umani, maiali, balene (1972), uccelli domestici e selvatici. È associato alla famosa pandemia di influenza spagnola. Questa tipologia è stata reintrodotta dal 1977.
L'H2N2 è stato rilevato dal 1957. negli esseri umani e negli uccelli. Periodicamente si verificavano epidemie associate a questi virus. Ora entrambi i tipi sono identificati in parallelo.
L'H3N2 fu identificato nel 1963. (Hong Kong).
Il virus A/Singapore/1/57 (H2N2) contiene tre geni del virus dell'influenza aviaria eurasiatica, il virus A/Hong Kong/1/68 (H3N2) contiene 6 geni del virus Singapore e due degli uccelli. Questi dati confermano che l'umanità riceve nuovi tipi epidemici di virus dell'influenza A dagli uccelli, l'ospite primario. La previsione più vicina è la possibilità dell'emergere di nuove varianti epidemiche del virus dell'influenza A che hanno emoagglutinina HA5 o 7 (è sufficiente sostituire uno o due aminoacidi nella loro struttura).)
La famiglia degli ortomixovirus (orto greco - corretto, tuha - muco) comprende virus influenzali di tipo A, B, C che, come i paramixovirus, hanno un'affinità per la mucina. I virus dell'influenza A infettano l'uomo e alcune specie animali (cavalli, maiali, ecc.) e gli uccelli. I virus influenzali di tipo B e C sono patogeni solo per l’uomo. Il primo virus influenzale umano fu isolato dall'uomo nel 1933 da W. Smith, C. Andrews e P. Laidow (ceppo WS) infettando furetti bianchi. Successivamente, questo virus fu assegnato al tipo A. Nel 1940, T. Francis e T. Medzhill scoprirono il virus dell'influenza di tipo B e nel 1949 R. Taylor - il virus dell'influenza di tipo C. con la loro variabilità antigenica. I virus dell'influenza sono divisi in tre tipi A, B e C. Il tipo A comprende diversi sottotipi che differiscono tra loro per i loro antigeni: emoagglutinina e neuraminidasi. Secondo la classificazione dell'OMS (1980), i virus influenzali umani e animali di tipo A sono suddivisi in 13 sottotipi antigenici per l'emoagglutinina (H1-H13) e 10 per la neuraminidasi (N1-N10). Di questi, i virus dell'influenza umana di tipo A comprendono tre emoagglutinine (HI, H2 e H3) e due neuraminidasi (N1 e N2). Il virus di tipo A indica tra parentesi il sottotipo di emoagglutinina e neuraminidasi. Ad esempio, il virus dell'influenza A: Khabarovsk/90/77 (H1N1).
